Спосіб прогнозування тромботичних ускладнень в акушерській практиці

Спосіб прогнозування тромботичних ускладнень в акушерській практиці, що включає проведення лабораторних тестів на рівень фібриногену та протромбіновий індекс, який відрізняється тим, що додатково проводять тести на розчинний фібрин, рівень фактору X, рівень антитромбіну III та рівень протеїну С, причому тест на рівень фактору Х проводять тільки у тому разі, коли значення протромбінового індексу перевищує 100%. (19) (21) 98074200 (22) 31.07.1998 (24) 15.12.2000 (33) UA (46) 15.12.2000, Бюл. № 7, 2000 р. (72) Голота Владислав Якович, Гамісонія Манана Шальвівна, Макогоненко Євген Митрофанович, Платонова Тетяна Миколаївна (73) ІНСТИТУТ БІОХІМІЇ ІМ. О.В. ПАЛЛАДІНА НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ 31304 Висновок. Визначення рівня фібриногену є одним з основних та широко застосованих в клінічній практиці тестів. Точність визначення та коректна трактовка результатів цього тесту залежить від багатьох факторів. Ретроспективний аналіз 57 архівних історій пологів показав, що у 83% випадках рівень фібриногену відповідав нормі для здорової людини, в той час коли за літературними даними середній рівень фібриногену для цієї групи хворих відповідав 5-6 г/л. Таким чином, ретроспективний аналіз архівних історій за клініко-лабораторними тестами показав, що існує конча необхідність розробки досить простих доступних для виконання і в той же час високоінформативних прогностичних тестів, які дозволяють діагностувати предтромботичне становище і контролювати лікувальні заходи. В основу винаходу поставлено задачу вдосконалити спосіб прогнозування тромботичних ускладнень в акушерській практиці шляхом використання нового комплексу тестів, що забезпечить надійність та точність прогнозування тромботичних ускладнень в післяпологовому періоді. Поставлена задача вирішується тим, що у відомий спосіб прогнозування тромботичних ускладнень, який включає проведення лабораторних тестів на рівень фібриногену та протромбіновий індекс додатково вводять проведення тестів на розчинний фібрин, рівень фактора X, рівень антитромбіну III та рівень протеїну С. Причому тест на рівень фактора Х проводять тільки у тому разі, коли після визначення індексу перевищує 100%. Вказаний технічний результат досягається об'єднанням найбільш адекватних і точних тестів у єдиний комплекс. Запропонований спосіб включає тести на визначення маркерів тромбінемії та гіперкоагуляції. До цих тестів належить визначення рівня фібриногену, розчинного фібрину, протромбінового індексу, рівня фактора Х та інгібіторів зсідання крові - протеїну С та антитромбіну III. При цьому визначення рівня фібриногену проводять за допомогою тромбіноподібних ферментів, які вилучають з отрути змій (рептилаза, атроксин, анцистрон-Н). Застосування цих ферментів замість тромбіну дає можливість визначити рівень фібриногену при гепаринотерапі, тобто введення їх суттєво підвищує надійність і точність тесту на визначення рівня фібриногену, що дуже важливо для вірогідної оцінки клінічного стану (Белицер В.А., 1983; Платонова Т.Н., 1993). Поряд з визначенням рівня фібриногену та розчинного фібрину (РФ) важливими показниками гіперкоагуляції є визначення рівня фактора X, який значно підвищується при вагітності. Це - фізіологічно-адаптаційна реакція організму на очікувану кровотечу при пологах. Для найбільш повної оцінки предтромботичного стану рекомендовано контролювати протромбіновий індекс поряд з визначенням рівня фактора X. Тобто, спочатку виконати тест "протромбіновий час", а якщо протромбіновий індекс значно вище 100%, то необхідно визначати рівень фактора X. Комплекс складається із таких тестів: визначення рівня фібриногену, розчинного фібрину, протромбінового індексу, рівня фактора X, протеїну С та антитромбіну III, які виконуються у вищенаведеній послідовності. Приклад виконання способу. Спочатку виконують тести на визначення рівня фібриногену. Хід виконання: в пробірку вноситься 0,2 мл цитратної плазми, що досліджується, 1,7 мл 0,1 М фосфатного буферу рН 7,0, потім мікропіпеткою додати 0,1 мл розчину Анцистрону-Н (0,7 NIH од.) і помістити у водяну баню при 37°С. Через 30 хвилин згусток викручується та розчиняється у 5 мл 1,5% оцтовій кислоті. Приклад 2 Проби плазми 1 2 3 4 5 Вміст фібриногену в плазмі крові, г/л При додаванні При додаванні тромбіну анцистрону Н 1,35 3,55 не визначається 1,77 1,18 2,37 1,26 не визначається 2,62 3,38 Для визначення рівня розчинного фібрину (РФ) використовувався метод (Варецька Т.В. та співавт., Клин. лаб. діагностика, 1992 р. № 7-8, с. 10-14). Цей метод є найбільш вдалим на теперішній час функціональним методом визначення вмісту РФ. Метод використовувати просто, він досить чутливий та високоінформативний, тоді як протамінсульфатний метод складний для виконання та трактовки, тому що отримані результати залежать від активності препаратів протамінсульфату. Хід виконання: у конічні центрифужні пробірки з 0,25 мл плазми, що досліджується, вносять 0,25 мл 0,1 М фосфатного буферу рН 7,5 +0,6 М NaCL 0,2%, 6-аміногексанова кислота і 0,1% цитрату натру, старанно перемішують, додають 0,4 мл 1 М фосфатного буферу рН 7,5, перемішують і залишають на 30 хв при температурі 22°С. Результати оцінюють візуально: відсутність ледь помітного помутніння - негативний результат, чітке помутніння - позитивний (+), пластівцеподібна каламуть (0,03 мкг/мл), пластівці, нитки (0,045 мкг/мл), гелеподібний осад (0,06 мкг/мл). Протромбіновий час: У скляну конічну пробірку вносять 0,1 мл реагенту тромбопластину та 0,1 мл розчину кальцію, прогрівають 1 хв при 37°С, потім додають 0,1 мл плазми, що досліджується. Час зсідання плазми візуально визначають за утворенням згустку при помірному трясінні пробірки у водяному термостаті. Протромбіновий індекс визначають по відношенню часу зсідання донорської плазми до часу зсідання плазми хворого (%). Рівень фактора Х визначається за допомогою хромогенного субстрату S2767. Хід виконання: роботу проводиться за методикою, запропонованою фірмою Sigma. Хід виконання тесту на визначення рівня антитромбіну III (AT-III): у пробірку вносять 0,1 мл плазми, що досліджується, та 0,9 мл розчину тромбіну; суміш інкубують 15 хв при 37°С, поміс 2 31304 тивши в пробірку скляну паличку з жорсткуватою поверхнею. Згусток видаляють з пробірки, віджимаючи паличкою рідину. 0,1 мл сироватки переносять до чистої пробірки та додають до неї 0,1 мл розчину фібриногену (0,3%). Візуально визначають час зсідання суміші. Для кількісного визначення рівня АТ-III в плазмі будують стандартну калібрувальну пряму. Для цього досліджують час зсідання в зразках донорської плазми, розведеної розчином хлориду натру. Хід визначення протеїну С: у скляну пробірку вносять 0,1 мл цитратної плазми, 0,1 мл реагенту Параметри гемостазу Фібриноген, г/л Розчинний фібрин, мкг/л Протромбіновій індекс, % Фактор Х, % Протеїну С, % Антитромбін III, % АЧТЧ, 0,1 мл ферменту активатора протеїну С, який вилучено з отрути Щитомордника звичайного. Суміш інкубують у водяній бані при температурі 37°С протягом 3 хв, потім додають у пробірку 0,1 мл 0,025 М розчину CaCl2 та засікають час зсідання. Контрольний час зсідання донорської плазми - 120-135 с. Для кількісного визначення рівня протеїну С використовують калібрувальну пряму. (Лукинова Н.И. и соавт., 1995). Приклад 3 Норма До операції Після операції 2,5-3,0 0,0 100 100 100 100 4,4 0,075 108 115 63 69 5,95 0,1 100 109 72 92 Висновок. Значно підвищений рівень фібриногену вказує на надмірну гіперкоагуляцію. Підвищення протромбінового індексу та фактора Х вказує на порушення рівноваги між прокоагулянтною ланкою системи гемостазу та фізіологічними інгібіторами зсідання крові. Виявлення маркеру тромбінемії - РФ - вказує на активацію гіперкоагуляційного потенціалу, що є реальною загрозою тромбоутворення. Підвищення потенціалу коагуляційної ланки системи гемостазу та його активація (поява маркерів тромбінемії) поряд зі зменшенням фізіологічних антикоагулянтів (протеїну С та антитромбіну III) є загрозою тромбоутворення, тому потре Після операції з тромбопрофілактикою 6,3 0,03 93 100 76 92 бує постійного контролю простими та ефективними тестами. Медичний результат досягається при виконанні алгоритму діагностики предтромботичного стану в акушерській практиці із застосуванням комплексу тестів, які дозволяють об'єктивно оцінити стан прокоагулянтної ланки системи гемостазу, визначити рівень фізіологічних інгібіторів та виявити маркер тромбінемії - розчинний фібрин. Комплекс включає проведення лабораторних тестів на визначення рівня фібриногену, розчинного фібрину, фактора X, антитромбіну III, протеїну С та протромбіновий індекс. Тест на рівень фактора Х проводять тільки в тому разі, коли після визначення індексу показники перевищують 100%. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ __________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 __________________________________________________________ 3