Спосіб отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, матеріал, що містить клітини передміхурової залози, та способи лікування фіброматозу матки, хронічного простатиту та порушень чоловічої стат

1 Спосіб отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, який полягає у використанні вихідного матеріалу передміхурової залози ссавця, при цьому витягнуту передміхурову залозу промивають, розрізають на мікрофрагменти та засівають отриманим матеріалом культуральні матраци, додають культуральне (ростове) середовище та сироватку ссавців, після чого здійснюють інкубацію в термостаті при ПОСТІЙНІЙ температурі з наступною витримкою при більш низькій температурі, який відрізняється тим, що для вилучення клітин передміхурової залози із фрагментів передміхурової залози забезпечують режим інкубації при ПОСТІЙНІЙ температурі, що знаходиться у діапазоні 35-40°С протягом від двох діб до шести тижнів з однократним зниженням температури до 4-25°С та витримкою при цій температурі, а також з однократним або періодичним зниженням концентрації сироватки ссавців, після чого збирають клітини передміхурової залози з культурального матраца та отримують матеріал для трансплантації 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що для промивання передміхурової залози використовують холодний розчин Хенкса із додаванням антибіотиків 3 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що перед подрібненням передміхурової залози видаляють капсулу залози та прошарки сполучної тканини з кровоносними судинами 4 Матеріал, що містить клітини передміхурової залози, отримані з передміхурової залози ссавця, який відрізняється тим, що він отриманий способом за п 1 5 Спосіб лікування фіброматозу матки, при якому вводять біологічно активні елементи, який відрізняється тим, що біологічно активний елемент матеріал, що містить клітини передміхурової залози, за п 4, та здійснюють його трансплантацію 6 Спосіб за п 5, який відрізняється тим, що матеріал, що містить клітини передміхурової залози, трансплантують внутрім'язово, зокрема в прямий м'яз живота, або в паренхіму печінки, або через портальну вену, або через гілки портальної вени, або в пульпу селезінки, або в порожнину очеревини, або в селезінкову артерію, або в спеціально створену м'язову кишеню, або підшкірно 7 Спосіб лікування хронічного простатиту, при якому вводять біологічно активні елементи, який відрізняється тим, що біологічно активний елемент - матеріал, що містить клітини передміхурової залози, за п 4, та здійснюють його трансплантацію 8 Спосіб за п 7, який відрізняється тим, що матеріал, що містить клітини передміхурової залози, трансплантують внутрім'язово, зокрема в прямий м'яз живота, або в паренхіму печінки, або через портальну вену, або через гілки портальної вени, або в пульпу селезінки, або в порожнину очеревини, або в селезінкову артерію, або в спеціально створену м'язову кишеню, або підшкірно 9 Спосіб лікування порушення чоловічої статевої функції, при якому вводять біологічно активні елементи, який відрізняється тим, що як біологічно активний елемент використовують матеріал, що містить клітини передміхурової залози, за п 4, та здійснюють його трансплантацію 10 Спосіб за п 9, який відрізняється тим, що матеріал, що містить клітини передміхурової залози, трансплантують внутрім'язово, зокрема в пря О о 00 со ю 53780 мий м'яз живота, або в паренхіму печінки, або через портальну вену, або через гілки портальної вени, або в пульпу селезінки, або в порожнину очеревини, або в селезінкову артерію, або в спеціально створену м'язову кишеню, або підшкірно Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до способу отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози та призначеного для трансплантації хворим, самого матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, який отримано новим способом, і до трансплантолопчним методам лікування фіброматоза матки, хронічного простатиту та порушень чоловічої статевої функції шляхом трансплантації отриманого матеріалу Відомо спосіб отримання матеріалу з внутрішньоутробних плодів людини та ссавців (плодів свині, плодів великої рогатої худоби), що містить зокрема, острівкові клітини підшлункової залози Спосіб полягає в тому, що підшлункову залозу внутрішньоутробних плодів людини, великої рогатої худоби або свині витягують в стерильних умовах, промивають в розчині Хенкса з антибіотиками, розрізують на фрагменти розміром 2-Змм, які знов промивають розчином Хенкса з антибюртиками Потім тканину занурюють в 0,1-0,3% розчин коллалітину (препарат, що містить коллагеназу) або суміш рівних частин 0,1% розчину коллалітину та 0,1% розчину трипсіну на 20-30 хвилин при температурі 20-22 Далі видаляють розчин ферментів, переносять матеріал в 0,3% розчин трипсіну, поміщують на магнітний розмішувач та піддають обробці протягом 15-20 хвилин Роблять два-три злива розчина трипсіна із завислими у ньому поодинокими клітинами та невеличкими КЛІТИННІ комплексами у центрифужні флакони, а потім центрифугують та залишок ресуспензують Отримані неосаджені клітини та КЛІТИННІ комплекси пофракційно відокремлюють та засівають ними культуральні матраци Інкубацію проводять при темперературі 36-37 протягом 8-10 днів із заміною ростового середовища кожні 3-4 дні При цьому була отримана культура, переважну частину якої складають Ь-клітини (див Експерементаьні основи клінічної трансплантації острівкових клітин/ Шумаков В І, Блюмкін В Н , Скалецький Н Н , Шальнев Б І в збірці "Трансплантація підшлункової залози (нариси)", м, "Канон" 1995 -С 38-42) Відомо спосіб отримання суспензії життєздатних клітин Лейдига ссавців - штерстаціальних клітин текстикул ембріона людини, корови, свині, а також новонароджених поросят та телят, до того ж новонароджені особини мають бути максимально раннього віку для того, аби не встигла сформуватися стабільна антигенна видова специфічність Для приготування суспензії використовуються розчини, які містять поживний субстрат для клітин, зокрема склади стандартних середовищ для клітин тваринної тканини - середовищами Ігла, розчинами Хенкса, середовищем 199 та подібними При цьому усі операції проводяться в асептичних умовах Отримана суспензія має бути стерильною (см патент Російської Федерації №2078590, А 61 М 37/00, А 61 К 35/48, публ 10 05 97) До недоліків відомого способу відноситься значна втрата клітин в процесі багатоетапної обробки матеріалу, зокрема, під час знаходження на магнітному розмішувачі та при центрифугуванні, а також при фракційному осадженні клітинних комплексів та поодиноких клітин Відомо матеріал, що містить бета-клітини, який отримано зазначеним вище способом, (див там же ж) До недоліків відомого матеріалу, отриманого даним способом, відноситься його знижена біологічна активність, спричинена недоліками способу його отримання, в процесі якого частина клітин знищується, а частина травмується при знаходженні на магнітному розмішувачі та при центрифугуванні Відомо спосіб лікування фіброматозу матки із застосуванням андрогенів та анаболічних стероїдів (див Травянко Т Д , Сольський Я П "Довідник з акушерсько-гінекологічної ендокринологи" Київ "Здоров'я" 1989, с 196-197) Відомо спосіб лікування фіброматозу матки із застосуванням агоніста гонадотропш-рилізінг гормону (див Лейн Дж Та ш Застосування агоніста гонадотропін-рилізінг гормону для лікування гінекологічних захворювань "Акушерство та гінекологія", №2,1991, -17с) Однак ці способи лікування не ефективні в ряді випадків До того ж у (певного процента хворих після закінчення лікування, внаслідок якого сталося зменшення розміру пухлини, згодом пухлина знов збільшувалася Відомо спосіб лікування хронічного простатиту, який полягає в тому, що пацієнту під капсулу обох долей передміхурової залози уводять суспензію життєздатних клітин Лейдига (клітин ембріональної текстикулярної тканини) ссавців ембріонального походження та новонароджених у долі не менш 2 млн клітин в 1мл (див патент Російської Федерації №2078590, А 61 М 37/00, А 61 К 35/48, публ 10 05 97) Відомо спосіб лікування хворих з порушеннями чоловічої статевої функції, який полягає втому, що пацієнту під білкову оболонку яєчка уводять суспензію клітин Лейдига (клітин ембріональної текстикулярної тканини) в КІЛЬКОСТІ не менш 2 млн клітин в 1мл (див патент Російської Федерації №2026643, МКВ А 61 В 17/00, А 61 К 35/48, публ 20 01 95) До недоліків цих способів можна віднести деяку їх складність та небезпеку травмування ВІДПОВІДНИХ органів з можливим розвитком в майбутньому запального процесу (у тому числі автоімунного характеру), тому що для досягнення позитивного результату лікування необхідно вводити суспензію клітин під капсулу долей передміхурової залози або під білкову оболонку яєчка Задачею винаходу, який відноситься до спо 53780 собу отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, є його спрощення, збільшення гарантовано високого відсотку (до 90%) витягу непошкоджених клітин з вихідного матеріалу та здешевлення за рахунок відмови від застосування ферменту, що містить коллагеназу Задачею винаходу, який відноситься до матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, є отримання матеріалу з високою біологічною активністю Задачею винаходу, який відноситься до способів лікування фіброматоза матки, хронічного простатиту та порушення чоловічої статевої функції, є підвищення ефективності лікування за рахунок використання матеріалу з високою біологічною активністю Поставлена задача вирішується тим, що при отриманні матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, використовують передміхурову залозу дорослого молодого або новонародженого кролика (можливе використання передміхурової залози іншого ссавця), при цьому витягнуту передміхурову залозу промивають в розчині Хенкса з доданням антибіотиків, розрізують її на фрагменти і засівають отриманим матеріалом культуральні матраци, додаючи культуральне (ростове) середовище та сироватку ссавців, потім забезпечують необхідний (оптимальний) режим для культивуемих мікрофрагментів передміхурової залози, для чого здійснюють інкубацію при температурі 3540°С протягом від двох діб до шести тижнів з однократним або багатократним зниженням температури до 4-25°С та витримкою при зниженій температурі, а також із тимчасовим однократним або періодичним зниженням концентрації сироватки Поставлена задача для матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, вирішується шляхом використання зазначеного вище способу його отримання Поставлена задача для способу лікування фіброматозу матки вирішується при його здійсненні, в процесі якого проводять трансплантацію матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, при цьому зазначений матеріал може бути трансплантованим в різні органи та тканини підшкірно, внутрім'язно, зокрема, в прямий м'яз живота, в печінку (безпосередньо в паренхіму або через портальну вену або й гілки), в пульпу селезінки, в селезінкову вену, в порожнину очеревини, в спеціально створену м'язову кишеню, в паренхіму печінки або у великий сальник Принципова відміна способу отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, згідно з даним винаходом, полягає в його простоті та відносно низькій собівартості за рахунок того, що в якості вихідного матеріалу використовується передміхурова залоза новонароджених, молодих або дорослих кроликів, а не ембріонів, як у найближчому аналозі Для запропонованого способу можливо і використання ембріонів ссавців, але це не є доцільним, тому що залозисті структури в ембріональній передміхуровій залозі ще не сформовані При здійсненні способу згідно з даним винаходом виключаються операції, які травмують клітини передміхурової залози, а саме центрифугування, обробка на магнітному розмішувачі, та операція обробки ферментом для розчинення колагенових волокон Згідно З даним винаходом вдається забезпечити вивільнення більш як 90% клітин передміхурової залози, що містяться у ВИХІДНІЙ передміхурової залозі Для отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, може бути використана передміхурова залоза ссавців, зокрема, новонароджених ссавців або їх плодів Досвід доводить, що можливе використання передміхурової залози великої рогатої худоби та їх плодів, а також коней та свиней, плода людини, але найбільш доступним та дешевим матеріалом є передміхурова залоза новонароджених, молодих або дорослих кроликів Для отримання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, витягують передміхурову залозу, наприклад, молодого або дорослого кролика, і занурюють її в холодний розчин Хенкса з доданням антибіотиків Вийнявши передміхурову залозу із розчину, видаляють її капсулу та прошарки сполучної тканини з кровоносними судинами Декапсуловану передміхурову залозу подрібнюють до мікрофрагментів розміром до 1мм і знов промивають розчином Хенкса з доданням антибіотиків Отриманим матеріалом засівають культуральні матраци, куди додано культуральне (ростове) середовище та сироватку великої рогатої худоби Потім засіяні культуральні матраци розташовують в термостаті, де забезпечують оптимальний режим для клітин передміхурової залози, для чого здійснюють інкубацію при ПОСТІЙНІЙ температурі, що знаходиться в діапазоні 35-40°С, протягом від двох діб до шести тижнів, при цьому однократно знижують температуру в залежності від необхідності (за культурою ведеться мікроскопічний контроль) до 4-25°С, та витримують сталий час при зниженій температурі Тривалість витримки визначається експериментально для конкретного вида культури клітин Для отримання високоякісного матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, проводять тимчасове однократне або періодично повторюване зниження концентрації сироватки Час витримки при зниженій концентрації сироватки також визначається експериментально для конкретного виду культури клітин передміхурової залози Отриманий матеріал може бути використаним для трансплантації безпосередньо після збору або збереженим достатньо тривалий час до операції при зниженій температурі або за допомогою заморожування Спосіб лікування фіброматоза матки здійснюють із застосуванням матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, які отримано із використанням запропонованого способу Вибір способу введення матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, може бути різним, тобто матеріал може бути трансплантовано в різні органи та тканини внутрім'язно, зокрема, в прямий м'яз живота, в печінку (в паренхіму або через портальну вену або и гілки), В пульпу селезінки, в селезінкову вену, в порожнину очеревини, в спеціально створену м'язову кишеню, в паренхіму печінки або у великий сальник або підшкірно 53780 Найбільш просте по техніці виконання, ефективне та найменш травматичне для хворого є введення матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, за допомогою шприца в прямий м'яз живота Аналогічним образом здійснюють способи лікування хронічного простатиту та порушення чоловічої статевої функції Використання матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, який отримано запропонованим способом, для трансплантації дозволить суттєво підвищити ефективність операції, спростити отримання та знизити собівартість отриманого матеріалу, що в свою чергу є передумовою для широкого впровадження зазначених вище способів лікування Нижче наведені приклади ілюструють ефективність трансплантації матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, у випадках фіброматозу матки, хронічнім простатиті та порушенні чоловічої статевої функції Приклад 1 Хвора С Є , 52 роки, надійшла в гінекологічне відділення з діагнозом фіброматоз матки При УЗД на ЛІВІЙ СТІНЦІ матки виявляється ділянка фіброматоза без чітких контурів із середнім діаметром 23мм Мюметрій трохи неоднорідної ехо-структури Висновок Фіброматоз тіла матки 8 Через 4 доби після надходження хворої було виконано внутрім'язну трансплантацію матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, отримані від молодих кроликів Ще через 2 дні хвору було виписано із стаціонару під амбулаторний нагляд При контрольному УЗД, яке було проведено через 6-тижнів після трансплантації, були отримані такі дані при дослідженні матки ділянок фіброматозу не виявлено Мюметрій звичайної структури Висновок патологічних змін не виявлено Наступний 16-місячний нагляд ознаки рецидів фіброматузу матки не виявив Приклад 2 Хворий Б В , 39 років Страждає на хронічний простатит на протязі 8 років Неодноразові курси традиційного лікування у уролога та сексопатолога не дали позитивного ефекту Хворому було виконано внутрім'язну трансплантацію матеріалу, що містить клітини передміхурової залози, отримані від дорослих кроликів Вже через 2 тижні після пересадки хворий почав відмічати значне поліпшення стану здоров'я, підвищення працездатності На протязі наступних 2 МІСЯЦІВ у хворого підвищилася сексуальна активність частота повноцінних сексуальних контактів збільшилася від 2,1 на місяць до 2,5 на тиждень Таке значне покращання статевої функції відзначалося не менш як на протязі 8 МІСЯЦІВ ПІСЛЯ трансплантації ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24