Спосіб інтегральної оцінки неспецифічної резистентності організму щодо злоякісних пухлин за допомогою реакції канцеролізу
Номер патенту: 45210
Опубліковано: 26.10.2009
Автори: Чехун Василь Федорович, Орловський Олексій Аркадійович
Формула / Реферат
1. Спосіб інтегральної оцінки неспецифічної резистентності організму щодо злоякісних пухлин за допомогою реакції канцеролізу, в якому вимірюють здатність сироватки та плазми крові викликати лізис клітин злоякісних пухлин, до яких організм-донор крові не має специфічного імунітету, задля чого готують реакційну суміш, що складається з заданих об'ємів суспензії визначеної концентрації пухлинних клітин-мішеней, одержаних з асцитної форми одного зі штамів перещеплюваних пухлин лабораторних тварин, та суцільної або розведеної сироватки або плазми крові досліджуваного організму, який раніш не стикався з антигенами клітин даного типу, потім реакційну суміш інкубують в термостаті при заданій температурі протягом заданого часу, після чого за допомогою одного з відомих пристроїв для підрахунку клітин, наприклад рахункової камери Горяєва, проводять кінцевий підрахунок концентрації клітин-мішеней в реакційній суміші, який відрізняється тим, що суспензію клітин-мішеней, яка міститься в одержаній від лабораторної тварини асцитній рідині, розводять до необхідної робочої концентрації штучним середовищем, наприклад ізотонічним розчином натрію хлориду, не відмиваючи від асцитної рідини шляхом центрифугування в штучному середовищі.
2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що підрахунок концентрації клітин в реакційній суміші, зміненої в результаті реакції канцеролізу, проводять кілька разів, наприклад чотири рази протягом заданого терміну інкубації, і одержані таким чином результати підсумовують.
3. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що безпосередньо перед підрахунком концентрації клітин в реакційній суміші реакцію канцеролізу в усіх досліджуваних зразках одночасно зупиняють шляхом додавання до реакційної суміші певної кількості спеціально підібраного фіксуючого розчину, такого, що не спричиняє утворення конгломератів клітин в суспензії, наприклад, насиченого розчину біхромату калію.
Текст
1. Спосіб інтегральної оцінки неспецифічної резистентності організму щодо злоякісних пухлин за допомогою реакції канцеролізу, в якому вимірюють здатність сироватки та плазми крові викликати лізис клітин злоякісних пухлин, до яких організм-донор крові не має специфічного імунітету, задля чого готують реакційну суміш, що складається з заданих об'ємів суспензії визначеної концентрації пухлинних клітин-мішеней, одержаних з асцитної форми одного зі штамів перещеплюваних пухлин лабораторних тварин, та суцільної або розведеної сироватки або плазми крові досліджуваного організму, який раніш не стикався з антигенами клітин даного типу, потім реакційну суміш інкубують в термостаті при заданій температурі протягом заданого часу, після чого за допомогою одного з відомих пристроїв для підрахунку клітин, U 2 (19) 1 3 45210 4 ції реакцію канцеролізу не зупиняють, тобто вона чотири рази на протязі заданого терміну інкубації, і продовжується і в рахунковій камері, і в тих зразодержані таким чином результати підсумовують, ках, що чекають своєї черги на підрахунок клітин. що дає змогу нівелювати похибку, обумовлену Недоліки цього способу такі. 1) При відмиванні невизначеністю фази квазіперіодичної реакції (ніклітин-мішеней від асцитної рідини руйнується та велювати тим більшою мірою, чим більшим є чисвидаляється найближче мікрооточення клітин, ло часових точок дослідження); 3) безпосередньо відоме під назвою «екстрацелюлярний матрикс». перед підрахунком концентрації клітин в реакційній Це, в свою чергу, веде до неприпустимого викривсуміші реакцію канцеролізу в усіх досліджуваних лення результатів вимірювань, оскільки, за нашизразках одночасно зупиняють шляхом додавання ми даними [4], чутливість клітин, звільнених від до реакційної суміші певної кількості спеціально екстрацелюлярного матриксу, до регуляторних підібраного фіксуючого розчину, такого, що не факторів сироватки та плазми крові відрізняється спричиняє утворення конгломератів клітин в супринципово, аж до переходу від стимуляції лізису спензії, наприклад, насиченого розчину біхромату клітин до стимуляції їх мітотичного поділу. 2) До калію, що дає змогу нівелювати похибку, обумовнеприпустимого викривлення результатів веде лену продовженням реакції в рахунковій камері і в також одноразовий підрахунок результату реакції. тих зразках, що чекають своєї черги на підрахунок Справа в тому, що результат реакції - канцероліклітин. тичний індекс - є своєрідною рівнодіючою двох Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю процесів - власне лізису клітин та мітотичного поознак способу, що заявляється, та технічним реділу тих клітин, що вже до нього підготовані. Зазультатом корисної моделі наступний. вдяки цьому, як встановлено нами раніш [4], конОскільки суспензію клітин-мішеней, яка місцентрація клітин в реакційній суміші змінюється титься в одержаній від лабораторної тварини асквазіперіодично, причому тривалість квазіперіоду цитній рідині, розводять до необхідної робочої істотно змінюється залежно від цілої низки фізіоконцентрації штучним середовищем, наприклад, логічних чинників, і такі зміни зазвичай вкрай важізотонічним розчином натрію хлориду, не відмивако передбачити. Таким чином, при одноразовому ючи від асцитної рідини шляхом центрифугування підрахунку результатів реакції неможливо гаранв штучному середовищі, найближче мікрооточення тувати, що підрахунок завжди ведеться на одній і - екстрацелюлярний матрикс - клітин-мішеней затій самій фазі квазіперіоду. Підрахунок же на різлишається практично нативним, а тому і їх реакції них фазах означає позбавлення сенсу одержаних на регуляторні чинники сироватки або плазми кроданих. 3) Нарешті, ще одним джерелом викривві є природними, не викривленими. лення даних є відсутність процедури зупинки реаПідрахунок концентрації клітин в реакційній кції по закінченні інкубації, перед підрахунком клісуміші, зміненої в результаті реакції канцеролізу, тин. З цієї причини реакція (як лізис, так і поділ проводять кілька разів, наприклад, чотири рази клітин) продовжується і в рахунковій камері, і в тих протягом заданого терміну інкубації, і одержані зразках, що чекають своєї черги на підрахунок таким чином результати підсумовують, що дає клітин. В результаті, лише дані щодо першого підзмогу нівелювати похибку, обумовлену невизначераховуваного зразка більш-менш заслуговують ністю фази квазіперіодичної реакції (нівелювати довіри, а зі зростанням номера зразка в черзі на тим більшою мірою, чим більшим є число часових підрахунок наростає похибка. точок дослідження). Саме ці недоліки класичної постановки реакції Оскільки безпосередньо перед підрахунком канцеролізу завадили свого часу використанню концентрації клітин в реакційній суміші реакцію цієї реакції для діагностики онкологічних захворюканцеролізу в усіх досліджуваних зразках одночавань та моніторингу процесу лікування онкологічсно зупиняють шляхом додавання до реакційної них хворих. суміші певної кількості спеціально підібраного фікВласне опис корисної моделі, що заявляється. суючого розчину, такого, що не спричиняє утвоВ основу корисної моделі поставлено задачу: порення конгломератів клітин в суспензії, наприклад, збутися всіх трьох недоліків класичного способу насиченого розчину біхромату калію, нівелюється постановки реакції канцеролізу і таким чином підпохибка, обумовлена продовженням реакції в равищити її точність та адекватність її результатів хунковій камері і в тих зразках, що чекають своєї реальному рівню неспецифічної резистентності черги на підрахунок клітин. організму щодо злоякісних пухлин. Приклад практичного застосування корисної Поставлена задача вирішується тим, що задля моделі підвищення точності реакції канцеролізу та адекДосліджували кореляційний зв'язок між знаватності її результатів реальному рівню неспециченням канцеролітичного індексу сироватки крові фічної резистентності організму щодо злоякісних та середньою кількістю метастазів на одну тварипухлин виконуються 3 додаткові умови, а саме: 1) ну у мишей лінії С57В1/6 з перещепленою карцисуспензію клітин-мішеней, яка міститься в одержаномою легені Льюїс (синоніми - карцинома 3LL, ній від лабораторної тварини асцитній рідині, розLLC). Пухлини цього штаму відомі тим, що, бувши водять до необхідної робочої концентрації штучперещеплені, наприклад, внутрішньом'язово в ним середовищем, наприклад, ізотонічним гомілку мишей, дають велику кількість метастазів у розчином натрію хлориду, не відмиваючи від асцилегені, і ці метастази легко підрахувати при розтитної рідини шляхом центрифугування в штучному ні тварин. У досліді було використано 6 груп по 10 середовищі; 2) підрахунок концентрації клітин в мишей, з яких група № 1 була контрольною (цим реакційній суміші, зміненої в результаті реакції тваринам лише перещеплювали пухлини без будьканцеролізу, проводять кілька разів, наприклад, яких лікувальних або профілактичних процедур), 5 45210 6 кожна ж з інших груп одержувала лікувальний курс «а» - це підгрупа тварин з групи № 3, у яких і перодного з варіантів протипухлинної вакцини. винні пухлини, і метастази були виявлені. В деяких дослідних групах мало місце виникЗначення канцеролітичного індексу в кожній з нення первинних пухлин та метастазів не у всіх дослідних груп (підгруп) розраховували відносно тварин. Такі тварини з кожної групи були при взятті інтактного контролю, індекс якого, як і зазвичай крові виділені в окремі підгрупи, позначені індекроблять в подібних дослідах, було прийнято за сом «а». Наприклад, група За в подальшому виумовну одиницю (100 %). кладі - це підгрупа мишей з групи № 3, у яких не В таблиці 1, що подана нижче, наведені респостерігалося ані первинних пухлин, ані метастазультати типового досліду із застосуванням корисзів у легені. В цьому ж випадку група 3 баз індексу ної моделі, що заявляється. Таблиця 1 Дослідні значення канцеролітичного індексу та середньої кількості метастазів Параметр Група тварин 3а 4 4а 5 6 6а -4,6 8,8 -7 6 -8 -3,4 15 12 0 14,7 0 14,2 11,3 0 2 Канцеролітичний індекс (%) Середня кількість метастазів на 1 тварину 3 1 -23 -20 22,9 19,3 У таблиці 2 ті ж самі дані наведені у рангованому вигляді, що необхідно для визначення коефіцієнта рангової кореляції Спірмена [5]. У тих випадках, коли значення середньої кількості метастазів на 1 тварину були однаковими в різних групах тва рин (в даному випадку - нульові значення в підгрупах 3а, 4а та 6а), менший ранг присвоювали тій підгрупі з індексом «а», якій відповідає підгрупа без індексу «а» з меншою кількістю метастазів на тварину. Таблиця 2 Ранговані значення канцеролітичного індексу та середньої кількості метастазів Параметр Ранговані значення канцеролітичного індексу Ранг числового значення Група тварин Ранговані значення середньої кількості метастазів на 1 тварину Ранг числового значення Група тварин Числові значення -23 1 1 -20 2 2 -8 3 5 -7 4 4 -4,6 5 3 -3,4 6 6 6 7 4а 8,8 8 3а 15 9 6а 0 1 6а 0 2 3а 0 3 4а 11,3 4 6 12 5 3 14,2 6 5 14,7 7 4 19,3 8 2 22,9 9 1 Дані таблиці 2 свідчать про те, що коефіцієнт кореляції Спірмена між значеннями канцеролітичного індексу та середньої кількості метастазів на одну тварину дорівнює (-0,983), що за даної кількості варіант є статистично достовірним при Р
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюMethod for integral assessment of non-specific anticancer resistance of body by reaction of cancerolysis
Автори англійськоюOrlovskyi Oleksiy Arkadiyovych, Chekhun Vasyl Fedorovych
Назва патенту російськоюСпособ интегральной оценки неспецифической резистентности организма к злокачественным опухолям с помощью реакции канцеролиза
Автори російськоюОрловский Алексей Аркадьевич, Чехун Василий Федорович
МПК / Мітки
МПК: A61P 35/00
Мітки: резистентності, допомогою, спосіб, реакції, неспецифічної, канцеролізу, пухлин, злоякісних, організму, інтегральної, оцінки
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/3-45210-sposib-integralno-ocinki-nespecifichno-rezistentnosti-organizmu-shhodo-zloyakisnikh-pukhlin-za-dopomogoyu-reakci-kancerolizu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб інтегральної оцінки неспецифічної резистентності організму щодо злоякісних пухлин за допомогою реакції канцеролізу</a>
Попередній патент: Поліспастова система повороту стріли маніпулятора
Наступний патент: Спосіб захисту гірничого комбайна
Випадковий патент: Пристрій для вагінального введення лікарських засобів