Спосіб одержання біопрепарату з імуностимулюючими властивостями для тварин

Спосіб одержання біопрепарату з імуностимулюючими властивостями для тварин, що включає приготування та поєднання ферментативноультразвукових лізатів мікобактерій вакцинного 3 60462 кобактерій вакцинного штаму БЦЖ з водносольовим екстрактом хвої в встановленому співвідношенні компонентів. На першому етапі проводять культивування і нарощування біомаси мікобактерій туберкульозу бичачого виду вакцинного штаму БЦЖ у рідкому елективному середовищі Сотона. Для реалізації способу використано мікобактерії туберкульозу бичачого виду вакцинного штаму БЦЖ, які були висіяні на елективне живильне середовище Левенштейна-Йенсена з ампули вакцини БЦЖ, виготовленої на Ставропільській біофабрицї (Росія). Приготування ферментативно-ультразвукових лізатів мікобактерій вакцинного штаму БЦЖ здійснюють шляхом інактивації отриманої біомаси упродовж години за двох атмосфер, відокремлення її від середовища культивування, проведення ферментативного гідролізу 0,2 % розчином лізоциму з півгодинною витримкою на холоді, седиментації та озвучення водної суспензії мікобактерій 3 (40 мг/см ) на ультразвуковому дезінтеграторі (УЗДН) упродовж 20 хвилин при 22 кГц . Для зменшення реактогенності та підвищення імуностимулюючої дії препарату на макроорганізм запропонований спосіб передбачає введення до складу біопрепарату екстракту молодих пагонів хвойних дерев (ялини, сосни). На другому етапі здійснення способу готують водно-сольовий екстракт хвої шляхом автоклавування подрібненої хвойної сировини за однієї атмосфери упродовж 20 хвилин та подальшої екстракції ізотонічним розчином хлориду натрію у співвідношенні 1:5, двохгодинного настоювання, екстрагування при високій температурі, фільтрації та стерилізації. Експериментально встановлена ареактогенність біопрепарату за ефективного співвідношення бактеріального і хвойного компонентів, мас. ч.: ферментативно-ультразвукові лізати мікобактерій вакцинного штаму БЦЖ 0,5-1 водно-сольовий екстракт хвої 4-8. В результаті здійснення способу отримано новий біопрепарат з імуностимулюючими властивос 4 тями. Біопрепарат отримано завдяки сукупності властивостей штаму БЦЖ, запропонованого способу лізису біомаси клітин мікобактерій, введення водно-сольового екстракту хвої та встановленого співвідношення компонентів. Приготування суспензій мікобактерій надтонкої дисперсності (частинки розміром у декілька мікрометрів і менше) за допомогою ферментативного гідролізу лізоцимом у поєднанні з ультразвуком низької частоти впливає на більш повне поглинання і розщеплення білків мікобактерій ферментами макрофагальної системи порівняно з цілими бактеріальними клітинами за рахунок чого спостерігається підвищення імунологічної активності макроорганізму. Поєднання ферментативно-ультразвукових лізатів мікобактерій вакцинного штаму БЦЖ з біологічноактивними речовинами водно-солевого екстракту хвої у запропонованому співвідношенні зменшує реактогенність препарату та розширює імуностимулюючу дію на макроорганізм. Можливість здійснення корисної моделі підтверджується конкретними прикладами. Приклад 1. Групі кролів вагою 2-2,5 кг внутрішньошкірно у дозі 0,2 см вводили новий біопрепарат з імуностимулюючими властивостями та імуномодулятор з вакцинного штаму БЦЖ без рослинного компоненту та обробки ультразвуком, який прийнято за прототип. За результатами проведеного досліду встановлено, що новий біопрепарат з імуностимулюючими властивостями виявив суттєво слабшу реактогенність (утворення на місці введення почервоніння, що зникало упродовж 6 діб) порівняно з прототипом, який викликав у піддослідних тварин утворення папул діаметром 23 мм, які за час спостереження (10 діб) не розсмоктувались, що свідчить про його реактогенність. Приклад 2. Висока імуностимулююча дія одержаного біопрепарату підтверджена результатами дослідження показників фагоцитарної активності крові тварин (табл. 1). Таблиця 1 Показники фагоцитарної активності крові кролів, n=3, M±m Група тварин Дослідна Контроль І Контроль здорові Введено Показники активності ПМЯЛ Процент фагоФагоцитарний інФагоцитарне чисцитозу декс ло Біопрепарат, заявленим способом Імуномодулятор (прототип) II, Еквівалентна кількість стерильної води 64,3±3,6* 24,7±3,9* 32,6±2,49* 40,33±0,96 23,15±0,92 11 ±0,2 16,6±1,33 1,65±0,2 4,3±0,95 Примітка: *- достовірно по відношенню до контролю р≤ 0,05 Як видно, з наведених у таблиці даних, біопрепарат при одержанні заявленим способом підвищує активність клітинної ланки неспецифічного імунітету тварин порівняно з прототипом до 59 відсотків. 5 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 60462 6 Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП ―Український інститут промислової власності‖, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601