Спосіб виявлення нервових елементів в тотальних плівчастих анатомічних препаратах

Спосіб виявлення нервових елементів в тотальних плівчастих анатомічних препаратах з використанням фуксинсірчистої кислоти – реактиву Шиффа, який відрізняється тим, що досліджуваний матеріал фіксують в 1 % розчині сульфосаліцилової кислоти, промивають послідовно до та після процесу забарвлення спочатку у водопровідній, а потім у дистильованій воді, просвітлюють в розчинах гліцерину та дистильованої води в співвідношеннях 1:4, 1:2, 3:4 та двох змінах чистого гліцерину. Винахід стосується до області медицини, а саме гістології. Рівень техніки Відомі методи виявлення нервових елементів в тотальних анатомічних препаратах В.П. Воробйова в модифікаціях Ф.А. Волинського, А. Шабадаша, Н.Кондратьєва [1, С. 374-382], Вшивцевої [2] з використанням метиленового синього. Недоліками цих методів є нестабільність результатів, швидке зникнення та неоднорідність забарвлення, істотна залежність результату від свіжості матеріалу. Більш досконалим є спосіб виявлення нервових елементів з використанням фуксінсірчистої кислоти (реактиву Шиффа) [3]. Метод оснований на здібності деяких компонентів нефіксованих тканин (а саме плазмалогенів) під впливом розчинів кислот або безпосередньо реактиву Шиффа утворювати альдегідні залишки, які вступають в реакцію з барвником. Для здійснення цього способу промитий у проточній воді матеріал (частини органів або цілі органи, що підлягають просвітленню) без попередньої фіксації або після фіксації протягом 2-3 годин в 5 % розчині сульфосаліцилової кислоти занурюють в фуксінсірчисту кислоту на термін від 3 до 24 годин до появи інтенсивного забарвлення нервових елементів в пурпурно-червоний колір. Об'єм барвника повинен перевищувати об'єм препарату не менш, ніж у 10 разів. Готують фуксінсірчисту кислоту за прописом [4, С. 296], і для забарвлення анатомічних препаратів розбавляють сірчистою водою (см. приготування [4, С. 296]) в співвідношенні 1:4. Контроль за появою забарвлення здійснюють шляхом періодичного перегляду препаратів неозброєним оком або за допомогою бінокулярної лупи. Процеси забарвлення та промивки здійснюють в умовах кімнатної температури (20-25°С) в темряві. Після забарвлення препарат промивають в 5 змінах сірчистої води: протягом 30 хвилин в першій зміні з постійним похитуванням і по 12 годин ще в 4 змінах. Об'єм води повинен перевищувати об'єм препаратів в 30 разів. Для просвітлення препарати переносять в суміш гліцерину і сірчистої води в співвідношенні 1:2, а потім в чистий гліцерин. Просвітлений препарат можна заключати в скляну камеру. Результат: в інтенсивний пурпурно-червоний колір забарвлюються мієлінізовані та немієлінізовані нерви, нервові стовбури і волокна, вегетативні вузли та (19) UA (11) 76373 (13) C2 (21) a200501024 (22) 04.02.2005 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (72) Ковальова Ілона Михайлівна (73) Ковальова Ілона Михайлівна (56) Farooqui A.A., Horrocks L.A. Plasmalogens: workhorse lipids of membranes in normal and injured neurons and glia // Neuroscientist. - 2001. - Vol.7, № 3. -P. 232-245. Ромейс Б. Микроскопическая техника. - Москва. :Изд-во Иностранной литературы, 1953. - 718 с., с. 294-297. Шубич М.Г., Ходос А.Б, Гистохимический метод окраски нервных элементов в тотальных анатомических препаратах // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1964. - Т. 47, № 7. - С. 102-104. 3 76373 4 сплетення, фон залишається безбарвним або стійкості забарвлення з можливістю виготовлення приймає відтінки рожевого. постійних макро- та мікропрепаратів для вивчення Недоліками цього способу є низька та демонстрації нервових елементів. контрастність забарвлення препаратів, фіксованих Спосіб здійснюють наступним чином. у 5 % сульфосаліциловій кислоті, неповне виявДобре промитий від залишків крові матеріал лення нервових елементів в нефіксованих препа(тверда оболона головного мозку) фіксують в 1% ратах, швидке знебарвлення препаратів. розчині сульфосаліцилової кислоти протягом 1 Метою винаходу є поліпшення якості та години, промивають в проточній воді 45 хвилин, стандартизація виготовлення препаратів за рахупотім в дистильованій воді 15 хвилин. Забарвленнок підвищення селективності та стійкості забарвня в розведеній сірчистою водою у співвідношенні лення нервових елементів в плівчастих 1:4 фуксінсірчистій кислоті здійснюють в банках з анатомічних препаратах. притертими кришками в умовах кімнатної темпеПоставлена мета досягається тим, що при ратури 20-25°С в темряві протягом 12-18 годин. здійсненні способу досліджуваний матеріал Промивають в 5 змінах сірчистої води, в першій фіксують в 1 % розчині сульфосаліцилової кислопорції 30 хвилин при постійному коливанні, в поти, промивають послідовно до та після процесу дальших порціях по 12 годин, потім в проточній забарвлення спочатку у водопровідній, а потім у воді 45 хвилин та 15 хвилин в дистильованій воді. дистильованій воді, просвітлюють в розведеннях Просвітлюють препарати в суміші гліцерину та гліцерину та дистильованої води в дистильованої води в співвідношеннях 1:4, 1:2, 3:4 співвідношеннях 1:4, 1:2, 3:4 та двох змінах чистоі в двох порціях чистого гліцерину по 12 годин в го гліцерину. кожній. Новизна методу, що пропонується для виявВ 276 випробуваннях ми отримали лення нервових елементів в плівчастих препарадемонстративні препарати з інтенсивно забарвлетах, полягає в тому, що фіксацію матеріалу ними в пурпурно-червоний колір нервових здійснюють в 1 % розчині сульфосаліцилової кистовбурів, сплетень і окремих нервових волокон слоти. Нами емпірично встановлено, що викорина майже безбарвному фоні (див. фото). При цьостання цього фіксатора в концентрації 1 % му контрастність препаратів не зникала при їх забезпечує найбільш повне, чітке і контрастне визбереженні більше 2 років, що дозволяє викориявлення нервових елементів. У випадку застосустовувати їх в якості музейних препаратів. вання меншої концентрації процес забарвлення Висококонтрастне, повне та стійке забарвлентриває довший час, погіршується контрастність і ня нервових елементів дозволяє застосовувати повнота виявлення нервових елементів. При запропоновану методику, для науковозбільшенні концентрації сульфосаліцилової кислодослідницької роботи, зокрема для встановлення ти або часу фіксації контрастність забарвлення топографії, типів гілкування, зон розповсюдження погіршується внаслідок інтенсивного забарвлення нервів без додаткового препарування, а також в фону. Це пояснюється тим, що здатність навчальному процесі у вищих медичних навчальморфологічних структур до забарвлення реактиних закладах, для виготовлення музейних вом Шиффа обумовлена формуванням під дією препаратів. кислоти вільних альдегідних груп в групі Джерела інформації, прийняті до уваги під час плазмалогенів, які за сучасними даними в експертизи найбільшій кількості містить нервова тканина [5]. 1. Роскин Г. Й., Левинсон Л.Б. МикроскопичеПри збільшенні концентрації кислоти або ская техника. - Москва.: «Советская наука», 1957. тривалості її дії вільні альдегідні групи утворюють468 с. ся не лише в нервовій, айв інших тканинах, що 2. Вшивцева В.В. Способ окрашивания нервпризводить до забарвлення фону. В сірчистій воді ной ткани. Авт. свид. СССР № 986861. -Бюллетень відбувається диференціювання препаратів та ви«Открытия, изобретения». - 1983.- № 1. далення надлишку барвника з тканин. При 3. Шубич М.Г., Ходос А.Б, Гистохимический застосуванні прототипу відсутній етап закріплення метод окраски нервных элементов в тотальных забарвлення, натомість, для просвітлення анатомических препаратах // Архив анатомии, гиспрепаратів використовується сірчиста вода, як тологии и эмбриологии. - 1964. - Т. 47, № 7. - С. складова частина проміжного середовища. Її за102-104. лишок в чистому гліцерині призводить до дифузії 4. Ромейс Б. Микроскопическая техника. - Мобарвника і швидкого знебарвлення препаратів. За сква. :Изд-во Иностранной литературы, 1953. – рахунок перерахованих вище прийомів 718 с. досягається висококонтрастне, повне та стійке 5. Farooqui A.A., Horrocks L.A. Plasmalogens: забарвлення нервових елементів. Переваги заworkhorse lipids of membranes in normal and injured пропонованого способу в забезпеченні 100% виneurons and glia // Neuroscientist. - 2001. - Vol.7, № ходу якісних препаратів, стабільності результатів, 3. -P. 232-245. 5 Комп’ютерна верстка М. Клюкін 76373 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601