3-нітро-n-(3′-нітрофеніл)антранілова кислота, що проявляє протизапальну, анальгетичну, діуретичну та протигрибкову активність

3-нітро-N-(3'-нітрофеніл)антранілова кислота загальної формули: Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема, до синтезу 3-нітро-N-(3'нітрофеніл)антранілової кислоти, яка проявляє протизапальну, анальгетичну, діуретичну та протигрибкову активність. Пошук нових засобів з широким спектром фармакологічної дії є актуальною проблемою сучасної медицини. Відомий цілий ряд лікарських засобів синтетичного походження, кожен з яких має свою домінуючу дію: фурацилін (протигрибкова дія), натрію диклофенак (протизапальна дія), анальгін (анальгетична дія), гіпотиазид (діуретична дія) (Машковский М. Д. Лекарственные средства. М.: ООО "Издательство Новая Волна", 2007. С.170, 159, 499, 852). До недоліків зазначених засобів можна віднести, зокрема, наявність у тій чи іншій мірі негативної побічної дії. У комплексному лікуванні виникає необхідність призначення хворому одночасно декількох лікарських засобів з моноспрямованою фармацевтичною дією, внаслідок чого загальна побічна дія підсилюється. За прототип обрана 3,5-динітро-N-(3'хлорфеніл)антранілова кислота, що виявляє протизапальну, анальгетичну та діуретичну активність (Деклараційний патент на винахід №65875 А, Україна, МПК: С07D229/58, А61К31/195. Заявлено 17.06.2003. Опубліковано 15.04.2004. Бюл. №4). Сполука за прототипом має широкий спектр дії, проте ступінь фармакологічної активності може бути реально підвищений та розширений. В основу винаходу поставлене завдання по створенню нової хімічної сполуки, що проявляє підвищену протизапальну, анальгетичну, діуретичну та протигрибкову активність. Поставлене завдання вирішується шляхом синтезу нової індивідуальної хімічної сполуки 3нітро-N-(3'-нітрофеніл)антранілової кислоти формули: COOH N NO2 H NO2 N NO2 H 91422 (11) UA (19) COOH (13) C2 , що проявляє протизапальну, анальгетичну, діуретичну та протигрибкову активність. NO2 яка проявляє протизапальну, анальгетичну, діуретичну та протигрибкову активність. Речовина, яка заявляється, утворена взаємодією 3-нітро-2-хлорбензойної кислоти та 3нітроаніліну у присутності калію карбонату та міді 3 91422 оксиду при нагріванні реакційної суміші до 180220°С без розчинника. 3-нітро-N-(3'-нітрофеніл)антранілова кислота порошок жовтого кольору, погано розчинний у воді, гексані, добре розчинний в етанолі, діоксані, ДМСО, ДМФА. Будова сполуки підтверджена за допомогою елементного аналізу та ІЧ- спектроскопії, а індивідуальність - методом тонкошарової хроматографії. Винахід ілюструється наступним прикладами: Приклад 1. 2,01г (0,01моль) 3-нітро-2-хлорбензойної кислоти, 1,38г (0,01моль) 3-нітроаніліну, 1,38г (0,01моль) безводного калію карбонату, 0,01г (0,0005моль) міді оксиду нагрівають при температурі 180-200°С протягом 2 годин. Після охолодження до реакційної маси додають 15мл 50% водного етанолу із активованим вугіллям, кип'ятять 15 хвилин та швидко фільтрують крізь складчастий фільтр. Фільтрат підкислюють кислотою хлористоводневою до рН~3. Осад, який випав, відфільтровують, промивають водою та сушать. Вихід 2,73г (90%), Т топл. 194-195°С, М.м. 303,227 Бруто-формула C13H9N3O6 Розраховано: С,% 51,49; N,% 13,86. 4 Знайдено: С,% 51,55; N,% 13,96. ІЧ-спектр у КВr, см-1: 3308, 1676, 1595, 1538, 1348, 1262. Rf: 0,32 (ацетон-гексан 1:1,5); Rf: 0,43 (етанолхлороформ-гексан (1:1:4). Приклад 2. Вивчення протизапальної активності проводилося на моделі карагенінового набряку (Яковлева Л. В., Зупанец И. А. Использование модели каррагенинового отека у мышей при поиске противовоспалительных средств. // Деп. в УкрНИИНТИ 07.07.87. - №1908. - Ук. 87). В якості критеріїв фармакологічної активності вибрано ізоефективна доза (DE50), при якій фармакологічний ефект набуває 50% випадків у експериментальній групі тварин; рівень гострої токсичності (DL50); терапевтичний індекс ТІ (показник відношення DL50/DE50); відносний терапевтичний індекс. Результати вивчення протизапальної активності та токсичності 3-нітро-N-(3'нітрофеніл)антранілову кислоту (сполука №1) у порівнянні з 3,5-динітро-2-N-(3'хлорфеніл)антраніловою кислотою (прототип) та натрію диклофенаком наведені в таблиці 1. Таблиця 1 Протизапальна активність та токсичність сполуки №1 у порівнянні з прототипом та натрію диклофенаком Сполука Сполука №1 Прототип Натрію диклофенак DE50, мг/кг 6,5 10,4 8,0 Терапевтичний індекс >769,23 >259,6 45,0 DL50, мг/кг >5000 >2700 360 Як видно за даними таблиці 1, сполука №1 має виражену протизапальну активність, за широтою терапевтичного ефекту перевищує натрію диклофенак у 17,09 рази та прототип у 3 рази. Приклад 3. Вивчення анальгетичної активності 3-нітро-N(3'-нітрофеніл)антранілової кислоти (сполука №1) проводилося за методом "оцтових корчей" у білих лабораторних щурів масою 150-180г (Доклінічні дослідження лікарських засобів (методичні рекомендації)/ За редакцією член.-кор. АМН України О. В. Стефанова. - К.: Авіцена, 2001. - С.307-320). Корчі були викликані внутрішньочеревним введен Відносний Т.І. по натрію диклофенаку 17,09 5,7 1 ням розчину 0,75% оцтової кислоти у дозі 1мл на 100г маси тіла тварини. Підрахунок кількості корчей проводили через 15 хвилин після введення розчину оцтової кислоти протягом 30 хвилин. В якості критеріїв фармакологічної активності вибрано ізоефективна доза (DE50), при якій анальгетичний ефект набуває 50% випадків у експериментальній групі тварин; рівень гострої токсичності (DL50); терапевтичний індекс (ТІ); відносний терапевтичний індекс. Результати вивчення анальгетичної активності та токсичності сполуки №1 у порівнянні з прототипом та анальгіном наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Анальгетична активність та токсичність заявленої сполуки (№1) у порівнянні з прототипом та анальгіном Сполука Сполука №1 Прототип Анальгін DE50, мг/кг DL50, мг/кг 6,7 14,1 55 >5000 >2700 1197 Терапевтичний індекс (ТІ) >746,27 191,49 21,76 Відносний ТІ по анальгіну 34,3 8,78 1 5 91422 Як видно за даними таблиці 2, сполука №1 за широтою терапевтичної дії перевищує анальгін в 34,3 рази та прототип у 3,91 рази. Приклад №4. Вивчення діуретичної активності проводили за методою Е. Б. Берхіна (Методы изучения действия новых химических соединений на функцию почек / Хим.-фармац. журн. - 1977. - Т.11, №5. - С.3-11) на білих щурах лінії Вістар масою 120-160г. Кожна серія складалася з 7 тварин. Кожну з досліджених сполук (заявлена сполука, сполука за прототипом, 6 препарат порівняння гіпотіазид) вводили у дозі 50мг/кг у водному розчині з розрахунку 3мл води на 100г ваги тварини. Тварини контрольної групи одержували лише воду. Сечу збирали кожну годину протягом 4 годин. В якості критерію фармакологічної активності вибрано об'єм сечі досліджених тварин, розрахований у відсотках у порівнянні з контролем. Результати вивчення діуретичної дії сполуки №1, прототипу та гіпотіазиду наведені у таблиці 3. Таблиця 3 Діуретична активність заявленої сполуки (№1) у порівнянні з прототипом та гіпотіазидом. Сполука Сполука №1 Прототип Гіпотіазид Діуретична активність, в% к контролю 425 не виявляє 212 Як видно за даними таблиці 3, сполука №1 за діуретичною дією перевищує гіпотіазид у 2 рази Прототип даних фармакологічних властивостей в умовах експерименту не виявив. Приклад 5. Визначення протигрибкової активності проводилось у дослідах in vitro за відомою методикою (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О.Бригера - 3-е изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - 462с). DL50, мг/кг >5000 >2700 320 Для вирощування грибів використовувалось середовище Сабуро (рН=6,5-6,7). Навантаження склало 500-600 репродуктивних тілець штамів Candida albicans в 1мл середовища. Протигрибкову дію оцінювали за мінімальною мікостатичною концентрацією (ММК), вираженою в мкг/мл. Результати вивчення протигрибкової активності та токсичності 3-нітро-N-(3'нітрофеніл)антранілової кислоти (сполука №1) у порівнянні з 3,5-динітро-2-N-(3'хлорфеніл)антраніловою кислотою (прототип), фурациліном наведені в таблиці 4. Таблиця 4 Протигрибкова активність та токсичність сполуки №1 прототипу та фурациліну Сполука Сполука №1 Прототип Фурацилін Штам Candida albicans, MMK (мкг/мл) 15,6 не виявляє 64,0 Як видно за результатами дослідження, наведеними у таблиці 4, сполука №1 інгібує ріст Candida albicans у концентрації у 4,1 рази меншій ніж фурацилін. Прототип не проявляє протигрибкову дію у відношенні Candida albicans. В результаті експерименту встановлено також, що заявлена сполука є менш токсичною, ніж наведені препарати порівняння та прототип. Таким чином, заявлена сполука 3-нітро-N-(3'нітрофеніл)антранілової кислота проявляє широкий спектр фармакологічної дії: протизапальну, Комп’ютерна верстка Т. Чепелева DL50 (внутрішньо очеревинне) мг/кг >5000 >2700 82,5 анальгетичну, діуретичну та протигрибкову. За окремими видами активності вона перевищує дію натрію диклофенаку, анальгіну, гіпотіазиду та фурациліну. Крім того, собівартість одержання заявленої сполуки нижча за собівартість сполуки за прототипом. Заявлена сполука може знайти застосування у медичній практиці при створенні лікарських засобів у різних лікарських формах для лікування інфекційних та запальних процесів різної етіології, а також середньої сили больових синдромів. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601