Флуоресцентний маркер для діагностики онкологічних захворювань

Застосування препарату Гіперфлав як флуоресцентного маркера для діагностики онкологічних захворювань. (19) (21) 97094691 (22) 03.02.1998 (24) 16.10.2000 (33) UA (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р. (72) Безпалько Людмила Василівна, Дец Сергій Мар'янович, Крицька Таїсія Миколаївна, Левицька Зоя Василівна, Шаламай Анатолій Севастянович 28774 Лактоза 0,170 г Стеарат кальцію 0,009 г На очищений і збагачений гіперіцинами сухий екстракт звіробою, Гіперфлав, і на діагностичний препарат Гіперфлав в капсулі розроблені фармакопейні статті. Технологія отримання сухого екстракту Гіперфлав полягає в багатоступеневій екстракції рослинної сировини з наступним відділенням стеринів і хлорофілів. Підбір екстрагентів в умовах екстракції дозволяє досягнути чітко контрольованого 5% вмісту гіперіцинів і відділення флуоресцентних домішок хлорофілів. Значний вміст флавоноїдів в Гіперфлаві не відбивається на погіршенні спектральних характеристик фотосенсибілізаторів гіперіцинів. В процесі сорбції, в тканині шлунка флавоноїди, ймовірно, швидко мігрують з поверхневих шарів шлунка і піддаються метаболічним перетворенням. З іншого боку, флавоноїди мають зовсім інший спектр флуоресценції, ніж гіперіцини і тим самим не зменшують їх флуоресцентні властивості. За хімічною будовою гіперіцин і псевдогіперіцин є конденсованими поліциклічними похідними антрахінонового ряду, а псевдогіперіцин, як похідна від основної речовини, відрізняється наявністю гідроксильної групи в боковому метильному радикалі. Обидві речовини практично не відрізняються своїми фізико-хімічними властивостями і мають ідентичні спектральні характеристики в діапазоні від 450 до 600 нм. Вміст псевдогіперіцину в рослинній сировині може значно коливатись в залежності від виду рослин звіробою і часу його заготівлі. Інтерес до гіперіцинів значно виріс в останнє десятиріччя і безпосередньо зв'язаний з широким спектром їх біологічних властивостей. В експериментах на культурах клітин і на тваринах показана висока антивірусна і протипухлинна активність гіперіцинів. В модельних дослідних виявлено, що антиретровірусна дія обох сполук обумовлена інгібіруванням вірусної протеїнкінази. Фотосенсибілізуючу дію гіперіцинів знайдено при опроміненні ВІЛінфікованих лімфоцитів і клітин, інфікованих лейкоз-індукуючим вірусом. В закордонній практиці нейтралізація ВІЛінфікованих клітин здійснювалась при концентрації гіперіцину 5 мкг/мл з періодом освітленості 15 хв. Приклад використання препарату Гіперфлав як флуоресцентного маркеру для діагностики пухлин кишково-шлункового тракту. Препарат Гіперфлав приймається хворим, підготовленим протягом доби, в кількості 7 капсул протягом 4-х годин. Фіброскопічна флуоресцентна діагностика здійснюється за допомогою фіброгастроендоскопу моделі Olympus CIF-1 Т10 (Японія). Через інший світлопровід флуоресцентне випромінювання подається для реєстрації на спектрофотометрії. При візуальному спостереженні ендоскопічної картини слизистої оболонки шлунка, що опромінюється світлом лазера, у випадку новоутворення спостерігаються різні свічення тканин. Так, здорові ділянки тканин мають блідо-жовте флуоресцентне свічення, тоді як уражена частина випромінює яскраво-жовте флуоресцентне свічення. Зареєстровані спектрофотометром спектри флуоресценції здорової ділянки (крива А) і злоякісної ділянки (крива Б) наведені на фігурі. Визначення наявності злоякісного утворення встановлюють за законом коефіцієнта при D, розрахованого за формулою: J -J D = 600 535 J 600 + J 535 де J600 - інтенсивність флуоресценції при максимумі 600 нм; J535 - інтенсивність флуоресценції при мінімумі 535 нм. Розрахунок значень D проводиться для обох кривих флуоресценції. У випадку, якщо D0 ділянка діагностується як уражена пухлиною. Вибірковість накопичення пухлиною гіперіцинів цілком зрозуміла, якщо прийняти до уваги її високий сорбційний і біохімічний потенціал, обумовлений інтенсивністю протікання метаболічних процесів. Приклад Хвора П., 1953 р. народження. Історія хвороби № 4629, поступила в клініку 30.11.1996 р. зі скаргами на болісні відчуття в епігастральній ділянці після прийняття харчів. Діагноз при прийомі в лікарню - виразкова хвороба шлунка. Дія проведення фіброскопічної флуоресцентної діагностики за 4 години перед дослідженням пацієнту орально ввели 7 капсул Гіперфлаву. За добу до прийняття капсул пацієнт був підготовлений до цих досліджень. Візуальним фіброскопічним оглядом був поставлений діагноз каллезної виразки шлунка (розмір 3´4 см) з метапластичними ознаками. За результатами фіброскопічної флуоресцентної діагностики при візуальному огляді ендоскопічної картини слизистої шлунка хворої було виявлено нерівномірне флуоресцентне свічення тканин. Так, ділянка онтрального відділення шлунка світилась яскраво-розовим кольором, в той час як прилеглі здорові ділянки слизистої мали блідожовте забарвлення. Після реєстрації спектрів флуоресценції здорової ділянки і ділянки з яскраво-розовим свіченням за вище наведеною формулою були розраховані значення D для обох ділянок слизистої шлунка. Для кривої А D=-0,36, тоді як для кривої Б з інтенсивним піком при 600 нм D=0,6З. За результатами фіброскопічної флуоресцентної діагностики шлунка хворій з одночасним проведенням спектрального аналізу і повторним ендоскопічним оглядом була виявлена ділянка локалізації злоякісного новоутворення, поставлений діагноз - аденокарценома. Гістологічним аналізом поставлено кінцевий діагноз - рак шлунка II ступеня. Хвора прооперована, ускладнень не відмічено. 2 28774 Препарат Гіперфлав застосовується при фіброскопічній флуоресцентній діагностиці на 36 хворих. Діагноз злоякісного онкологічного захворювання встановлено в 26 хворих. У 10 пацієнтів онкологічних захворювань не виявлено. Загальна перевірка клінічною діагностикою підтвердила 23 діагнози онкологічних захворювань, тоді як діагностика із застосуванням препарату за прототипом давала 15% помилкових діагнозів. Після проведення досліджень не було виявлено побічних ефектів і ускладнень. 2. Lam S., Palcic В., Mclean D., Hung J., Korbelik M., Profio A.E., Detection of lung cancer using low dose Photofrin II // Chest. - 1990. - Vol. 97. - p. 333-337. 3. Braginskaja O.V., Dzbonovski N.N. Fluorescent diagnostcs of human gastric cancer and sodium fluorescein accumulation in the experimental cancer in rats. // Lasers in the Life Scinces. - 1993. - Vol. 5, No. 4. - pp. 291-298. 4. Q.V. Werf, R.E. Saxton, A. Chang, D. Horton and others. Hypericin: A new laser phototargeting agent for human cancer cells. // Laryngoscope. 1996. - Vol. 106, No. 4 - pp. 479-483. 5. H. Yu, S.T. Wolford, R. Kegode, Wei Zhao, G.D. Osweiler. Hypericininduced photoxity in cultured fibroblasts and swine eritrocytes. // Photochemistry and photobiology. - 1996. - Vol. 64, No. 1. pp. 168-173. Джерела інформації 1. Лисовский В.А., Щедрунов В.В. и др. // Люминесцентный анализ в гастроэнтерологии. - Ленинград: Наука, 1984, - с. 236. Фіг. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 34 прим. Зам._______ __________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 __________________________________________________________ 3