Спосіб діагностики хвороб, що передаються статевим шляхом (сифіліс, снід, гепатит в та інші) та автоматизований пристрій для його виконання

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике болезней, передающихся половым путем. В качестве прототипа выбрана реакция Вассермана [1], при которой к испытуемой сыворотке добавляют кардиолипиновый и трепонемный антигены и комплемент (первая система), через 45 минут добавляют индикаторную систему (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка) - вторая система, 45 минут выдерживают в термостате и учитывают по степени гемолиза. Эта реакция унифицирована, повсеместно используется при обследовании отдельных групп населения (доноры, беременные и др.), при установлении диагноза, лечении и последующем наблюдении. Однако эта реакция имеет свои возможности и недостатки. Прежде всего длительность постановки - 180 минут чистого опыта, субъективизм учета, высокая стоимость, неспецифичность результатов, так как используются неспецифические антигены. Поэтому каждую положительную пробу крови исследуют дополнительно в РИФ или РИТ для выяснения наличия или отсутствия сифилитической инфекции. За прототип принят автоматизированный комплекс фирмы "Zabsystems" - "Zabsystems; EMS" [2], содержащий систему измерения и сравнения, спектрофотометр, включающий монохроматор с дискретным диспергирующим элементом на 8-12 длин волн, систему измерения оптического сигнала, встроенную персональную электронно-вычислительную машину, необходимую для анализа полученных данных. К его недостаткам можно отнести то, что благодаря своей конструкции замеры оптической прозрачности (плотности) осуществляются в 8-12 фиксированных точках по спектру и нет возможности на основании этих замеров построить непрерывную кривую. В основу изобретения поставлена задача разработать способ диагностики заболеваний, передающихся половым путем (сифилис, СПИД, гепатит В и др.), и устройство для его осуществления путем постановки реакции по укороченной схеме реакций связывания комплемента, т.е. соединение испытуемой сыворотки (антитело), антигена и комплемента без индикаторной системы. При наличии в испытуемой сыворотке антител к соответствующему антигену образуется комплекс антиген-антитело, который сорбирует на себе комплемент. Процесс связывания объясняют выпадением ультрамикроскопического осадка невидимого невооруженным глазом, который и поглощает комплемент. Этот ультрамикроскопический осадок и идентифицирует разработанное нами автоматизированное устройство, это позволяет быстро, надежно и качественно диагностировать наличие заболеваний, передающихся половым путем, что является техническим результатом. Вышеизложенное позволяет утверждать о причинно-следственной связи между задачей, существенными признаками и техническим результатом. Новизна заявляемого способа заключается в том, что соединяют испытываемую сыворотку (антитело) с соответствующим антигеном или антигенами и комплементом без индикаторной системы (укороченная схема реакции связывания комплемента), например сухой трепонемный и кардиолипиновый антиген при сифилисе, спектрофотометрируют в диапазоне длин волн от 360 до 740 нм с интервалом 5 ± 1 нм и минимальным шагом сканирования 0,5 нм, строят кривую, сравнивают ее с эталонными кривыми, заложенными в устройстве, и при исследовании сыворотки больного (сифилис как модель) кривая поглощения в диапазоне длин волн 500-600 нм носит резонансный характер и при этом наблюдается один или два пика поглощения, а в случае отрицательного результата кривая носит пологий характер, пики поглощения отсутствуют. Способ осуществляется следующим образом: в день постановки опыта проводят подготовительную работу (сливание испытуемых сывороток со сгустков, и х инактивация, приготовление изотонического раствора натрия хлорида). Разводят ингредиенты: антиген кардиолипиновый, трепонемный и комплемент по титру, указанному на этикетке. Качественную реакцию для каждой испытуемой сыворотки крови проводят в 3-4 пробирках с двумя антигенами. При использовании новых антигенов число пробирок соответственно увеличивается. Одновременно ставят для контроля заведомо положительную, слабоположительную и отрицательные сыворотки крови. Каждую испытуемую инактивированную сыворотку крови, разведенную 1:5 изотоническим раствором натрия хлорида, разливают по 0,25 мл в три пробирки, из которых третья является контролем. В первую пробирку добавляют 0,25 мл трепонемного антигена, во вторую - кардиолипинового антигена, в третью (контрольную) - изотонического раствора натрия хлорида. Комплемент, разведенный по рабочей дозе, добавляют по 0,25 мл во все опытные и контрольные пробирки. Проводят инкубацию в термостате при температуре 37 град С в течение 45 минут, Кюветы заполняют опытными образцами (по 0,5 мл из содержимого каждой пробирки) и производят учет. Полученные результаты накапливают и составляют банк данных. Выдаются ответы словами "Реакция положительная", "Реакция слабоположительная'', "Реакция сомнительная", "Реакция отрицательная" или в виде кривых. Аналогом можно считать систему для иммуноферментного анализа фирмы "Labsistem" Финляндия. Однако корённым недостатком ее является то, что она делает измерения лишь в 8-12 точках по спектру и нет возможности на основании этих замеров построить непрерывную кривую. Рядом фирм выпускаются приборы с близкими по назначению функциями (приборы для иммуноферментного анализа), сравнительные характеристики приведены в таблице. Новизна автоматизированного устройства для осуществления способа диагностики болезней, передающихся половым путем, заключается в том, что осуществляется снятие непрерывной кривой в диапазоне длин волн от 360 до 740 нм и содержит спектрофотометр, включающий монохроматор (СФ), волоконно-оптический тракт{ВОТ) для передачи излучения от монохроматора к кюветному отделению и к системе измерения (СИ) оптического сигнала, прошедшего кюветное отделение, далее через интерфейс полученный сигнал вводится в ПЭВМ в цифровом виде и формирует базу данных, создаваемую после обработки введенных значений сигнала, ПЭВМ через интерфейс выдает необходимые сигналы для системы управления (СУ) сервоприводом комплекса, которые приводят всю систему в состояние, необходимое для осуществления последующих измерений, все необходимые питающие и опорные напряжения выдаются блоком питания (БП), распечатка необходимой информации производится на алфавитно-цифровом печатающем устройстве (АЦПУ). На чертеже представлена блок-схема заявляемого устройства, Принцип работы базируется на измерении спектральной зависимости оптического поглощения от длины волны, которая определяется компенсационным методом в узком спектральном диапазоне длин волн с возможностью перестройки как в ультрафиолетовую область (0,2-0,450 мкм) спектра, так и в ближнюю инфракрасную (0,8-1,2 мкм). Идентификация комплексов антиген-антитело проводится путем анализа спектральной кривой с эталонными спектральными зависимостями и по специальной программе, полученные данные заносятся в базу данных (процесс самообучения). Работа комплекса заключается в следующем: после установки турели с кюветами, содержащими сыворотку крови, смешанную с тест-системой, производится включение комплекса, с блока питания основные и опорные напряжения подаются на все блоки комплекса, далее на основании встроенного программного теста происходит самотестирование основных установок и начальное позиционирование, после этого высвечивается надпись "готов к работе". После самотестирования в заданном диапазоне длин волн происходит сканирование спектра, изменение длины волны осуществляется с помощью системы управления, которая включает сервопривод монохроматора, далее излучение определенной длины волны передается по волоконно-оптическому тракту к объекту исследования, и попадает на датчики системы измерения, которая определяет уровень аналогового сигнала, поступающего на вход интерфейса, преобразующего его в цифровой сигнал, и далее в ПЭВМ, где происходит его накопление (база данных) и обработка по разработанному специальному программному обеспечению в оболочке WIN 95, записанная характеристика объекта исследования хранится в ПЭВМ и в случае необходимости распечатывается на АЦПУ с реквизитами больного. Пример. Были взяты образцы сывороток больных сифилисом и лиц, обследуемых на сифилис (12 больных, истории болезни №№552, 554, 556, 559, 560, 2055, 568, 1963, 542,1984 и 5 обследуемых на сифилис, истории болезни №№316, 2022, 516, 1972, 1883). Ход исследований: сливают сыворотки со сгустков, инактивируют, разводят их физиологическим раствором 1:5 (0,1 мл сыворотки и 0,4 мл физиологического раствора), разводят антигены кардиолипиновый, сухой трепонемный (шт. Никольса) или ультраозвученный трепонемный (шт. Рейтера) и комплемент по титру. Каждую испытываемую сыворотку, разведенную 1:5 физиологическим раствором, разливают по 0,25 мл в 3 или 4 пробирки, в зависимости от числа антигенов. В первую пробирку добавляют 0,25 мл трепонемного антигена, во вторую - кардиолипинового антигена, а третья служит контролем и в нее добавляют 0,25 мл физиологического раствора. Во все пробирки добавляют по 0,25 мл комплемента. Смесь инкубируют при 37 град С в термостате в течение 30-45 минут. Затем содержимым каждой пробирки заполняют кюветы и проводят учете автоматизированном устройстве. Учет проводится в течение 2-3 минут с выдачей результатов на экран монитора. Для сравнения полученных результатов указанные выше образцы сывороток исследовались параллельно по реакциям микропреципитации, Вассермана, иммобилизации бледных трепонем, реакции иммунофлуоресценции. Получение идентичных результатов по указываемым методам свидетельствует о высокой точности предложенного способа. Таким образом, использование способа диагностики болезней, передающихся половым путем (сифилис как модель, СПИД, гепатит В и др.) и устройства для его осуществления позволит повысить качество диагностики, обеспечит высоким процент выявляемости (94-96), уменьшит число неспецифических результатов, исключит субъективный фактор учета, уменьшит время проведения реакции, обеспечит специфическую диагностику (при использовании специфических антигенов), обеспечит сохранение в памяти ПВМ полученных данных.