Сіль м1м2 альдонової та амінокарбонової кислот, що виявляє протипухлинну дію, та спосіб її одержання

1. Сіль М1М2 альдонової та амінокарбонової кислот, що виявляє протипухлинну дію, формули: 2 2. Спосіб одержання солі М1М2 альдонової та амінокарбонової кислот, що виявляє протипухлинну дію, який відрізняється тим, що 50,0мл 0,25М/л розчину солі М(3) амінокарбонової кислоти і 50,0 мл 0,23М/л розчину альдонату M(2) змішують при легкому нагріванні, рН суміші доводять до 9,2, додають 50,0мл 0,23М/л розчину хлориду М(1), комплексну сполуку при інтенсивному перемішуванні висолюють з водного розчину додаванням етилового спирту, утворену маслоподібну субстанцію затирають в абсолютному етиловому спирті до повної кристалізації, відфільтровують та висушують протягом 4 годин при температурі 100°С. O С O С CH С СH2 2 O M2 O O O N M1 CH2 O CH2 O С CH2 77371 n O M2 O O , (I) де М1, М2 - лужноземельні метали. Винахід відноситься до медицини, а саме до онкофармакології, також додатково відноситься до хімії нових комплексних сполук, зокрема до різнолігандних біметалічних комплексів лужноземельних металів з альдоновою та амінокарбоновою кислотами та до способів їх синтезу, який проявляє протипухлинну активність, далі "альдонат" загальної формули: де Μ1М2 - лужноземельні метали. Серед відомих протипухлинних засобів, найбільш близьким до рішення, що заявляється, є ["Лекарственный препарат оксалиплатина в виде стабильною водного раствора, способ его получения и применение», патент RU №2207857]. Однак цьому засобу притаманні наступні недоліки: - висока токсичність; - наявність чужорідного металу (платини) у складі препарату; - нездатність розчинятися в спирто-жирових розчинниках, що заважає безперешкодному проникненню препарату через ліпідні мембрани та гемато-енцефалічний бар'єр. (11) С С UA H CH2 O OH С N (13) n (19) С H CH2OH C2 OH CH2OH 3 77371 4 Задачею цього винаходу було поставлено талічних комплексів лужноземельних металів з створення засобу для протипухлинного впливу на альдоновою та амінокарбоновою кислотами (оргазлоякісні клітини, який би усував вищевказані ненічними сполуками). Вона є комплексонатом (лігадоліки засобу-прототипу та забезпечував би висондом), сілллю Μ1Μ2 альдонової та амінокарбоноку ефективність профілактики та лікування онколової кислот. Альдонат виявився малотоксичним на гічних хвороб на всіх стадіях ракової прогресії. живі клітини. Нами була визначена його молекуляПоставлена задача вирішується використанрна формула. Встановлено, що це зовсім нова ням розробленою винахідниками органічної сполусполука. Створено таке співвідношення компоненки формули (1) як протипухлинного засобу поряд тів - іонів лужноземельних металів, альдонової та із розробкою технології його одержання з подальамінокарбонової кислоти, яке забезпечує протипушим експериментальним дослідженням антипрохлинний (антипроліферативний) ефект на злоякісліферативної активності в умовах культури пухні клітини в експерименті на культурі клітин недрілинних тканин. бноклітинного раку легень шляхом блокування Передумовою для його створення стала конпроцесу їх проліферації, на відміну від засобуцепція авторів про металобілковозалежну регуляпрототипу. цію детермінації диференціювання клітин [Суслов Сполука альдонат за фізичними властивостяЕ.И., Подгаевская Т.П. Новая концепция канцероми є білою дрібнокристалічною речовиною у вигенеза и перспективы лечения рака // Укр. биохим. гляді порошку соленого смаку, без запаху, добре журн.- 2000.- N 4 ,С.566.], згідно з якою ракова розчиняється у воді та спіртожирових розчинниках, прогресія під впливом канцерогенів пов'язана із що сприяє процесу його проникнення через ліпопдестабілізацією молекулярних зв'язків в ДНК та ротеїдні клітинні мембрани, при довгостроковому між ДНК та кальцій-зв'язуючими внутришньоядерзбереженні не змінює колір. Складові частини ними протеїнами, експресією онкогенів, втратою альдонату є ключовими метаболітами окислювакальцію в ДНП. Також відомо, що для ефективної льно-відновлювальних внутрішньоклітинних феррегуляції активності кальцію кальмодуліном потріментативних реакцій. Так, компонент альдози бно, щоб хоча б один його домен був заповнений альдонова кислота приймає участь у циклі Кребсу, іншим лужноземельним металом. А для підтримки є метаболітом багатьох біохімічних реакцій у ядрі молекулярної архітектоніки та стабільності біохіміта в цитоплазми клітин; М(n) входять до структури чних мембран особливо важливою є здібність M(n) білків ДНП, зв'язують нуклеотиди ДНК [Крю Ж. наближувати молекули за рахунок сил електросБиохимия. Медицинские и биологические аспекты. татичного притягання. -Москва, Медицина, 1979. - С.208-210]. Здорові Відомо, що біохімія сахарів ракових пухлин теклітини не потребують молекулярної корекції. Раче в умовах гліколізу. Деякі M(n) с регуляторами кові клітини мають дефіцит М(n), обумовлений дисгліколізу та каталізаторами більшості ферментабалансом геному, спрямованого на синтез атипотивних реакцій біохімічних циклів [Чекман И.С., вих злоякісних клітин з повною втратою їхнього Горчакова Н.А., Николай С.Л. Магний в медицине. типоспецифічного диференціювання і розладами - Кишинѐв, Штенда, 1992. - 101с]. мітотичного циклу. Розроблений протипухлинний Для одержання засобу за формулою 1, яка в засіб - альдонат є донатором Μ1М2 в ДНП пухлинсилу сукупності властивостей його окремих скланих клітин шляхом їхніх носіїв - комплексонів, а дових може бути засобом для лікування злоякіссаме залишків альдоновової та амінокарбонової них пухлин, здійснюють синтез комплексної спокислот, які сприяють внутрішньоядерної інкорполуки. рації деяких M(n), безпосередньо впливаючи на Приклад синтезу комплексної сполуки Солі процес гальмування клітинного циклу пухлинних Μ1Μ2 альдонової та амінокарбонової кислоти. клітин та їхньої проліферації з перепрофілюванВ стакан об'ємом 500мл вносили 50мл ням проліферації на апоптоз. Засіб альдонат тим 0,25моль/л розчину солі M(3) амінокарбонової киспозитивно відрізняється від прототипу, що впливає лоти і 50мл 0,23моль/л розчину альдонату М(2) при на структуру ДНП, як із зовнішньої сфери (через легкому нагріванні. Далі інгредієнти змішували. РН M(n) - зв'язуючі ядерні білки), так і з внутрішньої суміші доводили до 9,2. Додавали 50мл (через інкорпорацію Μ1Μ2 в молекулярну структуру 0,23моль/л розчину хлориду M(1). Комплексну спонуклеотидів). луку висолювали з водного розчину додаванням На 100 нелінейних мишах досліджені парамеетилового спирту при інтенсивному її пермішувантри гострої токсичності альдонату. Засіб вводили ні. Утворену маслоподібну субстанцію затирали в внутришньочеревинно в дозі від 1000,0мг/кг до абсолютному етиловому спирті до повної криста10000,0мг/кг маси тварин. Встановлено, що серелізації, відфільтровували і висушували протягом 4 дньосмертельна доза альдонату (LD-50) доривнюгодин при температурі 100°С. Після висушування вала 8000мг/кг. сполука, що виділена має наступній кількісний Вивчення протипухлинної активності альдонасклад (% мас): ту проводили на культурі пухлинних клітин А-549, C:H:N: М(2):Μ(1)=32:4:3:10:3 отриманих з недрібноклітинного раку легені людиІндивідуальність нової речовини підтверджена ни. Для порівнення використовували 10% розчин спектроскопічно методами рентгенівського фазовідомого протипухлинного засобу [за патентом вого аналізу та інфрачервоної спектроскопії. №2207857] - оксаліплатину. Одночасно в одну Склад речовини доведено методом елементного частину культури пухлинних клітин вносили засіб аналізу на основні компоненти. альдонат в другу - оксаліплатин в розведенні від Розроблена сполука (альдонат) формули (1) є 10-1 до 10-4. Результат реєстрували через 24, 48 і представником нового класу різнолігандних біме72 години. 5 77371 6 Приклад 1 би з перервою на одну добу після кожного введенВідомий протипухлинний засіб оксаліплатин ня засобу. Спостерігалося зменшення первинної вводили в культуру пухлинних клітин недрібнокліпухлини в середньому на 64% в порівнянні з конттинного раку в розведенні від 10-1 до 10-4, і на ролем - нелікованими мишами. Кількість метаста24,48 та 72 годину ураховували результат дослізів зменшувалася в середньому на 86%. дження. Максимальне блокування проліферації Приклад 4 ракових клітин спостерігалось на 48 годину і досяПри лікуванні тварин альдонатом в дозі гало 20% від загалу клітин культури. 450мг/кг. який вводили 10 разів на протязі 21 доби Приклад 2 з перервою після кожного введення на одну добу Запропонований протипухлинний засіб альдоСпостерігалося зменшення первинної пухлини і нат вводили у культуру пухлинних клітин недрібкількості метастазів в середньому на 99%,тобто ноклітинного раку легені в розведенні від 10-1 до пухлинний ріст практично зупинявся повністю. 10-4. Результат реєструвати через 24,48 і 72 годиПри аналітичному порівнянні антипроліферани. Максимальне блокування проліферації ракотивних (протипухлинних) можливостей запропонових клітин альдонатом спостерігалось на 48 годиваного та відомому засобів встановлено: у альдону і досягало 90% (Рис. 1) ната антипроліферативна дія відносно ракових Виражений протипухлинний ефект альдонату клітин у 4,5 разів ефективніша При цьому при розбув підтверджений також шляхом визначенням Zведеннях цей ефект зберігається значно довше, потенціалу культури пухлинних клітин методом ніж у прототипу, що є великою перевагою, тому що електрофорезу в поліакртламідному гелі. Метод для досягнення подібного ефекту лікування потріздійснювали при застосуванні дози 200мг/кг. Під бна менша доза засобу, а це в свою чергу знижує впливом засобу в пухлинних клітинах А-549 визнатоксичне навантаження. Альдонат у порівнянні з чено зменшення від'ємного та збільшення позитипрототипом (LD50 не перевищує 8000мг/кг) у 200 вного потенціалу відносно контролю. разів менш токсичний (LD50 прототипу 40мг/кг). Таким чином, нами встановлено, що особливіАльдонат гальмує ріст клітин в культурі пухлинних стю альдонату є виражена здатність гальмувати клітин лінії А-549, отриманих з недрібноклітинного проліферацію пухлинних клітин та цілеспрямовано раку легені людини на 90% при критерії значності активувати апоптоз малігнезованих клітин (через >25%. спроможність внутрішньоядерної інкорпорації іонів Таким чином, запропонований протипухлинний Μ1М2 в пухлинні клітини). засіб альдонат, який має хімічно встановлену моПротипухлинна та антиметастатична дія розлекулярну формулу, - у чотири з половиною рази робленого засобу була перевірена в експерименті ефективніше блокує проліферацію клітин недрібна 100 мишах лінії C57BL з моделями карциноми ноклітинного раку легені людини, ніж відомий проЛ'юіс і меланоми В-16, які метастазують в легені. типухлинний препарат оксаліплатіни. При цьому 20 тварин були контрольними (не лікованими). 80 токсичність альдонату у 200 разів менша в порівмишей були проліковані розробленим засобом нянні з відомим препаратом. Це свідчить про веальдонатом в дозах 200мг/кг і 450мг/кг маси твалику перспективу розробленого протипухлинного рини, який вводився внутришньочеревно. засобу для лікування недрібноклітинного раку леПриклад 3 гень людини, для терапії якого в теперішній час При лікуванні мишей альдонатом в дозі немає надійних хіміотерапевтичних препаратів. 200мг/кг, який вводився 10 разів на протязі 21 до Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601