Спосіб забарвлювання препаратів головного мозку

Спосіб забарвлювання зрізів головного мозку, що включає візуалізацію структур зрізу, який відрізняється тим, що структури зрізу забарвлюють гексаціанофератом (III) калію при взаємодії з залізним і мідним купоросом. (19) (21) u201007778 (22) 21.06.2010 (24) 10.12.2010 (46) 10.12.2010, Бюл.№ 23, 2010 р. (72) ШИЯН ДЕНИС МИКОЛАЙОВИЧ, КОРОБКОВА ЛАРИСА КОСТЯНТИНІВНА, ЛУПИР ВІКТОР МИХАЙЛОВИЧ 3 ясно-зеленого кольору, добре розчинні у воді при кімнатній температурі. Червона кров'яна сіль K3[Fе(СN)6] являє собою червоні безводні кристали, що легко розчиняються у воді при кімнатній температурі. Спосіб виконують наступним чином Пластину мозку товщиною 3-5мм зі знятою м'якою мозковою оболонкою фіксують у 10% розчині формаліну 1-2 дні. Готують 1% розчин червоної кров'яної солі K3[Fе(СN)6], розчинення ведуть при кімнатній температурі. Готують 1% розчин залізного купоросу FeSO4×7H2O, розчиняють при кімнатній температурі. Готують 0,5% розчин мідного купоросу CuSO4×5H2O, підігрівають розчин на водяній лазні до 50-55°С, додають в нього 40мл фенолу, попередньо розплавленого на водяній лазні і 2-3 краплі концентрованої НС1. Усі розчини готують ex temporo, об'єми розчинів варіюють в залежності від площі пластини мозку, що офарблюється, так, щоб при зануренні в розчин пластина була покрита розчином цілком. Зріз мозку після фіксації промивають водопровідною водою і занурюють у теплий (50-55°С) розчин мідного купоросу на 1-2 хвилини. Змивають залишки розчину водопровідною водою і перекладають у розчин залізного купоросу на 2-3 хвилини. Промивають водопровідною водою і перекладають у розчин червоної кров'яної солі до одержання потрібного забарвлення (5-10 хвилин). Після забарвлювання препарат промивають водопровідною водою і диференціюють 5 % розчином аміаку. Зберігають за загальними правилами збереження препаратів. Спосіб ілюструють наступні приклади Приклад 1 Спосіб забарвлювання розрізу головного мозку в горизонтальній площині (за Р.Д. Синельниковим). Результат: кора головного мозку яскраво жовтогарячого кольору (повинна бути синього), біла речовина головного мозку жовтуватожовтогарячого кольору. Границя кори і білої речовини головного мозку слабко диференційована і не різко виражена. Кора головного мозку пофарбована нерівномірно, при навіть незначному диференціюванні (просвітлінні) втрачає колір. На даному зрізі визначаються базальні ядра головного мозку, яскраво жовтогарячого кольору (повинні бути синього), відповідно корі головного мозку. Границя ядер і білої речовини головного мозку не виразна, розпливчаста, що утрудняє їх диференціювання, також не точно визначаються форма і розміри даних ядер. Утворення сочевицеподібного ядра не помітні і не диференціюються один від одним. Через два тижні після збереження даного препарату в 10% формаліні забарвлення потьмяніло, кора головного мозку, як і базальні ядра, стали практично одного кольору з речовиною головного мозку, на дні посуду випав жовтуватий осад, розчин формаліну став менш прозорим. Приклад 2 Спосіб забарвлювання розрізу головного мозку в горизонтальній площині (за способом, що заявляється). Результат: кора головного мозку забарвлена в синьо-чорний колір, базальні ядра насиченого те 55427 4 мно-синього кольору, речовина головного мозку не забарвлюється і залишається білуватою. Границя кори головного мозку з білою речовиною виразна. Можливо більш точно установити товщину кори головного мозку. При диференціюванні (просвітлінні) визначається викреслюваність кори головного мозку і підкіркових структур, що сприяє більш точної деталізації утворень кори і підкіркових структур. Самі базальні ядра також чітко контурують з білою речовиною головного мозку. їхні утворення чітко диференціюються один від одного. Утворення сочевицеподібного ядра мають різний відтінок кольору, чіткі границі з білою речовиною головного мозку, завдяки чому є можливість найбільш точної і ймовірної деталізації їхньої форми і розмірів. Шкарлупа сочевицеподібного ядра має більш темне забарвлення, бліда куля й огорожа - більш світле, що підтверджується їх макромікроскопічною будовою і характерно для свіжого, не фіксованого і не забарвленого зрізу головного мозку. Таким чином, зберігається природне диференціювання як базальних ядер, так і їхніх структур. Даний препарат зберігався в 10% формаліні більш 1 місяця. Ніяких недоліків даного способу забарвлювання, будь то помутніння розчину, випадання осаду, нестійкість забарвлення, порушення анатомічних структур не спостерігалося. Приклад 3 Спосіб забарвлювання розрізу головного мозку у фронтальній площині (за Р.Д. Синельниковим). Результат: кора головного мозку світло синюватого кольору, біла речовина головного мозку світло бірюзового кольору. Границя кори і білої речовини головного мозку слабко диференційована і не різко виражена. Кора головного мозку забарвлена нерівномірно, при диференціюванні (просвітлінні) місцями втрачає колір забарвлення. На даних зрізах визначаються базальні ядра, соскоподібні тіла, хвостате ядро, таламус світло синього кольору, відповідно корі головного мозку. Границя підкіркових (субкортикальних) утворень і білої речовини головного мозку не виразна, розпливчаста, що утрудняє їх диференціювання, також не точно визначається їхня форма і розміри. Частково структура деяких субкортикальних утворень диференціюється, однак, близько лежачі один від одного не помітні і не диференціюються, являють собою єдине ціле, що не відповідає їх анатомічній будові. Через 1 місяць після збереження даних препаратів у 10% формаліні забарвлення стало ще менш насиченим, місцями потьмяніло, місцями зникло зовсім, кора головного мозку, як і деякі ядра, придбали не характерну їм викреслюваність, у деяких місцях кора втратила характерну їй шаруватість і топографоанатомічну структурність, аж до розшаровування. У посуді і на препаратах осаду не виявлялося, однак у деяких ємностях розчин формаліну став менш прозорим. Приклад 4 Спосіб забарвлювання розрізу головного мозку у фронтальній площині (за способом, що заявляється). Результат: кора головного мозку забарвлена в синьо-чорний, усі підкіркові утворення, що розта 5 55427 шовуються в білій речовині головного мозку, насиченого темно-синього кольору, речовина головного мозку не забарвлюється і залишається білуватою чи сірувато-білястою. Границя кори головного мозку з білою речовиною виразна, що уможливлює більш точно установити товщину кори головного мозку. При диференціюванні (просвітлінні) визначається викреслюваність і характерна анатомічна шаруватість кори головного мозку і підкіркових структур, що сприяє більш точної деталізації утворень кори і підкіркових структур. Самі ядра чітко контурують з білою речовиною головного мозку. їхні утворення і структури чітко диференціюються друг від друга. Структури ядер і інших підкіркових утворень мають різний відтінок синього кольору, завдяки чому стає можливою найбільш Комп’ютерна верстка О. Рябко 6 точна деталізація їхньої форми і розмірів. Зберігається природне диференціювання і структурність кори головного мозку, усіх ядер, їхніх частин і утворень. На ряді зрізів визначалися пофарбовані у світло синюватий колір волокна деяких провідних шляхів головного мозку, що мають зв'язок з ядрами і підкірковими структурами головного мозку. Причому ряд таких волокон, входячи в ядра головного мозку, приймали більш світле забарвлення, що робить їхнє диференціювання більш успішним. Дані препарати зберігалися з 10% формаліні більш 1 місяця. Недоліків даного способу не спостерігалося (помутніння розчину, випадання осаду, нестійкість забарвлення, порушення анатомічних структур). Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601