Спосіб одержання імунних сироваток проти антигенів грамнегативних бактерій

Спосіб одержання імунних сироваток проти антигенів грамнегативних бактерій, що включає виготовлення антигенного препарату, імунізацію продуцентів антигеном і виділення із крові цільового продукту, який відрізняється тим, що імунізацію проводять поверхневими антигенами в формі ліпосом із співвідношенням антиген ЛІПІДИ 1 100 та вмістом імуномодуляторів 1 % глюкозомурамілдипептиду і 0,5 % кверцетину Винахід відноситься до області медицини, переважно до імунологи інфекційних хвороб, і може використовуватись для діагностики, типування і визначення К, М, L - антигенів грамнегативних бактерій Відомий спосіб (1) підвищення вмісту в сироватці крові антитіл проти антигену бактерій Pseudomonas aerugmosa шляхом щеплення вакциною з вмістом антигенів чотирьох серотипів псевдомонад Вміст антитіл в сироватці крові щеплених тварин не перевищував титри 1 200 - 1 400 Крім того, одержана сироватка містить антитіла проти багаточисленних структурних антигенів бактерій, в тому числі внутрішніх, що знижує специфічність сироватки Одержання і використання такої сироватки в імунологічних дослідженнях технічно і економічно не раціонально У відомому способі (2) для підвищення в сироватці крові антитіл проти сальмонел проводять щеплення телят бівалентною вакциною з вмістом шактивованих нативних бактерій Salmonella dublm і Salmonella thyphi munum, тому сироватка крові містить великий набір антитіл проти численних структурних антигенів і має не високу специфічність, а вміст антитіл в сироватці не завжди досягає захисного рівня, бо не забезпечує повного захисту тварин проти інфекційного захворювання Відомий спосіб (3) одержання ешерихюзної сироватки оснований на імунізації кроликів нативними бактеріями штаму Eschenchia coll PCI Штам являється моноплазмідним варіантом культури Е coli C600, одержаним шляхом генетичного схрещування двох різних штамів бактерій роду Eschenchia coli Це ускладнює технологію одержання цільового продукту, а титри специфічних антитіл при імунізації рідко досягають значення 1 80 В основу способу поставлене завдання створити простий спосіб одержання імунної сироватки проти грамнегативних бактерій з підвищеним вмістом антитіл високої специфічності, придатних для типування поверхневих К, М, L - антигенів Поставлене завдання вирішують шляхом виготовлення антигенного препарату із поверхневих К, М, L - антигенів грамнегативних бактерій, імунізації ним продуценту і виділення із крові цільового продукту -сироватки проти грамнегативних бактерій Для виготовлення поверхневого антигену грамнегативні бактерії вирощують протягом 3 діб загальноприйнятим методом (4) Змивають 0,15М розчином NaCI з вмістом 2% фенолу Центрифугують годину при 5000об/хв Із надосадової рідини відомим методом (5) виділяють К - антигени і ліофільно висушують До виготовленого антигену в ліпосомальній формі з співвідношенням антигену до ЛІПІДІВ 1 100 добавляють 1% глюкозомурамілдипептиду і 0,5% кверцетину в якості імуномодуляторів Одержаним препаратом імунізують продуцентів -кролів Імунізацію проводять дворазове підшкірно дозою 0,5 і 1,0мг антигену, через ЗО діб проводять ревакцинацію шляхом підшкірного введення антигену в дозі 1,0мг Через 7 діб після ревакцинації із крові імунізованих кролів виділяють цільовий продукт - сироватку проти грамнегативних бактерій О со Ю З 53011 4 Приклад 1 Одержання імунної сироватки провиділяють сироватку В сироватці визначають тити К - антигенів бактерій роду Proteus три антитіл Результати визначення приведені в Для цього одержують препарат з К - антигенів таблиці 1 бактерій роду Proteus, імунізують ним кроликів і Таблиця 1 Титри антитіл у різні періоди після імунізації кроликів К - антигеном бактерій роду Proteus Після вакцинації Після ревакцинації Титри 1 640 1 1280 Через місяць після ревакцинації 1 640 протитіл 1 320 1 640 1 320 вРПГА 1 640 1 508 8,99±0,27 1 2560 1 1280 10,32±0,47 1 1280 1 640 9,32±0,47 Середня геометрична титру 1/log2 середньої геометричної титру Таким чином, введення препарату поверхневого антигену стимулює вироблення в крові тварин високих титрів антитіл до поверхневих антигенів бактерій роду Proteus Антитіла у високих титрах з'являються в період імунізації і досягають максимуму після ревакцинації Приклад 2 Одержання імунної сироватки проти L - антигенів бактерій роду Eschenchia Для цього виготовляють антигенний препарат із поверхневих L - антигенів бактерій роду Eschenchia, імунізують ним кролів В сироватці крові визначають титри антитіл Результати визначення приведені в таблиці 2 Приведені дані свідчать, що сироватка крові, одержана запропонованим способом містить високі титри антитіл проти антигенів бактерій роду Eschenchia Таблиця 2 Титри антитіл у різні періоди після імунізації кролів L - антигеном бактерій роду Eschenchia Після вакцинації Після ревакцинації Титри 1 640 1 1280 Через місяць після ревакцинації 1 640 протитіл 1 320 1 640 1 320 ВРПГА 1 640 1 508 8,98±0,27 1 1280 1 1016 9,98±0,27 1 640 1 508 8,99±0,27 Середня геометрична титру 1/log2 середньої геометричної титру Приклад 3 Одержання імунної сироватки про1 - антигенів бактерій Salmonella Для цього одержують препарат з М - антигенів бактерій Salmonella, імунізують ним кроликів і ви ти діляють сироватку В сироватці визначають титри антитіл Результати визначення приведені в таблиці З Таблиця З Титри антитіл у різні періоди після імунізації кроликів М - антигеном бактерій Salmonella Після вакцинації Після ревакцинації 1 640 1 1 1280 Через місяць після ревакцинації 1 640 протитіл 1 320 1 640 1 1280 ВРПГА 1280 1 640 9,32±0,47 1 2560 1 1280 10,32±0,47 1 1280 1 1016 9,98±0,27 Титри Середня геометрична титру 1/log2 середньої геометричної титру Таким чином, введення препарату поверхневого антигену стимулює вироблення в крові тварин високих титрів антитіл до поверхневих антигенів бактерій Salmonella Антитіла у високих титрах з'являються в період імунізації і досягають макси муму після ревакцинації Приклад 4 Визначення ефективності способу Запропонованим і відомим способами одержують сироватки і визначають в них титри специфічних антитіл проти поверхневих антигенів грам 5 53011 негативних бактерій Результати визначення приведені в таблиці 4 6 Титри антитіл проти грамнегативних бактерій в сироватці крові Бактерії Proteus Salmonella Esc he пс hi a Pseudomonas Середнє геометричне титру антитіл в цільовому продукті 1 1280 1 1016 1 1016 1 1280 Сироватки були отримані на 3 кролях до кожного роду бактерій шляхом імунізації їх за обома способами Приведені в таблиці дані свідчать, що запропонований спосіб дозволяє одержати сироватку із високим вмістом специфічних антитіл проти грамнегативних бактерій, титр яких в 8 - 16 разів перевищує вміст антитіл в сироватці, одержаній відомим способом Крім того, запропонований спосіб для здійснення не потребує генетично синтезованих штамів, що спрощує його здійснення Література 1 ЮФ Борисович, Л В Кириллов Вакцина против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок, способ ее получения и способ профилактики псевдомоноза пушных зверей, пре Таблиця 4 Титри антитіл в сироватці, одержаній відомим способом4 1 80 1 80 1 80 1 160 имущественно норок Патент Російської Федерації №1066074 від 23 07 82р 2 Ю А Малахов, Б Ю Шустер, В А Седов и др Вакцина против сальмонеллеза молодняка Авторське свідоцтво №1197187 від 04 09 84р 3 Е И Попов, Э А Светоч, О А Тугаринов и др Способ получения эшерихиознной агглютинирующей К99 сыворотки Авторське свідоцтво СССР №1412069 від 29 12 86р 4 W Nimmich Zur Isohrung und quahtativen Baustemanalyse der К -Antigene von Klebsiellen, Z Med Mikrobiol ImmunoL, 1968, 154 117-131 5 Scott, J E Aliphatic Ammonium salts in the Assay of Acidic Polysaccharides from Tissues Methods Biochem Anal , 1960 8 145-197 TOB "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24