Спосіб фарбування нервової клітини

1 Спосіб фарбування нервової клітини що включає обробку зрізів 0,2% забуференим розчи ном крезилового фіолетового міцного з рН 3,8 протягом 25хв, який відрізняється тим, що диференціювання проводять після вміщення зрізів у бальзам в ультрафіолетовому опроміненні, наприклад, ртутно-кварцового пальника ПРК-2 протягом 30-45хв при віддаленні препаратів від пальника на відстань до 1 метра 2 Спосіб фарбування нервової клітини за п 1, який відрізняється тим, що термін опромінення препаратів залежить від товщини зрізу чим тонший зріз, тим менша експозиція опромінення препарату Винахід відноситься до медичної біологи, а саме до гістологи ВІДОМІ способи фарбування нервової клітки (аналоги) засновані на модифікації способу фарбування по Ніслю [2, 3, 4] Спосіб Нісля включає перефарбування зрізів, фіксованих у спирті, основним аніліновим барвником з наступним відмиванням надлишку барвника спиртом При цьому складові частини клітки сильніше утримують барвник, ніж маса волокон, що диференціюється швидше У результаті інтенсивно пофарбований клітинний матеріал різко виділяється на безбарвному тлі У фарбуванні клітки беруть участь ядерні структури і речовини, що знаходяться в цитоплазмі, - тигроідні грилки, грилки Нісля ЧИ речовина Нісля [4] вання барвника в підкисленному 96° спирті в розчині спирту і міцного аміаку і поміщення зрізів у бальзам Спосіб-прототип заснований на властивості базофільної речовини нервових кліток вибірково адсорбувати барвник при визначеному значенні рН барвного розчину [6] Недоліком прототипу є необхідність диференціювати зрізи мозкової тканини «на око», що знижує якість фарбування і порівнянність одержуваних результатів Істотним недоліком прототипу є вимивання барвника з клітки в процесі диференціювання У результаті клітини, що містять малу КІЛЬКІСТЬ базофільної речовини, цілком знебарвлюються При неповному видаленні розчину, що диференціює, знижується термін збереження (ДОВГОВІЧНІСТЬ) пофарбованих препаратів, що швидко знебарвлюються Задачою винаходу є створення способу для підвищення якості фарбування нервової клітки і термінів збереження (ДОВГОВІЧНОСТІ) пофарбованих препаратів шляхом усунення недоліків прототипу Поставлену задачу досягають тим, що, у відомому способі фарбування нервової клітини, що включає обробку зрізів 0,2% забуференним розчином крезилового фіолетового міцного з рН 3,8 протягом 25хв, згідно винаходу, диференціювання проводять після - вміщення препаратів у бальзам Недоліком аналогів є низька порівнянність одержуваних результатів при порівнянні дослідної і контрольної груп, а також препаратів, виготовлених у різний час, у різних лабораторіях і не тим самим лаборантом Це зв'язано з тим, що диференціювання проводиться «на око» Іншим недоліком є складність і тривалість процесу фарбування Близьким до пропонованого способу фарбування нервової клітки є рішення, запропоноване И В Вікторовим (1969) [3], що обрано як прототип Спосіб-прототип включає фарбування зрізів 10 - 15хв у 0,05% - 0,2% забуференному розчині крезилового фіолетового міцного з рН 3,6 - 3,8, відми 00 ю ю ю 55584 Для цього препарати опромінюють ультрафіолетовими променями (УФП) Диференціювання проводять протягом ЗО 45хв при віддаленні джерела випромінювання (ртутно-кварцовий пальник ПРК-2 у робочому ре жимі після розігрівання) від препаратів на відстань 1 метр Експозиція опромінення залежить від товщини зрізу (табл 1) і в сполученні з обраною відстанню в 1 метр запобігає нагріванню препаратів Таблиця 1 1 2 Товщина зрізу (мкм) Термін опромінення (хв) 10 ЗО Приклад застосування запропонованого способу фарбування нервової клітки Об'єкт дослідження - нервові клітини вагосимпатичного вузла кішки Фіксація 10% розчином нейтрального формаліну по авторському посвідченню СРСР №1636719 [1] Заливання в парафін Товщина зрізів Юмкм Фарбування за способом И В Вікторова (1969) [3] у 0,2% забуференому розчині крезилового фіолетового міцного з рН 3,8 протягом 25хв при температурі навколишнього середовища 22°С Просвітління Поміщення у бальзам Диференціювання в променях УФП протягом ЗОхв Пальник ПРК-2 вилучена від об'єкта на 1 метр Результати фарбування на безбарвному тлі контрастно виділяються пофарбовані нервові клітки Базофільна речовина нервової клітини насичена барвником (фігур) На мікрофотографії чітко видно, що нервові клітини мають неоднакову ЩІЛЬНІСТЬ фарбування базофільної речовини, що може бути витлумачене як різний функціональний стан нервової клітини в момент забору матеріалу на дослідження Електрофотометричним способом дослідження (Ю Т Тихомиров, 1970 [5]) встановлено, що показники в серії пофарбованих препаратів достовірні в порівнюваних характеристиках (Р