Спосіб моделювання герпесу слизової оболонки порожнини рота

Спосіб моделювання герпесу слизової оболонки порожнини рота, який передбачає інфікування експериментальних тварин шляхом ін'єкційного введення у слизову оболонку порожнини рота після попередньої обробки 10% розчином трипсину 38151 ня 10% розчину трипсину. Для визначення ефективності противірусних препаратів на поверхню ерозій, які утворюються на 3-7-й день від початку інфекції, здійснюють аплікацію розчину противірусного препарату [4]. Указаний спосіб забезпечує відтворення гострої форми герпесу СОПР для наступного вивчення особливостей патогенезу захворювання, створення і визначення ефективності різних методів терапії. Протягом першого тижня смертність морських свинок від генералізації герпетичної інфекції перевищує 30%, до кінця експерименту доживає лише 25% тварин. Тому відтворення рецидиву герпесу СОПР не передбачається, а результати вивчення патогенезу гострого герпесу СОПР екстраполюються на рецидивуючі форми інфекції. Завдання, яке вирішується в даному винаході, полягає у створенні експериментальної моделі герпесу СОПР на білих щурах лінії Вістар, яка б адекватно відтворювала особливості патогенезу рецидивуючої форми інфекції. Технічний ефект, який досягається, полягає в можливості вивчення головних патогенетичних механізмів рецидивуючого герпесу слизової оболонки порожнини рота і можливості визначення клінічної і протирецидивної ефективності лікування. Поставлена задача вирішується завдяки тому, що у відомому способі моделювання герпесу слизової оболонки порожнини рота, який передбачає інфікування експериментальних тварин шляхом ін'єкційного введення у слизову оболонку порожнини рота після її попередньої обробки 10% розчином трипсину 0,1 мл інфекційного матеріалу вірусу простого герпесу першого типу 105106 БУО/мл і спонтанне формування пухирців та ерозій на слизовій оболонці порожнини рота на 3-й - 7-й день, згідно з винаходом, як експериментальних тварин використовують тижневих білих щурів лінії Вістар масою 9-10,5 г, а для відтворення рецидиву після інфікування додатково здійснюють аплікацію гелю простін Е2 на слизову оболонку порожнини рота під легким ефірним наркозом протягом 34-36-го днів, після чого на 38-40-й день очікують спонтанне формування пухирців і ерозії на слизовій оболонці порожнини рота. Відмінною особливістю способу моделювання герпесу слизової оболонки порожнини рота, згідно з винаходом, є те, що як експериментальних тварин використовують тижневих білих щурів лінії Вістар масою 9,0-10,5 г, а для відтворення рецидиву після інфікування, додатково здійснюють аплікацію гелю простін Е2 на поверхню слизової оболонки порожнини рота протягом 34-36-го днів, після чого на 38-40-й день очікують спонтанне формування пухирців і ерозії на слизовій оболонці порожнини рота. Це дозволяє відтворити адекватну модель саме рецидивуючого герпесу слизової оболонки порожнини рота, надає можливість вивчати особливості патогенезу інфекції на різних етапах її розвитку та забезпечити меншу смертність експериментальних тварин. З доступних літературних джерел такий спосіб моделювання герпесу СОПР не відомий. Спосіб моделювання герпесу СОПР здійснюють наступним чином. Герпетичне ураження СОПР відтворюють на тижневих білих щурах лінії Вістар масою 9-10,5 г шляхом ін'єкції 0,1 мл ВПГ-1 з інфекційним титром 105-106 БУО/мл в слизову оболонку порожнини рота після попереднього втирання 10% розчину трипсину (піддослідна група). Контрольну груп у складають щурі такого ж віку і маси, яким за аналогічною схемою у СОПР ін’єкційно вводять 0,1 мл фізіологічного розчину після попереднього втирання 10% розчину трипсину. Протягом 3-7-го днів від початку інфікування у всі х тварин піддослідної групи виникає гострий герпес СОПР. У тварин контрольної групи не спостерігаються ознаки ураження СОПР. На 11-13-й день експерименту у щурів, які вижили, спостерігається повне зникнення клінічних ознак гострої форми захворювання. Протягом 34-36-го днів від початку інфікування слизову оболонку порожнини рота тварин піддослідної і контрольної груп змащують гелем простін Е2 один раз на день під легким ефірним наркозом. На 38-40-й день експерименту у щурів піддослідної групи очікують виникнення клінічних ознак рецидиву герпетичної інфекції СОПР – гіперемія, гінгівіт, п ухирці і ерозії на СОПР, губах, мордочці. У контрольній групі вказаних ознак не спостерігається. Для лабораторного підтвердження герпетичної етіології захворювання здійснюють процедуру вір усологічної верифікації. Конкретний приклад здійснення. 10.12.99 р. для експериментального дослідження були відібрані 105 тижневих білих щурів лінії Вістар (54 самці, 51 самка) вагою 9-10,5 г, які знаходились у гніздах разом із самками. Слизову оболонку порожнини рота 65 щурів (33 самці, 32 самки) обробили 10% розчином трипсину, після чого у її товщу в ділянці правого кутика рота ввели по 0,1 мл інфекціиного матеріалу ВПГ-1 105106 БУО/мл. Контрольну гр упу склали 40 щурів аналогічного віку і маси (21 самець, 19 самок), яким після обробки СОПР 10% розчином трипсину ін'єкційно вводили 0,1 мл фізіологічного розчину за аналогічною схемою. Протягом 14-23.12.99 р. у щурів піддослідної групи спостерігались ознаки гострої форми герпесу СОПР - порушення харчової поведінки, зменшення рухомості, гіперемія, гінгівіт, пухирці і ерозії на СОПР, губах, шкірі мордочки. 9 щурів загинули від нейроінфекції. У щурів контрольної групи ознак герпетичної інфекції не відзначали. Протягом 12-14.01.2000 р. слизову оболонку порожнини рота щурів піддослідної групи, які вижили, та контрольної групи, змащували гелем простін Е2 під легким ефірним наркозом. 1618.01.2000 р. у 42 щурів піддослідної групи виникли клінічні ознаки рецидиву герпесу СОПР. У щурів контрольної групи клінічних проявів рецидивуючого герпесу СОПР не спостерігали. Для підтвердження етіологічної ролі ВПГ-1 узяли зішкреби з поверхні ерозій і вміст пухирців, біологічний матеріал кожної проби розвели у 2 мл культурального середовища і внесли у моношар культури клітин НЕр-2. 24-26.01.2000 р. були визначені характерні для герпесу ознаки цитопатичної дії вірусу на культурі клітин НЕр-2. Рідину з поверхні культури клітин зібрали і використали для стандартної процедури ідентифікації ВПГ-1 імунопероксидазним методом. Для вивчення головних механізмів патогенезу рецидивуючого герпесу СОПР здійснили забої щурів піддослідної та контрольної груп 19.01.2000 2 38151 p., 26.01.2000 p., 2.02.2000 p., 9.02.2000 p., матеріал для вірусологічного, імунологічного та морфологічного дослідження забирали та вивчали згідно з діючими вимогами. Для визначення ефективності лікування 14 щурів були розподілені на 2 групи. Препарати, ефективність яких вивчалась, вводили дозатором per os та здійснювали аплікацію їхніх розчинів на поверхню СОПР протягом 19-26.02.2000 p., 16.02.2000 p. здійснили забій усіх тварин лікувальних груп і 6 тварин контрольної групи із забором і вивченням матеріалу для вірусологічного, імунологічного та морфологічного дослідження. Перевагами запропонованого способу перед прототипом є те, що він крім того, що дозволяє відтворити адекватну модель саме рецидивуючого герпесу СОПР, надає можливість вивчати особливості патогенезу інфекції на різних етапах її розвитку, забезпечує меншу смертність експериментальних тварин, передбачає визначення клінічної та протирецидивної ефективності різних методів лікування для підвищення економічності. Джерела інформації 1. Ходак Л.А. С учасні погляди на герпесвірусні інфекції // Інфекційні хвороби. - 1997. - № 4. С. 42-44. 2. Евстропов А.Н., Яворская В.Е., Галегов Г.А. Лечение экспериментальной герпетической инфекции противовоспалительными средствами // Вопросы вирусологии. - 1996. - № 2. - С. 66-69. 3. Вектемиров Т.А., Чекунов Э.В., Анджепаридзе О.Г. Орофациальный герпес мышей – экспериментальная модель для изучения противогерпетических препаратов // Ме тодологические проблемы экспериментальной химиотерапии вирусных инфекций. - Минск,1980. - С. 138-139. 4. Рашков М., Дундаров Г., Вылев И., Дундаров С. Использование модели герпетичесого стоматита для исследования противовирусних средств // Вопросы вирусологии. - 1991. - № 3. С. 242-243. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3