Спосіб визначення адгезивної активності мікроорганізмів

Спосіб визначення адгезивної активності мікроорганізмів шляхом підрахунку кількості адгезованих клітин досліджуваного мікроорганізму на одному еритроциті людини 0 (1) групи Rh+ (індекс адгезії мікроорганізму), який відрізняється тим, що суміш клітин досліджуваного мікроорганізму і еритроцитів людини 0 (1) групи Rh+ після витримки при 37 °С протягом 60 хвилин наносять на блок 1-1,5 % агарового гелю, приготовленого на стерильному 0,9 % водному розчині натрію хлориду площиною 1-1,5 см2 і розміщеного на предметному склі, покривають її накривним склом і для підрахунку кількості адгезованих на одному еритроциті клітин досліджуваного мікроорганізму (індекс адгезії мікроорганізму) здійснюють фазовоконтрастну мікроскопію суміші. (19) (21) a200905595 (22) 01.06.2009 (24) 27.12.2010 (46) 27.12.2010, Бюл.№ 24, 2010 р. (72) БІЛЬКО ІВАН ПЕТРОВИЧ, ХУВ'ЯДЖ ДЖОМА, LY (73) НАЦІОНАЛЬНА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ ІМ. П.Л.ШУПИКА (56) Смирнова Т.А., Поглазова М.Н., Николаенко М.Н. Адгезивные свойства Bacillus thuringiensis // Биотехнология. - 2000. - №3. - С. 16-26 Порт Е.В. Изучение адгезивных свойств штаммов синегнойной палочки // Вісн. Харк. нац. ун-ту. 2004. - № 639 US 5795563 A 18.08.1998 3 Задача досягається тим, що у відомому Способі визначення адгезивної активності мікроорганізмів шляхом приготування суміші клітин досліджуваного мікроорганізму в концентрації 109 клітин/мл і еритроцитів людини 0 (1) групи Rh+в концентрації 108/мл, витримки суміші у термостаті при 37 С протягом 60 хвилин з наступним приготуванням із суміші клітин мазка на предметному склі, фіксацією його фіксуючою рідиною, забарвленням барвниками та дослідженням отриманого препарату світлопольною мікроскопією з підрахунком кількості клітин досліджуваного мікроорганізму, адгезованих на 50 еритроцитах людини 0 (1) групи Rh+ та визначенням кількості клітин досліджуваного мікроорганізму, адгезованих на одному еритроциті (індексу адгезії мікроорганізму), готують суміш клітин досліджуваного мікроорганізму і еритроцитів людини 0 (1) групи Rh+, відмитих тричі у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду шляхом центрифугування при 1000 обертів на хвилину, витримують її у термостаті при 37 С протягом 60 хвилин, а потім наносять краплю суміші на блок 1-1,5% агарового гелю, приготовленого на стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду, товщиною 1,2-1,5мм і площиною 1-1,5см2, попередньо накладеного на предметне скло, покривають суміш на блоці агарового гелю накривним склом і підраховують кількість клітин досліджуваного мікроорганізму, адгезованих на 50 еритроцитах за допомогою фазовоконтрастної мікроскопії з наступним визначенням кількості клітин досліджуваного мікроорганізму, адгезованих на одному еритроциті (індексу адгезії мікроорганізму). У відповідності з винаходом спосіб здійснюють таким чином: із культури досліджуваного мікроорганізму, що виросла на щільному агаровому середовищі відповідного мікроорганізму складу, готують суспензію клітин у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду з концентрацією 109 клітин/мл розчину за оптичним стандартом помутніння. Із еритроцитарної маси еритроцитів людини 0 (1) групи Rh+ готують суспензію еритроцитів у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду і тричі відмивають її у цьому розчині шляхом центрифугування при 1000 обертів на 1 хвилину протягом 10-15 хвилин. Потім із відмитих еритроцитів готують суспензію у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду концентрацією 108 еритроцитів на 1мл розчину. У стерильну пробірку вносять по 1мл суспензії клітин досліджуваного мікроорганізму і відмитих еритроцитів людини. Отриману суміш клітин струшують протягом 5-10 хвилин і вміщують у термостат при 37 С на 60 хвилин. У стерильну чашку Петрі наливають 8-10мл розплавленого на водяній бані 1-1,5% агарового гелю, приготовленого на 0,9% водному розчині натрію хлориду, і дають йому застигнути при кімнатній температурі. Потім із застиглого агарового гелю стерильним пінцетом Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 92976 4 вирізають блок площиною 1-1,5см2, який стерильним пінцетом переносять на стерильне предметне скло у його центр. На блок агарового гелю наносять каплю суміші клітин досліджуваного мікроорганізму і еритроцитів людини, попередньо витриманої при 37 С, накривають суміш стерильним накривним склом і здійснюють її фазовоконтрастну мікроскопію. При цьому підраховують кількість клітин досліджєуваного мікроорганізму, адгезованих на 50 еритроцитах, а потім визначають кількість клітин досліджуваного мікроорганізму, адгезованих на одному еритроциті (індекс адгезії мікроорганізму). Приклад виконання запропонованого способу. Із культури Staphylococcus aureus, що виросла на мясопептонному агарі протягом 18-24 годин, готують суспензію клітин у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду з концентрацією 109 клітин/мл розчину за оптичним стандартом помутніння. Із еритроцитарної маси еритроцитів людини 0 (1) групи Rh+ готують суспензію еритроцитів у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду і тричі відмивають її у цьому розчині шляхом центрифугування при 1000 обертів на 1 хвилину протягом 10-15 хвилин. Потім із відмитих еритроцитів готують суспензію у стерильному 0,9% водному розчині натрію хлориду концентрацією 108 еритроцитів на 1мл розчину. У стерильну пробірку окремими стерильними піпетками вносять по 1мл суспензії клітин Staphylococcus aureus і відмитих еритроцитів людини. Отриману суміш клітин струшують протягом 5-10 хвилин і вміщують у термостат при 37 С на 60 хвилин. У стерильну чашку Петрі наливають 8-10 мл розплавленого на водяній бані 1-1,5% агарового гелю, приготовленого на 0,9% водному розчині натрію хлориду, і дають йому застигнуть при кімнатній температурі. Потім із застиглого агарового гелю стерильним пінцетом вирізають блок площиною 1-1,5см2, який стерильним пінцетом переносять на стерильне предметне скло у його центр. На блок агарового гелю наносять каплю суміші клітин Staphylococcus aureus і еритроцитів людини, попередньо витриманої при 37 С, накривають суміш стерильним накривним склом і здійснюють її фазовоконтрастну мікроскопію. При цьому підраховують кількість клітин Staphylococcus aureus, адгезованих на 50 еритроцитах, а потім визначають кількість клітин досліджуваного мікроорганізму, адгезованих на одному еритроциті шляхом поділу кількості клітин Staphylococcus aureus, адгезованих на 50 еритроцитах на 50. Отримане число і є індексом адгезії Staphylococcus aureus. Наприклад, на 50 еритроцитах було адгезовано 500 еритроцитів. 500:50=10. Індекс адгезії Staphylococcus aureus =10,0. Технічним результатом запропонованого способу є те, що він підвищує достовірність результатів дослідження. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5 92976 6