Спосіб визначення антилізоцимної активності мікроорганізмів

Спосіб визначення антилізоцимної активності мікроорганізмів шляхом додавання до 1,5 % живильного агарового середовища 30 % сироватки крові людини або відповідної дози яєчного лізоциму і розливання його у чашки Петрі, а після застигання середовища і його підсушування нанесення на його поверхню по краплі змиву добової агарової культури досліджуваних мікроорганізмів з наступним інкубуванням чашок Петрі протягом 24 годин при 37 °С, вбивання вирослих макроколоній досліджуваних культур мікроорганізмів парами хлороформу протягом 30 хвилин, наливання на макроколонії вбитих культур U 1 3 45426 Задача досягається тим, що у відомому Способі визначення антилізоцимної активності мікроорганізмів шляхом додавання до 1,5 % живильного агарового середовища 30 % сироватки крові людини або відповідну дозу яєчного лізоциму і розливання його у чашки Петрі, а після застигання середовища і його підсушування нанесення на його поверхню по краплі змиву добової агарової культури досліджуваних мікроорганізмів з наступним інкубуванням чашок Петрі протягом 24 годин при 37 °С , вбиванням вирослих макролоній досліджуваних культур мікроорганізмів парами хлороформу протягом 30 хвилин, наливанням на макроколонії вбитих культур мікроорганізмів шару живильного агарового середовища (3-4 мл) з 0,2 мл 1міліардної суспензії добової агарової культури Micrococcus lysodeikticus і визначенням результатів за наявністю чи відсутністю росту Micrococcus lysodeikticus навколо макроколоній штамів досліджуваних культур мікроорганізмів, згідно запропонованого рішення, на застигле і підсушене у чашці Петрі агарове живильне середовище, у його центр, накладають стандартний паперовий диск діаметром 6 мм, змочений у розчині лізоциму відповідної концентрації, а потім, відступивши від краю паперового диска на 2-3 мм, радіальними штрихами засівають культури досліджуваних мікроорганізмів на відстані не менше 1 см між штрихами, інкубують чашку Петрі при 37°С протягом 24 годин і враховують результати за наявністю чи відсутністю зони затримки росту досліджуваного мікроорганізму паперовим диском з лізоцимом. Спосіб пояснюється з допомогою ілюстрації ( див. фіг.) На фігурі зазначено: 1 - чашка Петрі з агаровим живильним середовищем; Комп’ютерна верстка І.Скворцова 4 2 - стандартний паперовий диск з лізоцимом; 3 - посів досліджуваного мікроорганізму радіальним штрихом 4 - посів контрольного мікроорганізму радіальним штрихом Спосіб здійснюють згідно з формулою і додаткових пояснень не потребує. Технічним результатом запропонованого способу є зпрощення технології визначення антилізоцимної активності мікроорганізмів та скорочення строків отримання результатів. У стерильну чашку Петрі наливають 15-18 мл стерильного і розтопленого на водяній бані 1,5 % агарового живильного середовища і дають йому застигнути і підсохнути при кімнатній температурі. На поверхню застиглого і підсушеного агарового живильного середовища, у його центр, накладають стандартний паперовий диск діаметром 6 мм попередньо зволожений у стерильному 0,9 % водяному розчині натрію хлориду з концентрацією лізоциму 10 млг лізоциму на 1 мл розчину. Після цього, відступивши на 2-3 мм від краю паперового диска, бактеріальною петлею радіальним штрихом засівають суспензію добової агарової культури Staphylococcus aureus з концентрацією 106 клітин на 1 мл за оптичним стандартом помутніння та суспензію добової агарової культури Micrococcus lysodeikticus з концентрацією 106 клітин на 1 мл за оптичним стандартом помутніння (контроль). Чашку Петрі інкубують у термостаті при 37 °С протягом 24 годин і враховують результати. При цьому ріст Staphylococcus aureus на відстані 2-3 мм від краю паперового диска свідчить про наявність у Staphylococcus aureus антилізоцимної активності, а наявність зони затримки росту Staphylococcus aureus більше 5-6 мм від краю паперового диска про відсутність антилізоцимної активності у Staphylococcus aureus. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601