Спосіб заключення в парафін гістологічних об’єктів з фіксованою товщиною

Відомий класичний спосіб заключения в парафін гістологічних об'єктів, який передбачає наступні операції: промивання, проведення через батарею спиртів, ксилол, ксилол+парафін і парафін [1]. Тривалість перелічених операцій складає 4-12 діб. Недоліком даного способу є багато стадійність операцій і їх тр удоємність. Відомий також спосіб заключення в парафін гістологічних об'єктів, який більш простий і менш трудоємний [2]. Він передбачає наступні операції з гістооб'єктом товщиною 5мм: промивання, проведення через батарею ацетону різної концентрації та занурення в парафін. Недоліком цього способу є те, що він тривалий по виконанню і нерівномірно зневоднює та занурює гістооб'єкт в парафін. Мета винаходу - збереження якості гістологічного об'єкту та зниження тривалості технологічних операцій і трудови х затрат. Зазначена мета досягається тим, що товщина гістологічного об'єкту зменшується до 0,5-1,5мм, а його зневоднення відбувається у 100% ацетоні. Причому перше і друге зневоднення проводиться на протязі 20 і 10хв. відповідно, а перше і друге заключення в парафін проводиться по 30хв. кожне. Порівняно з прототипом спосіб, що заявляється, відрізняється тим, що товщина гістологічного об'єкту зменшена в 4-10 разів до 0,5-1,5мм, зневоднення гістологічного об'єкту відбувається у безводному ацетоні, перше і друге зневоднення проводиться на протязі 20 і10хв. відповідно, а перше і друге занурення в парафін проводиться по 30хв. кожне. Для реалізації заявляємого способу проведена порівняльна характеристика різних режимів занурення гістопрепарату в парафін (таблиця 1) Таблиця 1 Результати заключения в парафін гістологічних об’єктів з фіксованою товщиною Технологічна операція Промивання Перше зневоднювання ацетоном: Друге зневоднювання ацетоном: Перше занурення в парафін: Друге занурення в парафін: Тривалість режиму, Характеристика пошкоджень гістооб'єкту досліджуємих режимах хв. 1 2 3 1 2 3 Товщина гістологічного об’єкту менше 0,5мм 60 60 60 Структури тканин Структури тканин Структури тканин 20 30 40 зморщуються зморщуються зморщуються 10 20 30 Структури тканин зморщуються Структури тканин зморщуються Структури тканин зморщуються 20 30 40 Структури тканин зморщуються Структури тканин зморщуються Структури тканин зморщуються 20 30 Структури тканин зморщуються Промивання Перше зневоднювання ацетоном: Друге зневоднювання ацетоном: Перше занурення в парафін: Друге занурення в парафін: 60 60 20 30 Структури тканин Структури тканин зморщуються зморщуються Товщина гістологічного об’єкту 0,5-1,5мм 60 Менша ступінь Пошкоджень не 40 зневоднення спостерігається 10 20 20 30 Промивання Перше зневоднювання ацетоном: Друге зневоднювання ацетоном: Перше занурення в парафін: Друге занурення в парафін: 60 40 Пошкоджень не спостерігається Структури тканин зморщуються Структури тканин зморщуються 20 Парафін Пошкоджень не незадовільно спостерігається заміщує ацетон Парафін Пошкоджень не 30 40 незадовільно спостерігається заміщує ацетон Товщина гістологічного об’єкту -2 і більше мм 60 60 Менша ступінь Менша ступінь 30 40 зневоднення зневоднення 10 20 30 20 30 40 20 30 40 20 30 Зневоднення незадовільне Структури тканин зморщуються 40 Структури тканин зморщуються Менша ступінь зневоднення Зневоднення незадовільне Зневоднення незадовільне Зневоднення не задовільне Парафін незадовільно заміщує ацетон Парафін незадовільно заміщує ацетон Зневоднення незадовільне Зневоднення не задовільне Парафін незадовільно Парафін заміщує ацетон незадовільно заміщує ацетон Як свідчать дані таблиці 1, найбільш доцільно обробляти гістооб'єкти товщиною 0,5-1,5мм згідно режиму №2. В разі зменшення експозиції витримки об'єкта в ацетоні (режим № 1) він менше зневоднюється і стає не придатний для занурення в парафін. В разі збільшення експозиції витримки об'єкту в ацетоні (режим №3), його структури зморщувалися і спостерігався псевдонекротичний ефект в структурах тканин, який призводить до помилок в діагностуванні. В разі зменшення експозиції витримки об'єкта в парафіні (режим №1), він стає крихким і не придатним для виготовлення зрізів. В разі збільшення експозиції витримки об'єкту в парафіні (режим №3), також спостерігається термічне пошкодження тканинних стр уктур. Обробляти гістооб'єкти товщиною більше 2-хмм вищеописаним способом також недоцільно. За короткий час проведення через ацетон в ньому не відбувається достатнє зневоднення та послідуюче заміщення парафіном. Тривалість обробки такого препарату 4-12 діб. Обробляти гістооб'єкти товщиною менше 0,5мм також недоцільно, так як проведення через ацетон і занурення в парафін спричиняє швидке з морщення тканин і спостерігається явище псевдонекроза. Порівняно з прототипом пропонуємий спосіб має наступні переваги: - зменшуються витрати ацетону у 14 разів; - зменшується тривалість операції у 8 разів; - спрощується процес гістологічної обробки. Економічний ефект від застосування пропонуємого способа полягає у наступному: На виготовлення 100 зразків по новому способу витрачається 150мл ацетону, а по прототипу - 1500мл. В грошовому еквіваленті це складає 1,5грн. проти 10,5грн. Джерела інформації: 1. Ромейс Б. Микроскопическая техника. - М.: Изд. Иностранной литературы. -1954. -с.57-61. 2. Меркулов Г.А. Микроскопическая техника. -М.: Медгиз. -1947. -256с.