Спосіб експресної оцінки ефективності імунізації

Спосіб експресної оцінки ефективності імунізації, що включає дослідження сироваткових рівнів тиреоїдних гормонів в індуктивній фазі імуногене 3 39026 сіб. Самцям щурів лінії Wistar вводили різні типи антигенів. Результати дослідження динаміки змін сироваткових рівнів гормональних показників (тиреотропного гормону, тироксину, трийодотироніну та кортикостерону) та динаміки формування гуморальної імунної використано для побудови математичної моделі, що відтворює кількісні параметри залежності рівня антитілогенезу від характеру реакції вказаних гормональних показників на імунізацію (докладніше в прикладі 1). Використання методів лінійного регресійного аналізу з виключенням недостовірних коефіцієнтів регресії дозволило одержати наступну емпіричну функцію регресії (ЕФР): AT n = -1,098 - 0.306Т3n- 7+0,0335Т4n-14; (1) R2 = 81%; SАТ = 0,032; де: AT n - сироваткова концентрація специфічних антитіл МО/мл на n добу після імунізації; Т3n-7 сироваткова концентрація трийодотироніну за 7 діб до терміну прогнозу, нмоль/л; T4n-14 - сироваткова концентрація тироксину за 14 діб до терміну прогнозу, нмоль/л; R2 - коефіцієнт детермінації; SАТ - середньоквадратичне відхилення залишкової помилки ЕФР. Всі коефіцієнти рівняння високо достовірні (Р < 0,001); якість отриманої ЕФР характеризується високим значенням коефіцієнту детермінації R2. Таким чином, застосування способу, що заявляється, дозволяє отримати перший прогноз очікуваного на 14 добу рівня антитілогенезу за результатами дослідження сироваткової концентрації тироксину до імунізації та трийодотироніну на 7 добу після імунізації. Розрахувати очікуваний рівень гуморальної відповіді наприкінці продуктивної фази імуногенезу (28 доба) можна за результатами дослідження концентрації тироксину на 14 добу після імунізації та трийодотироніну на 21 добу після імунізації. Суттєвими ознаками рішення що заявляється є використання кількісних параметрів, що характеризують сироваткові рівні тироксину (Т4) та трийодотироніну (Т3) в індуктивній та/або на початку продуктивної фази імуногенезу, дослідження яких проводять з інтервалом в 7 діб. Цифрові значення коефіцієнтів в ЕФР мають достовірну прогностичну цінність виключно за цієї умови. Комплекс тироксин та трийодотиронін, відповідно до рішення, що заявляється, є необхідним та достатнім комплексом гормональних показників, що дозволяють прогнозувати рівень антитілогенезу. Це підтверджено емпіричними даними, отриманими при перевірці адекватності побудованої математичної моделі на експериментальному матеріалі (Приклад 2). Приклад 1. Одержання емпіричної функції регресії (ЕФР). Імуногормональні взаємодії в процесі формування гуморальної імунної відповіді моделювали з використанням поліномів з лаговими змінними. Лаговими є будь-які впливові зміни, які спостерігаються «у минулому». Вони позначаються, наприклад, Т-t, Т3-t , T 4-t і т.п., де t - лаг, що означає кількість діб, що пройшло до того, як концентрація антитіл прийме значення у час прогнозу. Оскільки метою дослідження було виявлення прогностично 4 го значення гормонального впливу на специфічний антитілогенез на 14, 21 та 28 добу після щеплення, то як лаги було прийнято концентрації гормонів за 7 й 14 діб до строку прогнозу. У цьому випадку структура нашого поліному з лаговими змінними набуває виду: AT = E(VAT); VAT = b0 + b1T-7 + b2Т4-7 + b3Т3-7 + -7 b4K + b5T-14 + b 6T4-14 + b 7T3- 14 + b7T 3-14 + b8K-14 , (2) де AT - концентрація антитіл, E(VAT) - не негативна функція аргументу VAT, що приймає значення: Е (VAT) = 0, коли поліном VAT < 0 та Е (VAT) = VAT , коли VAT ³ 0; bi - емпіричні коефіцієнти регресії; Т - сироваткова концентрація тиреотропного гормону (ТТГ), мМО/л; Т4 - сироваткова концентрація тироксину, нмоль/л; Т3 - сироваткова концентрація трийодотироніну, нмоль/л; К - сироваткова концентрація кортикостерону, нмоль/л. Для розрахунку коефіцієнтів використано експериментальний матеріал, отриманий на самцях щурів лінії Wistar 3- та 20-місячного віку в процесі формування імунної відповіді на АДП-вакцину. Препарат вводили підшкірно, о 10 годині ранку в дозі 15 ЛФ дифтерійного та 5 ОЗ правцевого анатоксинів у 0,25мл препарату відповідно моделі імунної відповіді, що було розроблено раніш [4]. В експерименті було 14 груп по 3 тварини в кожній. Кров для аналізів відбирали після декапітації щурів до імунізації та у динаміці розвитку імунної відповіді через 3, 7, 14, 21 та 28 діб після щеплення. Тварин, що отримували фізіологічний розчин, забивали на третю добу після імунізації. Концентрацію тиреотропіну, тироксину та трийодотироніну визначали радіоімунологічним методом з використанням стандартних наборів реактивів "TSH IR MA", "Total T4 RIA", "Total T3 RIA" виробництва IMMUNOTECH (Чеська республіка) та установки для радіоімунохімічних досліджень "НАРКОТЕСТ". Специфічні антитіла визначали у сироватці крові в реакції пасивної гемаглютинації за допомогою стандартного комерційного "Діагностикума еритроцитарного правцевого антигенного рідкого", серія 44-608 з активністю 1:1280, 1:2800, виготовлених АОВТ "Біомед" ім. I.I. Мечникова. Статистичну обробку результатів дослідження виконували на ПК за допомогою пакету прикладних програм "Statistika V.6". Обробка експериментальних даних методом лінійного регресійного аналізу з виключенням недостовірних коефіцієнтів регресії в гіпотетичному поліномі (2) дозволила отримати ЕФР (1). AT = -1,098 - 0,306Т3-7 + 0,0335Т4-14 ; (1) R2 = 81%; SАТ = 0,032; де: AT - сироваткова концентрація специфічних антитіл МО/мл; T4-14 - сироваткова концентрація тироксину за 14 діб до терміну прогнозу антитілогенезу, нмоль/л; Т3-7 - сироваткова концентрація трийодотироніну за 7 діб до терміну прогнозу, нмоль/л; R2 - коефіцієнт детермінації; SАТ - середньоквадратичне відхилення залишкової помилки ЕФР. Позначення лагових змінних для зручності представлено у вигляді: AT n - сироваткова концентрація специфічних антитіл МО/мл на n добу піcля імунізації; Т3n-7 - сироваткова концентрація трийодотироніну за 7 діб до терміну прогнозу, нмоль/л; 5 39026 T4n-14 - сироваткова концентрація тироксину за 14 діб до терміну прогнозу, нмоль/л. В результаті формула набуває вигляду: AT n = -1,098 - 0,306Т3n- 7 + 0,0335T4n-14 Приклад 2. Розрахунок рівня протиправцевих антитіл. Для розрахунку рівня протиправцевих антитіл на 21 добу після щеплення використовували концентрацію трийодотироніну на 14 добу після щеплення (Т321-7), що становила 1,72нмоль/л та концентрації тироксину на сьому добу після щеплення (Т421-14), що становила 82,96нмоль/л. Очікуваний 6 рівень антитілогенезу (АТр) розраховуємо за ЕФР (1): ATр = -1,098 - 0,306Т321-7 + 0,0335Т421-14 = 1,098 - 0,306 ´ 1,72 + 0,0335 ´ 82,96 = -1,098 - 0,53 + 2,779 = 1,15 (3) Емпіричні дані AT = 1,30МО/мл. Погрішність розрахунку DАТ = AT - АТр = 0,15МО/мл. Нижче наведені результати порівняння прогнозованих та реальних рівнів протиправцевих антитіл, отриманих в експериментальних умовах. Таблиця Аналіз погрішностей розрахунків прогнозованих рівнів протиправцевих антитіл при імунізації щурів АДПанатоксином (МО/мл) № досліду Термін (доба) 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 2 14 14 14 14 14 14 21 21 21 21 21 21 28 28 28 28 28 28 Рівень протиправцевих антитіл (МО/мл) Результат розрахунку Емпіричні дані (AT) (АТр) 3 4 0,150 0,280 0,150 0,328 0,150 0,170 0,030 0 0,150 0,170 0,030 0,093 1,000 1,154 1,000 0,821 1,000 0,775 1,000 1,376 1,000 1,328 0,250 0,983 2,000 1,870 2,000 1,506 2,000 1,778 1,000 0,565 0,500 0,543 0,750 0,626 Дані, наведені в таблиці дозволяють скласти уявлення про прогностичну цінність способу, що заявляється та підтверджують можливість його здійснення. Перелік посилань: 1. Role of thymic peptides as transmitters between the neuroendocrine and immune systems. Dardenne M. // Ann. Med. - 1999.Oct; 31 Suppl 2:349. 2. Neuroendocrine regulation of autoimmune/inflammatory disease. Stemberg E.M. // J. Endocrinol. - 2001. - V. 169, №3. - P. 429-435. 3. Патент №59798 A(UA); MKB: G01N33/48; Комп’ютерна в ерстка А. Крулевський Погрішність розрахунку (DАТ) 5 -0,13 -0,1528 -0,02 0,03 -0,02 -0,063 -0,154 0,179 0,225 -0,376 -0,328 -0,733 0,13 0,494 0,222 0,435 -0,043 0,124 A61K31/00 СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ РЕЗЕРВІВ ІМУНОГЕНЕЗУ. Заявник: ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИН АРНОЇ МЕДИЦИНИ. Винахідник: Бабкін Ми хайло Валерійович, Стегній Борис Тимофійович, Симиренко Людмила Львівна, Стеценко Володимир Іванович, Кучерявенко Роман Олексійович. Номер заявки: 20021210247. Дата подання заявки: 18.12.2002. Дата набрання чинності: 15.09.2003. 4. Волянський А.Ю. та ін. Моделювання процесу специфічного антитілогенезу за умов імунізації щурів АДП-анатоксином // Інфекційні хвороби. 2007. - №4. - С. 62-66. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601