Спосіб отримання клатратних комплексів імуноглобулінів з низькомолекулярними речовинами

Спосіб отримання клатратних імуноглобулінів з низькомолекулярними речовинами, який відрізняється тим, що суміш імуноглобулінів та низькомолекулярної речовини піддають п'ятикратному заморожуванню і розморожуванню, після чого ліофілізують. (19) (21) u200913496 (22) 24.12.2009 (24) 12.07.2010 (46) 12.07.2010, Бюл.№ 13, 2010 р. (72) СМІЛЯНСЬКА МАЙЯ ВОЛОДИМИРІВНА, ПЕРЕМОТ СВІТЛАНА ДМИТРІВНА, МАРТИНОВ АРТУР ВІКТОРОВИЧ, КАШПУР НАТАЛІЯ ВАЛЕРІЇВНА, ВОЛЯНСЬКИЙ АНДРІЙ ЮРІЄВИЧ, РОМАНОВА ОЛЕНА АНАТОЛІЇВНА, ІГУМНОВА НАТАЛІЯ ІВАНІВНА, СИДОРЕНКО ТАТЯНА АДІКОВНА 3 51220 ренню іонних зв'язків, де щільно розташовуються при наступному заморожуванні. При цьому зберігається специфічність антитіл та флуоресцентні властивості ФІТЦ. Можливість здійснення корисної моделі та вплив суттєвих ознак рішення, що заявляється, на отримуваний технічний результат ілюструється наступними прикладами. Отримання клатратних комплексів. 0,1моль ФІТЦ розчиняють у 50мл 0,9% розчину натрію хлориду, там же розчиняють 0,5мл ліофілізованих імуноглобулінів діагностичних антивидових проти імуноглобулінів людини. Отриману суміш фільтрують через мембранний фільтр з метою стерилізації. Потім заморожують до -25°С та розморожують при 35,5°С у термостаті. Процедуру заморожування-розморожування повторяють іще 4 рази. 4 В експерименті для вибору оптимальної кількості заморожувань суміш антитіл діагностичних антивидових проти імуноглобулінів людини та ФІТЦ у кон'югації, отриманої способом, що пропонується, вивчали інтенсивність флюоресценції у порівнянні з контролем на приладі ФМЕЛ-1 [4]. Інтенсивність вимірювали у мВ та виражали в умовних одиницях F F / Fф, F флюоресценції (УОФ) F, де - середнє значення інтенсивності флюоресценції 10 клітин; Fф середнє значення інтенсивності флюоресценції фону. У якості контролю використовували імуноглобуліни діагностичні флюоресциюючі антивидові проти імуноглобулінів людини (виробник НІІЕМ ім. Н.Ф.Гамалеї). Отриманні показники приведенні у таблиці 1. Таблиця 1 Інтенсивність флюоресценції клатратних комплексів (F) Інтенсивність флюоресценції F (УОФ) Кількість заморожувань 0 1 2 1,86 1,91 1,94 Визначення активності клатратних кон'югатів. Для визначення активності клатратних кон'югатів проводять титрування на інфекційному матеріалі, в якому наявність маркерів вірусів встановлена реакцією імунофлюоресценції та полімеразноцепною реакцією за допомогою стандартних комерційних діагностикумів. Реакцію непрямої імунофлюоресценції (РНІФ) проводять за стандартною методикою, клатратні кон'югати використовують в двократному розведенні (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256). В якості специфічних сироваток використовували поліклональні антитіла проти Herpes simplex virus1, Cytomegalovirus, Trichomonas vaginalis фірми Santa Cruz Biotechnology, Inc. Дослідження проводять за стандартною схемою постановки РНІФ [5]. Для порівняння використовують імуноглобуліни діагностичні флюоресциюючі антивидові проти Контроль 3 1,98 4 2,5 5 2,9 6 1,35 2,7 імуноглобулінів людини (виробник НІІЕМ ім. Н.Ф.Гамалеї). При проведенні обліку та оцінці результатів РНІФ визначають робочий титр кон'югатів, який склав 1:128, тоді як робочий титр стандартних діагностичних імуноглобу-лінів - 1:64. Визначення специфічності клатратних кон'югатів. Для визначення специфічності клотратних кон'югатів проводять дослідження інфекційного матеріалу. Порівняльні дослідження проводять використовуючи стандартні комерційні тест-системи (виробник 000 "БТК ЛАБдиагностика"). В якості специфічних сироваток використовували поліклональні антитіла проти Herpes simplex virus-1, Cytomegalovirus, Trichomonas vaginalis фірми Santa Cruz Biotechnology, Inc. Дослідження проводять за стандартною схемою постановки РНІФ [5]. Таблиця 2 Детекція інфекційних агентів за допомогою клатратних комплексів Herpes simplex virus Cytomegalovirus Trichomonas vaginalis Відсоток виявляємості (%) Клатратні кон'югати Стандартні діагностичні імуноглобуліни 87±1,9 83±1,8 89±2,0 87±1,9 82±1,7 76±1,5 Таким чином, клатратні комплекси імуноглобулінів з флюороресцеїнізотіоцианатом (ФІТЦ) підвищує чутливість люмінесцентного аналіза. Окрім того, речовина є стабільною до світла та окислення. Відповідно, використання цього комплексу є економічно вигідно. Джерела інформації: 1. Патент США №4341957:(G01N 021/64; G09K 003/00); Композиція антитіл, що флюоресцюють для імунофлуоресцентних реакцій.// Benz; William Н.; Schneck, Jr.; Thomas; Dixon; Harold A.; 2. Патент США №5877310: (С07Н 021/02; С07Н 017/08; 007Н 021/04; 5 51220 G01N 033/53); Конюговані з флуоресцентною міткою полісахаридні реагенти.// Nixon & Vanderhye; Higel; Floyd D. 3. Патент США №3853987 (А61К 027/04; G01N 031/22;) Імунологічний реагент для радіоімунної проби.// Haefliger; William W.; Padgett; Benjamin R.; Комп’ютерна верстка Л. Купенко 6 4. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран, М.: Наука, 1980. - 320с. 5. Гирін В.М., Порохницький В.Г., Вороненке С.Г. Посібник з медичної вірусології. К.: Здоровя, 1995. - 368с. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601