Спосіб визначення епідермальних антигенів

Спосіб визначення епідермальних антигенів, який включає одержання антитіл шляхом імунізації 3 вогнище запалення з ексудатом із крові, солюбілізація детергентом імуноглобулінів з наступним їхнім відділенням від нерозчинних фракцій псоріатичних лусочок дозволяє відкрити приховані антитілами антигени, а наступне переварювання пепсином і ферментами панкреатину веде до розкриття антигенних детермінант, прихованих молекулярними структурами і переводу епідермальних антигенів у розчинний стан, що дозволяє преципітувати їхніми антитілами, а за преципітатом визначати тканинні антигени, що дозволяє досягти очікуваний технічний результат; без використання перерахованих вище ознак технічний результат недосяжний. Спосіб полягає в наступному. Сумішшю нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок і повного ад'юванта Фрейнда імунізують кролів до появи антитіл, преципітуючих антигени псоріатичних лусочок. 500мг псоріатичних лусочок змішують із 5 мол ізотонічного розчину натрію хлориду, гомогенізують розтиранням, центрифугують при 3000о/хв 20хв, осад відмивають шляхом ресуспендування і центрифугування, до осаду доливають до 5 мол 1%-й детергент, інкубують дві доби, знову центрифугують, осад відмивають шляхом ресуспендування і центрифугування ізотонічним розчином натрію хлориду, до осаду доливають 5 мол ізотонічний розчин натрію хлориду та розчиняють у цій суміші одну таблетку ацидин-пепсину, суміш інкубують добу при 37°С, інактивують кислоту порошком гідрокарбонату натрію, у суміші розчиняють одну таблетку панкреатину та інкубують протягом 7 діб при щодобовому заморожуванні і відтаювання, після чого в ній визначають епідермальні антигени в реакції імунопреципітації за Оухтерлоні за допомогою кролячих антипсоріатичних сироваток. Запропонований спосіб ілюструється наступним прикладом його використання. Приклад використання способу ілюстрований наступним графічним матеріалом. На Фіг.1 показана преципітація епідермальних антигенів антипсоріатичною сироваткою в розчинній частині гомогенатів епідермісу, що відривається у вогнищі псоріатичного запалення і рогового шару епідермісу, що відривається в здорових людей, у частині, що витягається з нерозчинної фракції гомогенатів детергентом, і в частині витягається після детергенту ацидин-пепсином і панкреатином. На Фіг.2 показана преципітація епідермальних антигенів антипсоріатичною сироваткою в розчинній частині гомогенатів епідермісу, що відривається в області сонячного опіку та рогового шару епідермісу, що відривається в здорових людей, у частині, що витягається з нерозчинної фракції гомогенатів детергентом, і в частині витягається після детергенту ацидин-пепсином і панкреатином. На Фіг.1 позначено наступне: А - лунка з антипсоріатичною сироваткою; 1 - лунка з розчинною частиною гомогенату рогового шару нормального епідермісу, 2 - лунка з антигенами витягаються детергентом з нерозчинної частини рогового шару нормального епідермісу, 3 - лунка з антигенами, що витягаються після детергенту ацидин 42404 4 пепсином і панкреатином з нерозчинної частини рогового шару нормального епідермісу; 4 - лунка з розчинною частиною гомогенату рогового шару нормального епідермісу, 5 - лунка з антигенами, що витягаються детергентом з нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок, 6 - лунка з антигенами, що витягаються після детергенту ацидин-пепсином і панкреатином з нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок. На Фіг.2 позначено наступне: А - лунка з антипсоріатичною сироваткою; 1 - лунка з розчинною частиною гомогенату рогового шару нормального епідермісу; 2 - лунка з антигенами витягаються детергентом з нерозчинної частини рогового шару нормального епідермісу; 3 - лунка з антигенами, що витягаються після детергенту ацидинпепсином і панкреатином з нерозчинної частини рогового шару нормального епідермісу; 4 - лунка з розчинною частиною гомогенату рогового шару нормального епідермісу; 5 - лунка з антигенами, що витягаються детергентом з нерозчинної частини гомогенатів лусочок з області сонячного опіку; 6 -лунка з антигенами, що витягаються після детергенту ацидин-пепсином і панкреатином з нерозчинної частини лусочок з області сонячного опіку. Були проведені дослідження сквамозних елементів, що відриваються в області псоріатичного запалення у 5 хворих на псоріаз. Об'єкт порівняння - роговий шар епідермісу, що знімається з п'яток 5-ти здорових людей. Інший об'єкт порівняння - сквамозні елементи з області сонячного опікуу 5 здорових людей. Результати досліджень, представлені на Фіг.1. У розчинних фракціях рогового шару нормального епідермісу антигени преципітуються з утворенням однієї лінії преципітації між лунками А і 1, А і 4. У фракціях, що витягаються детергентом, лінії преципітації не утворяться між лунками А і 2. У фракціях з антигенами, що витягаються після детергенту ацидин-пепсином і панкреатином з нерозчинної частини рогового шару нормального епідермісу, лінії преципітації не утворяться між лунками А і 3. У фракції, що витягається з нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок детергентом, утворяться 2-3 лінії преципітації між лунками А і 5. Одна з них зливається з лінією преципітації антигенів, утвореною в зоні преципітації розчинних антигенів рогового шару нормального епідермісу між лунками А і 4, ця ж лінія зливається з лінією преципітації, утвореної в зоні преципітації антигенів, що витягаються після детергенту ацидинпепсином і панкреатином з нерозчинної частини гомогенатів псоріатичних лусочок між лунками А і 5. Отже, показано, що умовою для формування імунного нагляду при псоріазі є поява в цитоскелеті псоріатичного епідермісу антигенів розчинної частини рогового шару нормального епідермісу, що володіють природної аутоантигенністю. Результати досліджень, представлені на Фіг.2. У розчинних фракціях рогового шару нормального епідермісу антигени преципітуються з утворенням однієї лінії преципітації між лунками А і 1, А і 4. У фракціях, що витягаються детергентом, лінії преципітації не утворяться між лунками А і 2. У фракціях з антигенами, що витягаються після 5 42404 детергенту ацидин-пепсином і панкреатином з нерозчинної частини рогового шару нормального епідермісу, лінії преципітації не утворяться між лунками А і 3. У фракції, що витягається з нерозчинної частини гомогенатів лусочок області сонячного опіку детергентом, утворюється 1 лінія преципітації між лунками А і 5. Вона зливається з лінією преципітації антигенів, утвореної в зоні преципітації розчинних антигенів рогового шару нормального епідермісу між лунками А і 4, ця ж лінія зливається з лінією преципітації,утвореної в зоні преципітації антигенів, що витягаються після детергенту ацидин-пепсином і панкреатином з нероз Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 6 чинної частини гомогенатів лусочок області сонячного опіку між лунками А і 6. Отже, в області сонячного опіку умови для формування ефективного імунного нагляду аналогічні таким при псоріазі. За допомогою запропонованого способу в цитоскелеті епідермісу відривається при псоріазі і сонячному опіку, визначаються антигени, невизначувані в цитоскелеті епідермісу здорових людей. Обумовлені антигени можуть бути критерієм при оцінці формування умов для ефективного функціонування імунного нагляду при псоріазі та при інших патологічних станах. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601