Застосування епіталону як препарату для корекції змін про- та антиоксидантного захисту при стресі в експерименті

Застосування епіталону як препарату для корекції змін про- та антиоксидантного захисту при стресі в експерименті. (19) (21) u200803519 (22) 19.03.2008 (24) 11.08.2008 (46) 11.08.2008, Бюл.№ 15, 2008 р. (72) ПІШАК ВАСИЛЬ ПАВЛОВИЧ, UA, ЛОМАКІНА ЮЛІЯ В'ЯЧЕСЛАВІВНА, U A, ВИСОЦЬКА ВІОЛЕТ 3 34455 тового режима // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 2006. - N3. - C. 22-26.] Використання корисної моделі, що заявляється, підтверджується наступними експериментальними даними. Досліди виконано на 54 старих (20-24міс) нелінійних білих щурах-самцях масою 300±10г. Впродовж 1міс до початку та протягом експерименту тварин утримували у віварії за умов сталої температури (18-21°С), вологості повітря (50-55%) в окремих клітках з вільним доступом до води та їжі. Фотоперіодичні зміни в організмі тварин моделювали впродовж 1 тижня шляхом зміни режимів освітлення за допомогою лампи штучного сві тла (інтенсивність освітлення не менше 500 Лк: 1) 12.00С (світло): 12.00Т (темрява); 2) 24.00С:00T; 3) 00С:24.00T. Іммобілізаційний стрес моделювали на 8-му добу експерименту шля хом утримування тварин впродовж 1год у пластикових кліткахпеналах. Для проведення дослідження використовували синтетичний пептид шишкоподібної залози - епіталон у дозі 0,17мкг/100г щура, в/м, синтезований у Санкт-Петербурзькому інституті біорегуляції та геронтології ПЗО РАМН (Росія). Декапітацію тваринам проводили о 14.00год під легким ефірним наркозом згідно з положеннями "Європейської конвенції щодо захисту хребетних тварин, яких використовують в експериментальних та інших наукових цілях" (Страсбург, 1986). За 24год до експерименту тварин утримували без їжі з вільним доступом до води. Цільну кров стабілізували розчином ЕДТА (1,0мг/мл крові), розділяли на плазму (центрифугування при 3000об/хв, 15хв) і еритроцити (з триразовим промиванням охолодженим фізіологічним розчином натрію хлориду). У плазмі крові визначали вміст церулоплазміну (ЦП) [Камышников B.C. Справочник по клиникобиохимической лабораторной диагностике: в 2 т. Мн.: Интерпрессервис, 2003. - Т. 2. - С. 74-75.] і HS-груп [Ме щишен І.Ф., Григор'єва Н.П. Ме тод кількісного визначення HS-груп у крові // Бук. мед. вісник. - 2002. - Т.6, №2. - С. 190-192.] та ОМБ [Ме щишен І.Ф. Метод визначення окисномодифікованих білків плазми (сироватки) крові / Бук. мед. вісник. - 1998. - Т.2, №1. - С.156-158.]; в еритроцитах - рівень малонового альдегіду та активність каталази [Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. - Мн.: Интерпрессервис, 2003. - Т. 2. С. 74-75.]. Отримані результати оброблені методом варіаційної статистики за допомогою програми "BIOSTAT". Результати проведених досліджень вказують на те, що одногодинний іммобілізаційний стрес у старих щурів за умов 12.00С:12.00Т впродовж семи діб викликав активацію ПОЛ (рівень малонового альдегіду зростав на 46,0%) та окисної модифікації білків (показник ОМБ зростав вдвічі порівняно з контролем). За цих же умов експерименту активність каталази еритроцитів та вміст HS-груп у плазмі крові зменшилися на 51,6 і 42,7% відповідно, а рівень церулоплазміну підвищився на 80,8%. Уведення стресованим тваринам епіталону наближало рівні в крові МА, ОМБ та активність 4 каталази до норми; рівень ЦП та HS-груп проявляв чітку тенденцію наближення до величин контролю. Постійне освітлення (тварини четвертої групи) посилило (у 2,5 раза) окисну модифікацію білків плазми крові та активацію каталази (на 24,6%). Відносно інших показників, то вони не відрізнялися від тварин контрольної групи (12.00С:12.00Т). Іммобілізаційний стрес на фоні тривалого освітлення призводив до різкого підвищення в крові вмісту МА (на 55,6%) та ОМБ (майже втричі порівняно з контролем) і незначного зростання величини церулоплазміну (на 30,0%). Активність каталази та рівень HS-груп знижувалися на 38,4 і 32,7% відповідно. Уведення епіталону на фоні постійного освітлення та іммобілізаційного стресу призвело до вираженої тенденції щодо нормалізації вивчених показників: рівні в крові МА (зменшився на 7,3%), ОМБ (зменшився на 47%) та церулоплазміну (на 25%), а активність каталази та вміст HS-груп наближалися до рівня контролю. За умов постійної темряви жоден із досліджуваних показників про- та антиоксидантної системи не зазнавали вірогідних змін порівняно з тваринами контрольної групи. Іммобілізаційний стрес на фоні тижневої темряви викликав, як і у всіх попередніх дослідних групах тварин, підвищення в крові рівня МА, ОМБ, церулоплазміну та зниження активності каталази та вмісту HS-гр уп. Уведення таким тваринам епіталону нормалізувало показники МА (зменшення на 25%), ОМБ (зменшення на 42%), каталази (підвищення на 41%) та ЦП (зменшення на 18%), а вміст HS-груп залишався вірогідно нижчим порівняно з тваринами контрольної групи. Проведені дослідження вказують на те, що гіпофункція (постійне освітлення) та гіперфункція (постійна темрява) епіфіза мозку по-різному впливають на показники про- та антиоксидантного стану крові старих щурів. Так, при гіпофункції шишкоподібної залози (7-ми добове освітлення) має місце активація процесів ліпопероксидації, окиснювальної модифікації білків та пригнічення антиоксидантного захисту, тоді як при гіперфункції (7ми добова темрява) не спостерігається вірогідних змін цих показників щодо контролю. Цей факт можна пояснити різною функціональною активністю шишкоподібної залози залежно від світлового періоду доби. Іммобілізаційний стрес за умов зміненого фотоперіоду викликає різку активацію вільнорадикальних процесів на фоні зниження антиоксидантного захисту крові старих щурів. Уведення тваринам епіталону за цих умов призводить до нормалізації досліджуваних показників, що може вказувати на його безпосередню (як месенджера вільних радикалів), чи посередню (через продукцію мелатоніну шишкоподібною залозою) антиоксидантну дію. Таким чином, при вивченні корегуючого впливу епіталону на показники ПОЛ - а саме на рівень малонового альдегіду при іммобілізаційному стресі доведено, що епіталон найефективніше відновлює показник МА при гіперфункції епіфіза мозку на 25%. При дослідженні процесів вільного радикального окиснення, показник ОМБ найкраще прореагував на вплив епіталону за умов гіпофункції 5 34455 шишкоподібної залози - відмічається зменшення цього показника на 47%. Технічний результат: використання епіталону має виражений вплив на стан про- та антиоксида Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова 6 нтного захисту при стресі в експериментальних тварин та дозволить розширити його сферу застосування. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601