Спосіб отримання мозкової суспензії вірусу сказу

Спосіб отримання мозкової суспензії вірусу сказу, що включає приготування вірусовмісної су 3 47938 4 Таблиця 1 Рівень репродукції вірусу сказу в головному мозку тварин після інтрацеребрального зараження n=3 Вид тварин Титр вірусу сказу (lg МЛД50/см3) РБ-71 CVS 6,5±0,2 5,6±0,1 6,7±0,2 5,5±0,3 6,3±0,1 5,2±0,2 5,3±0,3 4,2±0,1 6,8±0,2 5,3±0,2 6,4±0,3 5,2±0,3 5,8±0,2 5,0±0,3 5,1±0,1 3,9±0,2 4,8±0,3 4,5±0,2 4,6±0,2 4,5±0,3 4,1±0,1 3,7±0,2 3,8±0,3 3,4±0,2 5,3±0,2 5,2±0,3 5,2±0,1 4,8±0,2 4,6±0,2 4,2±0,3 4,3±0,1 3,7±0,2 Відділи головного мозку Кора головних півкуль Амонов ріг Мозочок Довгастий мозок Кора головних півкуль Амонов ріг Мозочок Довгастий мозок Кора головних півкуль Амонов ріг Мозочок Довгастий мозок Кора головних півкуль Амонов ріг Мозочок Довгастий мозок Кролі Вівці Лисиці Тхорзофретки Дані, представлені в табл.1, показують, що загальною властивістю штамів вірусу сказу є їх максимальна репродукція в амоновому розі і корі великих півкуль головного мозку, менше - в мозочку і мінімальне - в довгастому мозку експериментальне інфікованих тварин. Таким чином, максимальний рівень накопичення вірусу сказу встановлено в корі великих півкуль і амоновому розі після інтрацеребрального зараження тварин вірусом сказу. На основі отриманих результатів для отримання мозкової суспензії вірусу сказу, в якості вірусовмісного субстрату, використовували вищевказані відділи головного мозку овець, інфікованих вірусом сказу. Приклад 2 Визначення оптимального методу отримання вірусовмісної суспензії При розробці методу отримання препаратів мозкового вірусу сказу для отримання 20% суспензії мозку був визначений ряд таких параметрів як час експозиції на ультразвуковому дезінтеграторі (від 10 секунд до 5 хвилин). Окрім цього, власні дослідження та аналіз літературних даних показав, що вірус сказу є стійким до багаторазового заморожуваннявідтаювання і не знижує своєї інфекційної активності. Крім цього, при відтаюванні проходить руйнування клітин мозку кристалами води, що забезпечує максимальний вихід внутрішньоклітинного вірусу в суспензію. Усе це було використано при отриманні 20% мозкової суспензії. Заключним етапом отримання мозкової суспензії вірусу сказу є його очистка від тканинного детриту. З цією метою використовували низькошвидкісне центрифугування при 2000об/хв протягом 15 хвилин, при 4°С. В результаті проведених експериментів були визначені оптимальні умови отримання мозкового вірусу сказу. Результати дослідження представлені в табл.2. Таблиця 2 Порівняльне визначення інфекційної активності 20% суспензії штаму вірусу сказу РБ-71, отриманої різними способами № п/п 1 1 Метод 2 Екстрагування ультразвуком (трикратна експозиція на ультразвуковому дезінтеграторі протягом 40 с при 23кГц) n=3 Інфекційна активність Інфекційна активність вірусу після видаленОб'єм,см3 20% суспензії, lg ня тканинного детри3 МЛД50/см 3 ту, lg МЛД50/см 3 4 5 500 6,5±0,2 6,6±0,1 5 47938 6 Продовження таблиці 2 1 2 3 4 5 6 2 Екстрагування ультразвуком (двократна експозиція на ультразвуковому дезінтеграторі протягом 2 хвилин при 23кГц) Трикратне заморожування-відтаювання Трикратне заморожування-відтаювання Трикратне заморожування-відтаювання Трикратне заморожування-відтаювання Представлені в табл.2 дані свідчать про те, що при використанні трикратного заморожуваннявідтаювання титр інфекційної активності вірусов3 місної суспензії був на 0,1-0,6 lg МЛД50/см вище ніж при використанні з даною метою ультразвукового дезінтегратора. Отже, використання розробленої схеми дає можливість отримати мозкову суспензію вірусу сказу з максимально високим титром інфекційної активності при усуненні забруднення лабораторного обладнання і інструментів, що мінімізує загрозу життю працівників. Комп’ютерна верстка А. Рябко 3 4 5 500 6,7±0,1 6,7±0,2 50 60 200 300 6,9±0,3 6,8±0,2 7,1±0,3 7,0±0,2 7,0±0,2 6,9±0,3 7,1±0,1 7,1±0,3 Література: 1. Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики бешенства: ГОСТ 26075-84. - [Чинний від 09.01.1984]. - М.: Издательство стандартов. - 1984. - 10с. 2. Ветеринарна медицина. Методи діагностики сказу: ДСТУ 7053:2009. - [Чинний від 01.01.2010]. 2009. - 13с. 3. Koprowski H. The mouse inoculation test. In: Meslin F., Kaplan M., Koprowski H. // WHO Laboratory Techniques in Rabies 4th ed. - Geneva. 1996. - P.80-87. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601