Спосіб операційного вилучення гонад перетинчастокрилих паразитів

Спосіб операційного вилучення гонад перетинчастокрилих паразитів, що включає вилучення операційним шляхом гонад, з витримуванням їх у водному розчині льодяної оцтової кислоти, який відрізняється тим, що імаго, паразитів після їх 3 ефективний та інформативний спосіб препарування гонад паразитичних перетинчастокрилих видів. Поставлене завдання вирішувалось тим, що послідовно реалізовували суттєві елементи способу. Зокрема, імаго паразитів після їх відродження утримували ізольовано в пробірках продовж 2,5-3,0 годин. Далі, візуально відбирали імаго, що характеризувались вираженою руховою активністю і розташовували у пробірку з парами хлороформу впродовж 1,5-2,0 хвилин. Наступна суттєва відміна способу передбачала перенесення імаго на предметне скло у 2,0%-ний водний розчин фарбника - ацетокарміна, де проводили вилучення операційним шляхом гонад з наступним їх утримуванням впродовж 5,5-6,0 хвилин. Інша суттєва відміна способу передбачала утримування у 30%ному водному розчині оцтової кислоти. Суть запропонованого способу полягає у тому, що для оцінки фізіологічного стану популяцій перетинчастокрилих паразитів найбільш інформативним предиктором є стан гонад статевої системи самок та самців. Запропонований спосіб дозволяє здійснити прийом препарування гонад паразитів. Складові елементи способу дозволяють послідовно підготувати імаго паразитів, більшість з яких мікроскопічних розмірів, використати, у складі способу, оптимальний фарбник гонад та фіксатор, а також хімічну сполуку, що тривалий час утримує гонади в оптимальному, для оцінки їх функціональної активності стані. Приклад здійснення способу. Типова біолабораторія, де масово вирощують лабораторні популяції паразитичних перетинчастокрилих паразитів для потреб їх наступного масового розселення в агроценози. Досліди проводили на культурах видів роду Trichogramma (Т. pintoi Voeg.) - паразита яєць лускокрилих видів шкідливих комах, а також з використанням імаго ектопаразита гусениць лускокрилих шкідників габробракона {Habrobracon hebetor Say.). лабораторні культури цих паразитів вирощували за відомими способами та технологіями. Передбачалось два варіанти дослідів. Перший - популяції цих паразитів де експериментально обґрунтовували запропонований спосіб. Послідовно реалізовували суттєві елементи. Після відродження імаго паразитів їх утримували ізольовано у пробірках впродовж 2,5-3,0 годин. Далі, візуально відбирали імаго з чітко вираженою руховою активністю. їх перенесли у пробірку з парами хлороформу впродовж 1,5-2,0 хвилин. Наступний елемент способу передбачав перенесення на предметне скло у 2,0%-ний водний розчин ацетокарміна де 48245 4 проводили операційне вилучення гонад впродовж 5,5-6,0 хвилин. Після цього, гонади переносили у 30%-ний водний розчин оцтової кислоти. Наступний варіант передбачав реалізацію способу - найближчого аналога. Зокрема, після 12 хвилинного витримування самиць у 3%-ному водному розчині льодяної оцтової кислоти, вилучали гонади із черевця самиць через геніальний отвір. Обробили їх 5%-ним розчином лугу КОН і фарбували 0,0015%-ним водним розчином нейтрального червоного. Для об'єктивної оцінки дієвості та можливого позитивного результату використовували найбільш інформативні та об'єктивні тестові показники. Результати досліджень наведено у таблиці. Встановлено, що у межах суттєвих параметрів, запропонований спосіб реалізовано. Повністю зберігається морфологічна структура гонад самиць та самців імаго трихограми та габробракона. Досягнуто високий рівень успішних спроб препарування гонад паразитів. Зважаючи на незначні лінійні розміри імаго паразитів - трихограми 0,20,3мм, спосіб забезпечує надійний рівень процесу препарування. При цьому, що важливо для практики оцінки фізіологічного стану лабораторних культур ентомофагів, отримується достатня інформація, що стосується стану гонад взагалі, так і окремих їх складових елементів - органів. З наведених у таблиці матеріалів видно, що усі структури зберігають лінійні розміри, практично відсутні механічні пошкодження епітеліальних клітин. Усі складові частини гонад - передня частина їх - термінальний філамент чітко виділяється, спостерігаються місця прикріплення яйцевих трубок (оваріол). Спостерігаються клітинні структури філаменту. Стадію поділу та диференціації клітин досить виражено можна спостерігати у структурі гермарію. Виділяються ооцити, внаслідок адсорбції в їх клітинах фарбника, у складі способу. Чіткі морфологічні структури вітеллярію дозволяють простежити генезис ооцитів, їх ріст, достигання та структури трофічних клітин. Проглядається також оваріольна ніжка - як вихід із вітеллярію. Спосіб дозволяє спостерігати процес овуляції яйцеклітин. Перехід їх в оваріольну ніжку та статеві шляхи, де вони перетворюються в яйця. У підсумку, оцінюючи позитивний результат реалізації способу, необхідно сказати, про високий рівень інформативності способу. Він дозволяє ефективно проводити препарування гонад перетинчастокрилих ентомофагів з наступною візуальною оцінкою їх фізіологічного стану. 5 48245 6 Таблиця Результати експериментального обґрунтування способу операційного вилучення гонад перетинчастокрилих паразитів Плодючість, яєць/самицю Способи, що Проаналізовано Інформативність Позитивний порівнюються імаго, екз способу результат Філамент Гермарій Вітеллярій Оваріоли Ізоляція іманго, 2,5-3,0 год; Дія хлорофоСпосіб дормом на імазволяє ефекго; тивно провоВтрата рухоЧіткі морфолодити вої активносВиділяються Виражена гічні контури Цілісна стру- Висока, внаслі- прижиттєве ті; термінальна морфологічна цього органу. ктура без док збереження вилучення Вилучення 78 структура та структура Спостерігається морфологічно морфологічних гонад з нагонад у роззагальний лігаоогоніїв структура ооци- дефектів структур гонад ступною візучині 2%-ного мент тів альною оцінацетокарміна; кою їх Витримування фізіологічного у 30%-ній оцстану товій кислоті (Спосіб, що пропонується) Витримування самиць у водному розчині оцтової кисСпосіб не у лоти; Спорадично Недостатня повній мірі Вилучення спостерігСпостерігається Вираженні конвнаслідок локагарантує гонад; Не чітко видігаються фрапошкодження тури органу, не льного пошко- якість вилуОбробка го69 ляється фунгменти пошструктур лігачітка структура дження морфо- чення гонад. над лугом; кція оогоніїв коджених менту ооцитів логічних Незначна Обробка гоструктур оваструктур гонад його ефектинад барвниріол вність ком (Спосіб - найближчий аналог) Комп’ютерна верстка О. Рябко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601