Cпосіб виділення цефаклору або його солі з суміші після реакції ферментативного ацилювання

1 Способ выделения цефакпора или его соли из смеси после реакции ферментативного ацилирования, который предусматривает добавление антрахинон-1,5-дисульфоновой кислоты или ее соли с щелочным металлом к названной смеси, в результате чего образуется соль цефаклор/антрахинон-1,5дисульфокислоты в соотношении 2 1 2 Способ по п 1 , в котором реакционная смесь после реакции ацилирования включает соединение формулы В патенте США № 3 816 253 описан ферментный процесс получения цефалоспоринов путем конденсации аминокислотного производного и 7-аминоцефалоспоринового ядра В патентной заявке США № 07/874 257, поданной 24 апреля 1992 года (Х-8505), описан усовершенствованный ферментный процесс получения цефалоспоринов, предусматривающий конденсацию соответствующего 7-аминоцефалоспоринового ядра с амино Зоя 3 Способ по п 2, в котором указанная реакционная смесь после реакции ацилирования включает фенилглицин или его соль 4 Способ по п 3, в котором указанная реакционная смесь после реакции ацилирования включает D-фенилглицинметиловый эфир или его соль 5 Способ по п 1, в котором антрахинон-1,5дисульфокислоту добавляют в количестве между примерно 0,5 молей и примерно 2 моля на 1 моль цефаклора 6 Способ по п 1, в котором указанное добавление проводят при рН от примерно 1,0 до 4,0, а температура при этом составляет от примерно 0 до примерно 25°С 7 Способ по п 1, в котором дополнительно включают стадию выделения названной соли цефаклор/антрахинон-1,5-дисульфокислоты 8 Способ по п 5, в котором кислоту добавляют в количестве между примерно 0,5 и примерно 0,7 моль на 1 моль цефаклора 9 Способ по п 6, в котором рН составляет от примерно 1,3 до примерно 1,7, а температура - от 0 до 10°С 10 Способ выделения соли цефаклора из смеси после реакции ферментативного ацилирования, содержащей D-фенилглицинметиловый эфир, 7АССА и цефаклор, который включает добавление антрахинон-1,5-дисульфоновой кислоты или ее соли с щелочным металлом к упомянутой смеси для образования и осаждения соли цефаклор/антрахинон-1,5-дисульфоновой кислоты в соотношении 2 1 и отделение осажденной соли от смеси после реакции кислотой До сих пор после такой реакции ферментного ацилирования искомое соединение, цефаклор, оказывался в сложном окружении, содержащем не только ядро, но и фенилглицин, D-фенилглицинметиловый эфир и их соли Ввиду сложности этой смеси цефаклор выделяли, пропуская ее через несколько колонн Разумеется, это приводило к потере конечного продукта и отнимало много времени о О 41910 Следовательно, необходим был процесс избирательного выделения цефаклора из сложной смеси после реакции ацилирования Краткое описание изобретения Оказалось, что существует возможность избирательно выделить цефаклор или его соль после реакции ферментного ацилирования из смеси, содержащей ядро, фенилглицин, D-фенилглицинметиловый эфир и их соли путем обработки прореагировавшей смеси антрахинон-1,5-дисульфоновой кислотой или ее солью щелочного металла Антрахинондисульфоновая кислота образует соли и с другими перечисленными выше соединениями, но добавление кислоты избирательно высаждает из ферментной среды соль 2 1 цефаклора с антрахинон-1,5-дисульфоновой кислотой В этом и заключается эффективный, быстрый процесс выделения цефаклора из прореагировавшей смеси после ферментного ацилирования Это крайне избирательное осаждение соли цефаклор/кислота оказалось неожиданным Сама эта соль описана в европейской патентной заявке № 341991, опубликованной 15 ноября 1989 года Описание изобретения Процесс, предложенный настоящим изобретением, может быть использован для выделения цефаклора или его соли, соответствующих формуле I Ферментный процесс происходит, как показано на схеме 1 Схема 1 Фермент ацилазу, используемый в ферментном процессе, можно получить из любого известного микробного источника Среди подходящих микроорганизмов - следующие Xantomonas, Pseudomonas, Aeromonas, Eschenchia, Arthrobacter, Corynebactenum и Bacillus Предпочтительным является использование пенициллин-ацилазы, полученной из Eschenchia Coh ATCC 9637 (№ 9637 в Американской коллекции типовых культур) Ферментное ацилирование и последующее высаждение проводятся в водной среде Однако можно использовать подходящие органические растворители этиленгликоль, низшие спирты (например, метанол, этанол, изопропанол, 2-бутанол), ацетон и т п Ферментное ацилирование можно проводить при температурах, принятых для этого в отрасли, а последующее высаждение - при температуре от около 0°С до около 25°С Предпочтительным является интервал от 0°С до 10°С Антрахинон-1,5-дисульфоновую кислоту добавляют к ацилирующей среде в количестве от около 0,5 молей до около 2 молей на моль цефаклора, подлежащего осаждению Предпочтительным является количество кислоты от 0,5 до 0,7 молей на моль цефаклора, подлежащего осаждению Кислота может быть превращена в соль щелочного металла (натрия или калия) Шаг осаждения/выделения можно осуществлять при рН от около 1,0 до около 4,0 Предпочтительным является интервал рН от около 1,3 до около 1,7 Регулировать рН можно путем добавления подходящей кислоты, например, соляной, и/или основания, например, триэтиламина Из выделенной соли цефаклора с кислотой стандартными способами можно приготовить цефаклора гидрат Например, соль можно растворить в смеси диметилформамида с водой и поднять рН смеси до около 5,7, чтобы из нее выкристаллизовался сольват цефаклора в диметилформамиде После этого сольват добавляют в воду при низком рН (0,5-1,0), чтобы смесь растворилась, и при рН 3,5 выкристаллизовывают из раствора гидрат цефаклора Ниже даны иллюстрации к настоящему изобретению Препарат 1 7-(О-2-аммоний-2-фенилацетамид)-3-хлорЗ-цефем-4-карбоксилат, внутренняя соль 7-АССА (соединение 1) (0,9388 г, 4,0007 ммоль) и 96,0 мл НгО соединяют в химическом стакане рН составляет 4,12 В стакан добавляют три моля ІЧНз (1,78 мл) рН составляет 7,57 Затем в стакан добавляют D-фенилглицинметилового эфира гидрохлорид (соединение 2) (4,7594 г, 23,602 ммоль) рН составляет 5,68 Смесь охлаждают до 5°С и добавляют к смеси три моля ІЧНз (1,90 мл), чтобы довести рН до 7,00 Добавляют фермент (6,1442 г, 940 МЕд/гядра) Хроматографический анализ дает следующий порядок прохождения реакции 41910 Время (мин) РН Температура °С Остаток соединения 1 , % Остаток соединения 2, % Остаток соединения 3, % 0 7,00 6 100 100 85 6,28 5 9,2 67,1 91,4 120 180 6,16 5,97 4 4,5 9,1 8,9 64,3 63,7 91,5 91,8 200 5,91 4,5 8,8 65,3 93,0 В момент времени = 200 мин смесь фильтруют (чтобы удалить ставший неподвижным фермент) и получают на месте указанное в заголовке вещество с выходом 93% Пример 1 7-(О-2-аммоний-2-фенилацетамид)-3-хлорЗ-цефем-4-карбоксилат, внутренняя соль С0 5 ~ А Ацилирование 7-АССА (соединение 1) (4,8338 г, 20 ммоль) и 150 мл НгО соединяют в химическом стакане рН составляет 3,67 В стакан добавляют три моля ІЧНз (8,40 мл) рН составляет 8,20 В стакан добавляют D-фенилглицинметилового эфира гидрохлорид (соединение 2) (23,0 г, 114 ммоль) рН составляет 5,29 Смесь пропускают через гифлофильтр и промывают 10,0 мл воды Объем смеси составляет 310 мл Смесь переливают в больший стакан и промывают 5 мл ЬЬО Смесь охлаждают до 1°С и добавляют три моля ІЧНз (16,6 мл), чтобы увеличить рН до 7,28 Добавляют фермент (15,34 г, 500 МЕд на грамм ядра) Через 145 минут смесь фильтруют, чтобы удалить фермент Выход на месте соединения 3 составляет 89,8% В Выделение Прореагировавшую смесь охлаждают до 5°С Ее рН составляет 6,65 Добавляют антрахинон-1,5-дисульфоновую кислоту 2Na (72,3% чистоты, 10 ммоль) и перемешивают смесь в течение 5 минут Температура смеси составляет 4°С, а рН 6,72 Добавляют концентрированную HCI (2,3 мл), и рН снижается до 2,4, смесь затравливают солью цефаклора и антрахинон-1,5-дисульфоновой кислоты Смесь перемешивают еще 2 минуты, и рН поднимается до 3,3 Добавляют концентрированную HCI (3,9 мл) и доводят рН до 1,5 Смесь перемешивают еще 30 минут, после чего она имеет температуру 1 °С и рН 1,4 Отфильтровывают твердый осадок и промывают его 75 мл воды, затем 50 мл ацетона Фильтрат содержит фенилглицин и соединения 1 и 2 Осадок - соль 2 1 соединения 3 и антрахинон-1,5-дисульфоновой кислоты - содержит 99,8% соединения 3, полученного на этапе А на месте Пример 2 Выделение цефаклора как сольвата в диметилформамиде Соль цефаклора и антрахинон-1,5-дисульфоновой кислоты помещают в химический стакан объемом 250 мл и добавляют 123 мл смеси диметилформамида с водой в соотношении 85/15 рН составляет 3,85 Смесь затравливают солью цефаклора с антрахинондисульфоновой кислотой и в течение 15 минут добавляют триэтиламин, доводя рН до 5,7 Смесь охлаждают до 18°С, добавляют триэтиламин и перемешивают смесь в течение 20 минут, поддерживая ее температуру на постоянном уровне Смесь фильтруют, полученное твердое вещество промывают 35 мл смеси диметилформамида с водой (25/15), затем 20 мл ацетона, после чего высушивают в вакууме при 30°С Пример 3 Образование цефаклора гидрата Сольват цефаклора из примера 2 добавляют к раствору, содержащему 39 мл Ь^О, 0,07 г натрийэтилендиаминтетрауксусной кислоты в 1,88 мл концентрированной соляной кислоты, охлажденному до температуры 15-20°С Добавляют концентрированную соляную кислоту, затем триэтиламин Смесь затравливают цефаклора гидратом и перемешивают Добавляют триэтиламин по мере необходимости, смесь охлаждают до 0-5°С и перемешивают Затем смесь фильтруют и полученное твердое вещество промывают 20 мл охлажденной воды Затем его высушивают в потоке воздуха под вытяжкой и получают цефаклора гидрат Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 (03122) 3-72-89 (03122) 2-57-03