Спосіб гліцерин-бутанол-парафінової заливки матеріалу для гістологічних досліджень

Спосіб гліцерин-бутанол-парафінової заливки матеріалу для гістологічних досліджень, який відрізняється тим, що при виготовленні гістологічних препаратів досліджуваний матеріал поступово зневоднюють у розведеннях гліцерину 25%, 50%, 75%, 90% та двох порціях 100% гліцерину по 2 години в кожній порції при температурі 37°С; проводять послідовно через суміш бутанол-гліцерин (37°С), дві порції чистого бутанолу (37°С), парафін №1 (54°С) -12 годин, парафін №2 (54°С) -12 годин. (19) (21) a200501391 (22) 15.02.2005 (24) 15.09.2006 (46) 15.09.2006, Бюл. № 9, 2006 р. (72) Ковальова Ілона Михайлівна (73) Ковальова Ілона Михайлівна (56) Бабанин А.А., Ромаскевич Ю.А. Способ гистологической обработки тканей для получения парафиновых блоков.// Функциональные и прикладные вопросы морфологии. Тр.Крымск. ордена Труд. Красн. Знам. мед. ин-та, т.120 - Симферополь, 1988.- С.192-193. Муниров М.С. Сравнительно-анатомическая характеристика толстой кишки, ее замыкательного ап 3 76903 4 неможливість проводки щільних тканин (сполучна лення препаратів за рахунок зменшення ущільта кісткова), кусочків тканини, більших 1-2мм, оскінення тканин під час зневоднення і проводки. льки гліцерин не змішується з ксилолом і не відбуПоставлена мета досягається тим, що при вається його заміщення у проміжних середовищах. здійсненні способу досліджуваний матеріал збезБільш досконалим є метод з використанням воднюють у розведеннях гліцерину поступово у бутанолу в якості проміжного середовища [8]. Від25%, 50%,75%, 90% та двох порціях 100% гліцеповідно до запропонованого методу матеріал пісрину по 2 години в кожній порції при температурі ля фіксації промивають, підсушують на фільтру37°С; проводять послідовно через суміш бутанолвальному папері, переносять в 80% гліцерин, гліцерин (37°С), дві порції чистого бутанолу (37°С), потім послідовно в три порції 100% гліцерину по парафін №1 (54°С) - 12 годин, парафін №2 (54°С) дві години в кожній порції. Весь процес проводять 12 годин. в термостаті при температурі 37°С. Для просоченНовизна методу, що пропонується для заливня об'єктів парафіном матеріал переносять у суки матеріалу для гістологічних досліджень, поляміш бутанол-гліцерин на 30 хвилин, бутанол - 1,5 гає в тому, що зневоднення матеріалу здійснюють години, суміш бутанол-бензол - 30 хвилин, бензол поступово у 25%, 50%,75%, 90% та двох порціях - до просвітлення об'єкта, насичений розчин па100% гліцерину по 2 години в кожній порції при рафіну в бензолі при 37°С 1-2 години, парафін в 2 температурі 37°С. Нами емпірично встановлено, порціях по 1-1,5 години в кожній (54°С). Недолікащо при цьому відбувається найбільш м'яке та повми цього способу є значне ущільнення тканин під не зневоднення матеріалу, відсутнє ущільнення час проводки через бензол, недостатня повнота тканин. Зменшення початкової концентрації гліцезневоднення кусочків матеріалу (особливо сполурину або збільшення кількості розведень недоцічної та кісткової тканин). льне і призводить до марної витрати часу. ЗбільВідомі способи для заливки щільних об'єктів з шення концентрації гліцерину у початкових використанням суміші етилового та бутилового порціях призводить до неповного зневоднення спирту [1, 3, 5]. Відповідно до однієї методики [3, тканин (особливо сполучної та кісткової), оскільки С.142], матеріал (комаху) фіксують в суміші Жильконцентрований гліцерин повністю заміщає воду у сона, переносять на 30-60 хвилин в 35°С етиловий поверхневих шарах кусочка (1-2мм) і не проходить спирт, потім послідовно проводять через суміші у внутрішні шари. В зв'язку з тим, що щільність етилового та бутилового спирту: а) 90см3 45°С гліцерину вища, ніж у води, критерієм просочення, етилового спирту +10см3 бутилового спирту - 1-2 а отже, і послідовного зневоднення об'єктів є їх години; б) 80см3 62°С етилового спирту +20см3 занурення на дно посуди. Цей час коливається в бутилового спирту - 2 години; в) 65см3 77°С етиломежах 1,5-2 годин при температурі 37°С і залежить 3 вого спирту +35см бутилового спирту - 4 години; г) від величини об'єкта та щільності тканини. Темпе45см3 90°С етилового спирту +55см3 бутилового ратура 37°С є оптимальною для проводки матеріспирту - 6-24 години; д) 25см3 90°С етилового алу. Використання бутанолу в якості проміжного спирту +75см3 бутилового спирту - 6-12 годин; е) середовища дозволяє уникнути надмірного ущільчистий бутиловий спирт (двічі змінити) - 6 годин; ж) нення тканин, яке відбувається при використанні суміш бутиловий спирт-парафін (1:2) - 12-24 годиксилолу та інших розчинників парафіну (толуол, ни; з) парафін або суміш парафіну і воску. бензол, хлороформ, петролейний ефір тощо). Відповідно до іншої методики [1, С.567], заПереваги запропонованого способу в забезпепропонованої для проводки дентину, матеріал ченні якісної проводки великих, крихких та щільних після фіксації та декальцинації промивають протяоб'єктів, об'єктів після фіксації сполуками хрому, гом 24 годин в проточній воді, збезводнюють посуникнення надмірного ущільнення та деформації лідовно в 30, 50 та 70%-му етиловому спирті (по тканинних структур, яка дає можливість виготов24 години в кожній порції), потім в суміші 96%-го лення зрізів товщиною 4-6мкм і застосовувати спирту і н-бутанола (24 години) і в двох змінах нбудь-які розповсюджені методи забарвлення. бутанолу (по 24 години в кожній). Просочують проВідомості, що підтверджують можливість здійтягом 12-24 годин твердим парафіном і заливають снення винаходу матеріал. Спосіб здійснюють наступним чином. Відомий спосіб для скорочення обробки матеДобре промитий від залишків фіксатора матеріалу з використанням бутанолу або ізобутанолу ріал (кусочки твердої оболони головного мозку [5, С.82]. Відповідно до методики препарати після людини розміром 1 1 0,3см після фіксації в суміші промивки з 50°С етилового спирту або більш міцхромової кислоти з залізними квасами) збезводного (але не з води) переносять в бутиловий спирт нюють у 25%, 50%,75%, 90% та двох порціях 100% або проміжні суміші обох спиртів (в кожній 1-2 гогліцерину по 2 години в кожній порції при темперадини). Після 24 годин перебування в абсолютному турі 37°С; проводять послідовно через суміш бубутиловому спирті переносять спочатку в бутилотанол-гліцерин (37°С) - 12 годин, дві порції чистого вий спирт, насичений парафіном на холоду, потім бутанолу (37°С) - 12 годин, парафін №1 (54°С) - 12 в насичений в теплі і в чистий парафін, в якому годин, парафін №2 (54°С) - 12 годин і заливають у залишають на 24 години. парафін. В 76 випробуваннях ми отримали попеОднак при наведених вище способах не виречні зрізи судинно-нервових комплексів твердої ключений вплив етилового спирту на тканини, оболони головного мозку людини товщиною 5мкм, просочення в проміжних середовищах з бутанолу, які забарвлювали за методиками Масона та насиченого парафіном, недоцільне і вимагає зайKrutsay. вої витрати часу. Запропонована методика забезпечує отриМетою винаходу є підвищення якості виготовмання якісних гістологічних препаратів для прове 5 76903 6 дення складних гістологічних, гістохімічних і кількісква.: Изд-во Иностранной литературы, 1953. сних цитологічних досліджень в науково718с. дослідницькій роботі і в патогістологічній практиці. 6. Грабовий О.Μ., Проша М.В. ІзопропанолДжерела інформації, прийняті до уваги під час целоідин-парафіновий метод заливки матеріалу експертизи: для гістологічних досліджень. // Укр. журнал меди1. Лилли Р. Патогистологическая техника и чної техніки і технології. - 1994. - №1,2. - С.44-47. практическая гистохимия. - Μ.: Мир, 1969.-645с. 7. Розенберг В. Д. Модификация процесса 2. Меркулов Г.А. Курс патологогистологичесобезвоживания материала при парафиновой закой техники. - Л.: «Медицина», 1969. - 423с. ливке в патогистологической практике. // Архив 3. Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопичеспатологии. - 1991. - №. - С.70-71. кая техника. - Москва.: «Советская наука», 1957. 8. Бабанин А.А., Ромаскевич Ю.А. Способ гис468с. тологической обработки тканей для получения 4. Микроскопическая техника: Руководство / парафиновых блоков. // Фундаментальные и прикПод ред. Д.С.Саркисова и Ю.Л.Перова. -М.: Медиладные вопросы морфологии. Тр. Крымск. ордена цина, 1996. - 544с. Труд. Краен. Знам. мед. ин-та, т.120 - Симферо5. Ромейс Б. Микроскопическая техника. - Мополь, 1988. - С.192-193. Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601