Спосіб тривалого зберігання лабораторних культур паразита лізіфлебуса (lysiphlebus fabarum marsh.)

Спосіб тривалого зберігання лабораторних культур паразита лізіфлебуса (Lysiphlebus fabarum Marsh.), що включає утримання паразита в організмі комахи-хазяїна, який відрізняється тим, що перед процесом зараження самицями лізіфлебуса личинок попелиць проводять їх спаровування та згодовують самицям дієту у складі 5 %-ного вод 3 В основу корисної моделі поставлене завдання експериментально обґрунтувати спосіб тривалого зберігання лабораторних культур паразита лізіфлебуса (Lysiphlebus fabarum Matrsh.). Ставилось завдання обґрунтувати оптимальні параметри тривалого, понад 100 днів, зберігання паразита багатьох видів попелиць в умовах біолабораторії зі збереженням визначальних біологічних та технологічних характеристик лізіфлебуса. Поставлене завдання досягається тим, що послідовно реалізуються суттєві елементи запропонованого способу. Зокрема, перший з них передбачає отримання імаго лізіфлебуса. Після їх відродження проводять спаровування з негайним згодовуванням самицям дієти у складі 5%-ного водного розчину меду, сумісно з 0,002%-ним водним розчином нативної рибонуклеїнової кислоти (РНК). Інша суттєва відміна способу передбачає зараження самицями паразита та зберігання їх в організмі комах-хазяїнів - личинках 3-4-го віків попелиць. Суттєвим є те, що на стадії 2-3-го віків лізіфлебуса утримують впродовж двох діб за температури повітря 14-16°С, відносні вологості повітря 75-78%. Тривалість світлового дня становить 11-12 годин. Інша суттєва відміна способу передбачає впродовж трьох діб утримувати лізіфлебуса за температури повітря 10-11°С та відносній вологості повітря 75-78%, тривалості світлового дня 9 годин. Наступна суттєва відміна способу передбачає утримання біоматеріалу у холодильнику за температури 2,5-3,5°С та відносні вологості повітря 78-83%. Суть запропонованого способу полягає у тому, що експериментально обґрунтовують оптимальні параметри гідротермічного режиму та умов фотоперіоду, тривалого зберігання лізіфлебуса. Важливим аспектом способу є те, що спосіб передбачає фізіологічну підготовку організму паразита для тривалої біологічної консервації. Зокрема, обґрун 49463 4 товані оптимальні стадії розвитку попелиць - комах-хазяїнів лізіфлебуса. Як відомо, паразит заражає усі стадії личинок попелиць. У способі обґрунтовано оптимальні параметри цього елементу. Білково-вуглеводнева дієта для самиць паразита визначальна ознака високожиттєздатних дочірніх поколінь паразита. ПРИКЛАД ЗДІЙСНЕННЯ СПОСОБУ Типова біолабораторія, де вирощують лабораторні популяції паразитичних комах. Культура лізіфлебуса - паразита багатьох, понад 560 видів попелиць. Усі передімагінальні фази його розвиваються в організмі попелиць. Як і усі афідіїди, з характером та функціонуванням статевої системи відноситься до проовігенних видів. Це означає, що статева продукція у них формується на стадіях перед лялечки та лялечки, і імаго відроджується з готовими для відкладання яйцями. Самиці реалізують статеву продукцію майже не потребуючи додаткового живлення. Як правило імаго живуть 34 дні. Для обґрунтування способу формували дослідні варіанти, яких було два та контроль. У варіанті, де обґрунтовували запропонований спосіб послідовно реалізовували суттєві вимоги: отримували дорослих особин, проводили спаровування з самцями і зразу самицям пропонували дієту - 5%-ний водний розчин меду, сумісно з 0,002%-ним водним розчином нативної рибонуклеїнової кислоти (РНК). На стадії личинок 2-3-го віків лізіфлебуса утримували впродовж двох діб за температури повітря 14-16°С, відносні вологості повітря 75-78% та Т тривалості світлового дня 11-12 годин. Далі впродовж трьох діб паразита утримували за температури повітря 10-11°С та відносній вологості повітря 75-78%, тривалості світлового дня 9 годин. Біоматеріал зберігали у холодильнику за температури 2,5-3,5°С та відносні вологості повітря 78-83%. Таблиця Результати обґрунтування способу тривалого зберігання паразита попелиць лізіфлебуса Плодючість самиць, Характеристики лізіфлебуса після Життєздатність яєць/самицю після 120 днів зберігання 60 днів зберігання Способи, що паразита в порівнюються період реактизаражено відродження, плодючість, вації, % потенційна реальна личинок, % яєць % Спаровування самиць; Дієта для імаго; Зберігання в личинках по89,4 357,4 130,1 67,9 121,4 59,8 пелиць; Процес зберігання у холодильнику (спосіб, що пропонується) Позитивний результат Спосіб створює оптимальні умови для процесу тривалого зберігання культури. Популяція життєздатна після реактивації 5 49463 6 Продовження таблиці Плодючість самиць, Характеристики лізіфлебуса після Життєздатність яєць/самицю після 120 днів зберігання 60 днів зберігання Способи, що паразита в порівнюються період реактизаражено відродження, плодючість, вації, % потенційна реальна личинок, % яєць % Зберігали за температури 2,5°С вологості повітря 82%; Шар біоматеріалу товщи77,8 318,2 93,8 49,6 86,8 36,7 ною 2,0см; Наповнювач оксин 0,5% (спосібнайближчий аналог) Контроль НІР05 62,4 288,5 82,4 40,5 73,3 30,1 6,2 4,8 3,7 4,1 3,6 У варіанті, де проводили зберігання лізіфлебуса, згідно способу - найближчого аналога, використовували суттєві його елементи: зберігання біоматеріалу проводили за температури повітря 2,5±1,5°С, вологості повітря 82±3%. Утримували паразита на відкритій поверхні шаром товщиною 1,5-2,0см. До біоматеріалу додавали наповнювач оксин у кількості 0,5% від загальної його маси. Контрольний варіант - лабораторні культури лізіфлебуса утримувались та зберігались за стандартних умов, без будь-якої дії по відношенню до них. Для оцінки ефективності способів, величини можливого позитивного результату використовували най Комп’ютерна верстка А. Крулевський Позитивний результат Спосіб не забезпечує процес тривалого зберігання лізіфлебуса Підтримується культура паразита в мінімальних параметрах більш інформативні об'єктивні тестові характеристики. Отриманий цифровий матеріал обробляли статистично. Результати досліджень наведено у таблиці. Встановлено, що поставлене завдання і успішно реалізовано. В межах суттєвих елементів обґрунтовано спосіб тривалого зберігання лабораторних культур паразита лізіфлебуса. Отримані цифрові показники тестових характеристик суттєво перевищують аналогічні показники найближчого аналога. Після 120 днів зберігання лабораторна культура лізіфлебуса була життєздатною, самиці відкладали яйця у личинки попелиць. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601