Спосіб виділення хламідій на лабораторних тваринах

Спосіб виділення хламідій на лабораторних тваринах, що включає зараження білих мишей або морських свинок, їх розтин і відбір шматочків внутрішніх органів, який відрізняється тим, що після відбору шматочків, на першому пасажі патматеріалу, проводять їх гістологічні дослідження та виділяють хламідії протягом 8-10 діб. (19) (21) u200907827 (22) 24.07.2009 (24) 25.12.2009 (46) 25.12.2009, Бюл.№ 24, 2009 р. (72) БОРИСЕВИЧ БОРИС ВОЛОДИМИРОВИЧ, СКРИПКА МАРИНА ВІКТОРІВНА, ЛІСОВА ВІКТОРІЯ ВІКТОРІВНА (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ БІОРЕСУРСІВ І ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ УКРАЇНИ 3 46598 4 распространенных факторных инфекционных зараження вводять у черевну порожнину або болезней органов размножения и молочной інтраторакально (в грудну порожнину через железа у свиней //Ветеринарный консультант міжреберні тканини з правої сторони) білим 2006. №17. - С.17-19; Бортнічук В.А., Любецький мишам в дозі 0,3мл, морським свинкам - 0,5мл. В.Й., Павленко М.С. Роль хламідій в патології Для постановки однієї біопроби використовують 5 відтворення тварин //Науковий вісник білих мишей масою у 16-20гр. або 2-3 морських Національного аграрного університету, 2000. №22. свинки масою 300-350гр. Тварини знаходяться під – С.31-34]. наглядом 5-7 діб, після чого їх забивають і Загибель білих мишей сягає максимального відбирають шматочки печінки, нирок, селезінки та показника (до 80%) лише в сьомому пасажі легень. З кожного органу з різних ділянок хламідій [Обуховська О.В. Адаптація польових відбирають по 4 шматочки кубічної форми з ізолятів хламідій до жовткових міхурів курячих довжиною ребра 0,4-0,6см. При загибелі тварин до ембріонів та внутрішніх органів білих мишей 5-7 доби після зараження проводять їх розтин і так //Міжвідомчий тематичний науковий збірник - 82. само відбирають шматочки органів для подальших Харків, 2003. - С.433-437]. Таким чином, виділення досліджень. Відібрані шматочки органів фіксують у хламідій на лабораторних тваринах може тривати 96° етанолі 2 доби. Після фіксації шматочки 70 діб і потребує не менше 14 лабораторних переносять на 12-15год. у 100° етанол для тварин. зневоднення. 100° етанол готують шляхом Корисною моделлю ставиться завдання відстоювання 96° етанолу з сірчанокислою міддю. розробити більш швидкий спосіб виділення Для цього в колбу з притертою кришкою хламідій на лабораторних тваринах. засипають 170г зневодненої сірчанокислої міді та Поставлене завдання досягається тим, що на 500мл 96° етанолу. Колбу збовтують та першому пасажі патматеріалу на білих мишах чи відстоюють 2 доби. Після чого в іншу колбу знов морських свинках для ідентифікації хламідій засипають 170г зневодненої сірчанокислої міді та використовують метод гістологічних досліджень. наливали етанол з першої колби. Колбу збовтують При цьому тривалість виділення хламідій і залишають на 1 добу. Отриманий спирт скорочується з 70 до 8-10 діб, а кількість фільтрують через фільтрувальний папір та необхідних лабораторних тварин зменшується з використовували для зневоднення. 14 до 2 (мінімально необхідна кількість). Після зневоднення шматочки патматеріалу Виключається необхідність попереднього заливають у парафін за наступною схемою: бактеріологічного контролю 10% суспензії 1) 100° етанол : ксилол у співвідношенні 3:1-2 матеріалу для зараження шляхом її висівання на години; живильні середовища (МПБ, МПА), оскільки 2) 100° етанол : ксилол у співвідношенні 1:1-2 гістологічні дослідження (фарбування зрізів години; гематоксиліном та еозином) дають можливість 3) ксилол - 1 година; віддиференціювати хламідії за характерними 4) ксилол : парафін у співвідношенні 1:1 мікроскопічними змінами. Також виключається (t=37°C) - 30хв.; необхідність приготування мазків-відбитків з 5) парафін 1 при t=50-55°C - 30хв.; органів лабораторних тварин та їх наступне 6) парафін II при t=50-55°С - 30хв. фарбування за Стемпом чи Романовським-Гімза З кожного шматочка на мікротомі одержують для ідентифікації хламідій. зрізи товщиною 8-10мкм, які зафарбовують Суть запропонованого способу полягає в тому, гематоксиліном та еозином. що як патматеріал для виділення хламідій Хід фарбування: депарафінують зрізи в використовують ділянки уражених плодових ксилолі і через 960 та 70° етаноли доводять до оболонок, внутрішні органи абортованих плодів і дистильованої води, витримуючи в кожному мертвонароджених поросят, шматочки реактиві по 5-7хв. Переносять у гематоксилін паренхіматозних органів плодів та хворих тварин, Караці на 5хв. Споліскують у дистильованій воді. слиз піхви, проби еякулята (не менше 1мл) або Переносять у водопровідну воду на 20хв., замороженої сперми (не менше 4-х гранул). З споліскують у дистильованій воді. Дофарбовують у патматеріалу готують 10% суспензію на 0,01% водному розчині еозину 2хв. Швидко фізіологічному розчині з рН 7,2-7,4 та споліскують у дистильованій воді. Зневоднюють у центрифугують її при 2000об/хв 15 хвилин. 70° і 96° етанолах та переносять у ксилол, Надосадову рідину обробляють антибіотиками, витримуючи в кожному реактиві по 2-5хв. додаючи 100од/мл пеніциліну та 500од/мл Заключають у бальзам. стрептоміцину або 150мкг/мл гентаміцину. Хламідії в клітинах ідентифікують за наявністю Проби сперми, еякуляту, слизу піхви в їх цитоплазмі базофільних (забарвлених у синій використовують нерозведеними або розводять колір) тілець-включень. 1:27 фізіологічним розчином з рН7,2-7,4. Розведені Таким чином, спосіб виділення хламідій на чи не розведені проби обробляють антибіотиками лабораторних тваринах дозволяє ідентифікувати так само, як і інші види патматеріалу. збудник хламідіозу, може бути використаний для Після додавання антибіотиків матеріал для діагностики цієї хвороби в тварин у роботі зараження витримують у холодильнику при +4°С науковців та державних лабораторій ветеринарної протягом 2-4 годин. Через 2-4 години матеріал для медицини. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601