Спосіб отримання препарату інтерферону з сорбційним матеріалом

Спосіб отримання препарату інтерферону з сорбційним матеріалом, який відрізняється тим, 3 що інтерферон в концентрації 1×10 МО/мл сорбується на 70 % Ентеросгелі (80 мг/кг ваги) при температурі 4-10 °С протягом однієї години і застосовують перорально. (19) (21) u201013181 (22) 05.11.2010 (24) 11.07.2011 (46) 11.07.2011, Бюл.№ 13, 2011 р. (72) СПІВАК МИКОЛА ЯКОВИЧ, ГАНОВА ЛАРИСА ОЛЕКСАНДРІВНА, ДЕМЧЕНКО ОЛЬГА МИКОЛАЇВНА, ШЕВЧУК ВЕРОНІКА ОЛЕКСАНДРІВНА 3 лекули інтерферону, що дозволяло застосувати цей комплекс перорально. Встановлено, що в отриманому препараті біологічна активність вихідних компонентів не тільки зберігається, але й значно підвищується. Це є суттєвою ознакою для характеристики комплексного препарату. Спосіб виготовлення комплексного препарату включає в себе виготовлення суспензії Ентеросгеля шляхом його подрібнення та додавання до водної суспензії інтерферону в оптимальних концентраціях, з послідуючим витримуванням на протягом 1 години при температурі 4-10°С для здійснення адсорбції. Оптимальні дози та співвідношення складових субстанцій комплексного препарату підібрані на модельних системах - фагоци 61014 4 тах (моноцити та нейтрофільні гранулоцити) периферічної крові людини та на інтактних мишах лінії SHK. Фагоцити отримували загальновідомим шляхом центрифугування крові людини на ступінчатому градієнті щільності фікол-верографін (p=1,12 та 3 1,077 г/см ) при 400 g на протягом 40 хвилин. Отримані клітини наносили на предметні скельця та обробляли різними дозами інтерферону, після чого визначали показники їх бактерицидної активності, використовуючи нітро-синій тетразолій. Як свідчать дані, представлені в таблиці 1, концент3 рація інтерферону 5×10 МО/мл є оптимальною, бо найбільше підсилювала бактерицидну активність фагоцитів. Таблиця 1. Вплив різних концентрацій інтерферону на фагоцити крові в умовах in vitro. Кількість НСТ-позитивних клітин на 100 фагоцитів, % Дози інтерферону МО/мл Нейтрофільні гранулоцити Моноцити 1 1×10 12 65 2 1×10 18 69 3 1×10 19 72 3 3×10 22 73 3 5×10 29 83 4 1×10 25 71 4 5×10 22 70 Контроль (плацебо) 10 36 Оптимальну дозу Ентеросгеля визначали в умовах in vivo на мишах лінії SHK, яким вводили вказаний препарат перорально у формі розведеного водою 70 % гідрогеля. Через 24 години у тварин в асептичних умовах отримували перитонеальні макрофаги та визначали їх бактерицидну активність, використовуючи нітро-синій тетразо лій. Як свідчать дані, представлені в таблиці 2, препарат стимулював бактерицидність макрофагів в дозах від 125 до 60 мг/кг ваги. Для створення комплексного препарату нами була вибрана проміжна доза - 80 мг/кг ваги. Таблиця 2. Визначення оптимальної дози Ентеросгеля при дії на бактерицидність макрофагів мишей. Доза г/кг Ентеросгеля Кількість НСТ-позитивних клітин на 100 макрофагів в % 23 43 10 43 2,5 49 1,0 53 0,5 52 0,250 58 0,125 63 0,060 67 0,030 25 0,015 24 Контроль 23 На підставі отриманих експериментальних даних складена композиція включала 80 мг/кг 70 3 % Ентеросгеля та 5×10 МО/мл інтерферону. Дію одержаного препарату вивчали на бактерицидній активності макрофагів мишей лінії SHK, які отримували його перорально. Контрольні тва рини отримували інтерферон або Ентеросгель в оптимальних дозах або плацебо. Бактерицидну активність макрофагів тварин визначали в тесті з нітро-синім тетразолієм. Отримані дані представлені в таблиці 3. 5 61014 6 Таблиця 3. Вплив препарату на бактерицидну активність макрофагів мишей. Групи тварин, що отримували: Бактерицидна активність макрофагів в НСТ-тесті (у.о.) Плацебо 0,250 Інтерферон 0,502 Ентеросгель 0,390 Заявлений препарат 0,654 Як свідчать результати, наведені у таблиці 3, при введенні в організм комплексного препарату, який включає інтерферон та Ентеросгель, біологічна активність його складових значно підсилюється. Даний препарат в подальшому був вивчений на експериментальній моделі синьогнійної палочки (Pseudomonas aeruginosa штамм 103) у мишей лінії СВА. Вплив комплексного препарату на показники імунологічної реактивності організму визначали по зміні ефекторних функцій макрофагів та природних клітин-кіллерів. Персистенцію бактерій у організмі визначали по висівам проб з селезінки тварин. Контрольні групи мишей отримували або препарат інтерферону, або Ентерос гель, в дозах, в яких ці компоненти були включені в комплексний препарат. Як свідчать дані, представлені у таблиці 4, перебіг інфекції Pseudomonas aeruginosa супроводжувався значним пригніченням функціональної здатності природних клітин-кіллерів та макрофагів. Введення комплексного препарату інтерферону з Ентеросгелем на фоні інфекційного процесу приводило до значного зменшення кількості персистуючих бактерій в організмі тварин, підвищення функціональної активності клітин-ефекторів імунореактивності. Терапевтична ефективність комплексного препарату інтерферону була значно вищою терапевтичної ефективності його складових. Таблиця 4. Вплив препарату на персистенцію бактерій та функціональну активність клітин-ефекторів. Групи тварин Показники активності клітин-ефекторів Активність природних Бактерицидна активність клітин-кіллерів (%) макрофагів (У.о. ×100) КУО/0,1 мл Час після зараження мишей (доби) інтактні Інфіковані + інтерферон Ентеросгель Заявлений препарат 1 82,1 48,1 2 4 11 1 2 4 11 82,1 48,1 110,9 92,4 82,1 61,3 85 86,9 82,1 67 82,7 85,2 43,1 25,2 43,1 25,2 180,7 59,2 43,1 29,3 77,5 46 43,1 41,1 46,5 46,2 190 134,4 55,7 157,3 147,3 110,9 Література: 1. Спивак Н.Я., Назаренко Л.Н., Михайленко О.Н. Интерферон и система мононуклеарних фагоцитов. К., Фитосоциоцентр 2002, 164 стр. 2. Белоцкий СМ., Спивак Н.Я. Интерфероны: биологические и клинические эффекты К., Фитосоциоцентр 2006, 288 стр. Комп’ютерна верстка І.Скворцова 1 5*10 2 6 4 11 6 2*10 50 4 1*10 3*10 0 50 2 30 0 5*10 3 2*10 5 2*10 2*10 5 3 3. Попов В.Ф. Лекарственные формы интерферона М., Триада-х, 2001, 136 стр. 4. Лазаренко Л.Н., Спивак М.Я., Михайленко О.М., Сухих Г.Т. Папіломавіруна інфекція та система інтерферону К., Фітосоціоцентр 2005, 304 стр. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601