Спосіб визначення мембранної резистентності ізольованих клітин крові

Спосіб визначення мембранної резистентності ізольованих клітин крові, що включає відтворення умов взаємодії клітин нативної крові з цитолітичним чинником, який відрізняється тим, що 100 3 46268 4 зміни форми клітин і характер поляризаційної флуоресценції. Приклад 1. Нативну кров в об'ємі 100мкл отримали шляхом проколу пальця здорової дорослої людини і внесли її у силіконовану мікропробірку. Після витримування її впродовж 10хв у затемненому місці при температурі 20°С 20мкл із мікропробірки внесли на розпластану на предметному склі полімерну сіточку із нетканого волоконного матеріалу на поліамідній і поліуретановій основі із товщиною волокон 10мкм при розмірі комірок від 25´25мкм. Через 15хв. досліджували під мікроскопом форму лейкоцитів і характер їх поляризаційної флуоресценції. У результаті, в мікропрепараті спостерігали незначне набрякання і початкові прояви лейкоцитолізу як відображення цитолітичної дії силікону – кремнійвмісної сполуки. Рівень цитолітичної деформації лейкоцитів у мікропрепараті за запропонованим способом може слугувати контролем при дослідженні активності цитотоксичних чинників при дослідженні їх мембранодеструктивної дії та відповідної до неї резистентності клітинних мембран. Приклад 2. За запропонованим способом досліджували резистентність мембран ізольованих клітин крові, зокрема лейкоцитів, у хворих з поверхневими і глибокими опіками, а також у пацієнтів з хронічною алкогольною інтоксикацією. Про резистентність мембран лейкоцитів робили висновок за набряканням клітин у мікропрепараті та їх цитолізом, а також за інтегральним показником мембранної резистентності лейкоцитів, який визначали як обернену величину індексу інтоксикації [1], користуючись формулою Imr=103√·ЗОЧ, де З - зелено-, О - оранжево- і Ч - червоносвітні ядра лейкоцитів у мікропрепараті, Imr - індекс резистентності клітинних мембран. В результаті дослідження було встановлено, що резистентність мембран лейкоцитів у хворих з поверхневими опіками суттєво переважає аналогічну при глибоких опіках. Проміжне положення посідає резистентність лейкоцитів нативної крові у пацієнтів із хронічною інтоксикацією (табл.). но покласти на полімерну сіточку із волокнами на поліамідній і поліуретановій основі, які б за розмірами відповідали нанорівню, а за фізичними властивостями – фотонним кристалам [3,4]. Останні, в силу притаманної їм високої світло-оптичної активності здатні забезпечити додатковий стандартизований імпульс енергії, спрямований на індукцію цитолітичного процесу. Виходячи з наведених міркувань, стає очевидним, що встановлені у процесі дослідження якісні відмінності цитолітичного процесу відображатимуть ініціальний стан мембранної резистентності дослідних клітин конкретного організму. Беручи до уваги наведене, у відомому способі визначення мембранної резистентності ізольованих клітин крові, що включає відтворення умов взаємодії клітин нативної крові з цитолітичним чинником, відповідно до корисної моделі 100120мкл нативної крові пацієнта вносять у силіконовану мікропробірку, витримують у затемненому місці при температурі 18-22°С впродовж 10хв., після чого 20мкл нативної крові вносять на розпластану на предметному склі полімерну сіточку із нетканого волоконного матеріалу на поліамідній і поліуретановій основі і витримують упродовж 15хв., після чого мікропрепарат аналізують під мікроскопом за зміною форми клітин і характером їх поляризаційної флуоресценції, причому, полімерну сіточку беруть із товщиною волокон не більше 10мкм, при розмірі комірок від 25´25мкм до 30´30мкм включно. Спосіб здійснюють наступним чином. Нативну кров пацієнта в об'ємі 100-120мкл вносять у силіконовану мікропробірку і витримують у затемненому місці при температурі 18-22°С впродовж 10хв. Після цього 20мкл нативної крові із силіконованої мікропробірки вносять на розпластану на предметному склі полімерну сіточку із нетканого волоконного матеріалу на поліамідній і поліуретановій основі. Полімерну сіточку беруть із товщиною волокон не більше 10мкм, при розмірі комірок від 25´25мкм до 30´30мкм включно. Отриманий мікропрепарат витримують у затемненому місці при температурі 18-22°С впродовж 15хв. і досліджують під мікроскопом, реєструючи Таблиця Характеристика резистентності мембран ізольованих лейкоцитів у людей в нормі і при патологічному процесі Група спостереження Здорові дорослі люди Поверхневі опіки Глибокі опіки Хронічна алкогольна інтоксикація п цитодеструкція набряк цитоліз метахромазія ядер зелен оранж черв Imr ∆% Р 30 + + 91 8 1 1,111 23 29 ++ +++ +/++ ++++ 82 78 16 18 2 4 1,070 0,442 -4,7 -60,2