Спосіб встановлення чутливості еритроцитних na, k, cl-котранспортерів до хронічної алкогольної інтоксикації

Спосіб встановлення чутливості еритроцитних Na,K,Cl-котранспортерів до хронічної алкогольної інтоксикації, що включає вимірювання швидкості опосередкованого котранспортерами переміщення іонів Na+ в інкубованих при фізіологічних умовах еритроцитах, виділених з крові пацієнтів, який відрізняється тим, що швидкість Nа,К,С1котранспортерів вимірюють в клітинах, витриманих в інкубаційних середовищах, у яких величини осмоляльності, рН та температури знаходяться у фізіологічному, підфізіологічному та надфізіологічному діапазонах. (19) (21) u200708102 (22) 17.07.2007 (24) 25.10.2007 (72) ВЛОХ ІРИНА ЙОСИПІВНА, UA, ГУЛЬ АНДРІЙ ЛЮБОМИРОВИЧ, UA, МОРОЗ ОЛЕКСАНДРА МИРОСЛАВІВНА, UA, ПАВЛЮСТ ЛЮДМИЛА ПАВЛІВНА, UA, ШКАВОЛЯК АНДРІЙ ВАСИЛЬОВИЧ, UA (73) ЛЬВІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ДАНИЛА ГАЛИЦЬКОГО, UA (56) 3 27427 4 уточнює переваги впровадження нових підходів до (осмоляльність - 300мОсмоль/кг; температура лабораторної діагностики іонних мембранопатій. 37°С; рН - 7,4) та при створенні в ньому Вивчення характеру трансмембранного екстремальних умов (осмоляльність - 200 та переміщення іонів при хронічній алкогольній 400мОсмоль/кг; температура - 40°С та 43°С; рН інтоксикації базується, в основному, на тому 6,4 та 8,4). очевидному факті, що існує можливість Зареєстровані результати засвідчують, що аналізувати численні іон-транспортувальні механізмам, при посередництві яких відбувається механізми при посередництві тих самих методів, Nа,К,Сl-котранспортування, належить істотна роль що їх застосовують при дослідженні ферментів [2]. в патогенезі хронічного алкоголізму, оскільки Транспортна кінетика характеризується, перш за відхилення його швидкості виявляються при все, максимальною швидкістю трансмембранного змінах більшості аналізованих параметрів переміщення неорганічного іону. Характеристика оточуючого еритроцит середовища. Наведені в цього процесу включає встановлення таблиці дані засвідчують, що Na,К,Сlтемпературної, кислотно-лужної та осмоляльної котранспортери, при посередництві яких залежності. здійснюється переміщення іонів Na+ в еритроцитах Спосіб здійснюють таким чином. осіб, що страждають на хронічний алкоголізм, У хворих, що страждають на хронічний найбільшу чутливість проявляють до алкоголізм, забір крові проводять у гепаринізовані модулюючого впливу осмоляльності пробірки. Кров центрифугують (600g, 5хв), плазму і позаеритроцитного середовища. Встановлення шар лейкоцитів відкидають. Ізольовані еритроцити чутливості вказаних іон-транспортувальних 5 разів промивають 110ммоль/л Mg Сl2. механізмів під час клінічного обстеження хворого Залежність швидкості еритроцитного на хронічний алкоголізм може служити корисним переміщення іонів Na+, що здійснюється шляхом індикатором при аналізі розмаїття шкідливого Nа,К,Сl-котранспортування, від осмоляльності впливу алкоголю на еритроцитну мембрану. встановлюють, використовуючи, як основне, інкубаційне середовище такого складу (ммоль/л): NaCl-130, KCl-5, MgCl2-l, KCl-1, глюкоза - 10; Реакційна швидкість Nа,К,Сl-котранспортування (мм NaH2PO4-1, трис - НСl-10, бичачий сироватковий суспензії-1 1год-1) в еритроцитах у осіб контрольної групи та у альбумін 2%. Значень осмоляльності інкубаційного середовища на рівні 200, 300 та 400мОсмоль/кг досягають шляхом додавання Хворі на хронічний відповідних кількостей сахарози. Контрольне Умови інкубації Група порівняння n=30 алкоголізм n=50 вимірювання величин осмоляльності здійснюють осмометром. Певну кількість ізольованих 200мОсмоль/кг; 0,41+/-0,03 0,54+/-0,05 еритроцитів, суспензованих в основному 37°С, рН 7,4 z середовищі, склад якого є ідентичним до 300мОсмоль/кг; 0,58+/-0,06 0,70+/-0,09 наведеного вище, розділюють на три частини, 37°С, рН 7,4 вносять в колби Ерленмейєра, поміщують у водні 400мОсмоль/кг; 0,82+/-0,07 0,94+/-0,09 термостати при температурах 37°С, 40°С і 43°С і 37°С, рН 7,4 y витримують впродовж 60хв. Решту клітин 300мОсмоль/кг; 0,62+/-0,05 0,74+/-0,07 інкубують в середовищах, рН яких становить 6,4, 40°С, рН 7,4 7,4, 8,4. Швидкість Nа,К,Сl-котранспортерів 300мОсмоль/кг; 0,81+/-0,09 0,54+/-0,06 визначають за різницею концентрацій іонів Na+ в 43°С, рН 7,4 * нульовий та завершальний періоди інкубації, що її 300мОсмоль/кг; здійснюють у присутності двох транспортних 0,77+/-0,09 0,54+/-0,04 37°С, рН 6,4 інгібіторів - овабаїну та фуросеміду [3]. 300мОсмоль/кг; Вимірювання концетрації іонів Na+ проводять 0,64+/-0,05 0,81+/-0,09 37°С, рН 8,4 методом полум’яної фотометрії [4]. У біохімічні дослідження способу, який заявляється, було включено 50 хворих на хронічний алкоголізм осіб обох статей без вираженої соматичної патології та при відсутності захворювань, які могли б проявитись явищами іонної мембранопатії. Хворі перебували на стаціонарному лікуванні у 7 та 21 відділеннях Комунального закладу "Львівська обласна психіатрична лікарня". У групу порівняння були об'єднані 30 практично здорових нормотензивних нормоглікемічних осіб. У використаних як експериментальні транспортні моделі еритроцитах проведено кількісну оцінку швидкості Nа,К,Сlкотранспортування. Здійснено порівняння особливостей вказаної транслокації цих іонів в еритроцитах при інкубації клітин в середовищі, стан якого наближений до фізіологічного Примітка: z - р