Спосіб вимірювання швидкості натрій водневого обміну

СІЮСІБ ВИМІРЮВАННЯ ШВИДКОСТІ НАТРІЙ.-ВОДНЕВОГО ОБМІНУ. Винахід відноситься до галузі медицини, асаме до фізіології клітини і може використовуватися для діанностнки функціонального стану клітинних мембран. Відомий спосіб вимірювання швидкості^а/Н-обміну / Wa,//e^J./ 7tok6ch'jf№fcf% шо включав дослідження біологічної субстанції,а саме міоцитів і вимірювання флуоресценсії протонного потоку на спектрофлюориметр і• Однак, відомий метод не дає можливості без використання барв ника 2,2--біс/2-карбоксиетил-5/6/-карбоксифлюоресцеіну/ВСЕС/ і ацетоксиметилового ефіру /AM/, які не виробляються вітчизняною промис ловістю, визначити швидкість Уа/Н- обміну. Технічним вирішенням задачі в удосконалення способу вимірюва ння швидкостіМ\а/Н-обміну при якому обивктом дослідження s еритроцити і приведена удосконалена формула розрахунку чим забезпечуєть ся визначення інтенсивності/а/Н-обміну і за рахунок цього діагнозується функціональний стан еритроцитарних мембран. Поставлена задача вирішується тим, шо в способі вимірювання шв швидкості^а/Н-обміну» який включає дослідження біологічної субстан ції та вимірювання концентрації іонівУа"1" на полум"яному фотометрі, згідно винаходу, виділяються з крові еритроцити готують системи , інгібіторів, додають їх в середовище інкубування еритроцитів після , цього визначають концентрацію гемоглобіну, гематокритнечисло та виз начають швидкістьУа/Н-обиіну за формулою: -V де: До- концентрація іонів >Va+ /мкМ/л клітин/ в середовиші інкубації з оубаїном /І мМ/, Да- концентрація іонівУа* /мкМ/л клітин/ в середовиші інкубації з оуабаїном ДмМД амілорицом/2мМ/. Цргематокрит. Т - час інкубації проб. Винахідницький рівень забезпечує неочевидність дослідження швид костіу^а/Н-обміну в еритроцитах без використання барвника /ВСЕС / і ацвтокснметилового ефіру. Спосіб здійснюється таким чином: Гепарин і зовану кров центрифугують, плазму і шар лейкоцитів видаляють, Еритрощви промивають магній-сахарозним розчином. З одержаній клітинній суспензії проводять вимірювання швидкості>а/Н-обміну, для чого клітини помішають в середовиша, що відрізняються між собою наявністю чи відсутністю аміляриду. Методом нолум"яної фотометрії у всіх пробах визначають концентрацію іонів>а+, приймаючи до уваги значення гематокриту і розраховують швидкість а/К-обміну за формулою Д/. Прикладо Методику проводять як описано визе: 5 мл гепаринузованої крові центрифугують /б 000^ :5хв/, плазму і шар лейкоцитів видаляють. Еритроцити 5 разів промивають ПО мМ ЩСІ% /осмоляльність 296- 5 мосМ/. Промиті клітини суспензують в розчині наступного складу /мМ/: М^СІ£- 75; саяяроза - 85; трис-іЮІ - 10 /рН 7,4 при 37°С/; глюкоза - 10. В одержаній клітинній сус пензії проводять вимірювання швидкості а/Н-обміну, для чого клітини помішають в середовища, то відрізняються між собою наявеі-стю чи відсутністю амілориду. Перше середовише містить І мМ оуаба-їну. Друге середов№ае додатково містить амілорид в концентрації ІмМ. Методом полум"яної фотометрії у всіх пробах визначають концентрацію іонів ./а*, приймаючи до уваги значення гематокриту /^«=5,714? Час інкубації проб становить 60 хв. івидкість^а/Н-обміну розраховують згідно рівняння /І/. - /268 -172/ . Л00-6.7І4/ л 35^309 60 . 5,714 /мкМІІл клiтин"J•#Iгo^ Даний метод дає можливість майже вдвічі швидше вимірювати шви дкість-^а/Н-обміну і без використання таких дорогих реактивів як ВСЕС, АИ, таурину, глютамату, карнітину, альбуміну, ніж за методикою /1989/. Львівський державний медични Винахідники: Панасюк о Думальська Мисаковець Тимочко М.Ф. • М.П«Павловський