Спосіб стимуляції суперовуляції у овець в анестральний період

Спосіб стимуляції суперовуляції у овець в анестральний період, що включає в себе обробку тварин протягом 12 діб речовиною гестагенної дії, яку вводять у складі вагінальних песаріїв у дієвій дозі, і фолікулостимулюючим гормоном, який ін’єктують шестиразово, починаючи з 11-ої доби після встромлення песаріїв з гестагеном з інтервалом 12 годин у загальній дозі 25 Арморовських Одиниць, який відрізняється тим, що за 5 діб до введення песаріїв з гестагеном встромляють у піхву поролонові губки, до яких додана речовина епінефрин у кількості 30 мг/тварину і які вилучають при встромленні песаріїв з гестагеном, а також роблять тваринам пресакральну новокаїнову блокаду 10 мл 1 %-ним розчином новокаїну на нульову, п'яту і десяту добу дії гестагенної речовини. UA (21) a201010316 (22) 25.08.2010 (24) 12.09.2011 (46) 12.09.2011, Бюл.№ 17, 2011 р. (72) ЛОБАЧОВА ІРИНА ВІКТОРІВНА (73) ІНСТИТУТ ТВАРИННИЦТВА СТЕПОВИХ РАЙОНІВ ІМ.М.Ф.ІВАНОВА "АСКАНІЯ-НОВА" НААНУ - НАЦІОНАЛЬНИЙ НАУКОВИЙ СЕЛЕКЦІЙНОГЕНЕТИЧНИЙ ЦЕНТР З ВІВЧАРСТВА (56) US 4980166, 25.12.1990. RU 2071352 C1, 10.01.1997. RU 2136310 C1, 10.09.1999. UA 46282 U, 10.12.2009. UA 73794 C2, 15.09.2005. UA 22361 A, 30.06.1998. UA 30621 A, 15.12.2000. Bondioli K.R. et al.:”Induction of estrus and superovulation in seasonally anestrous ewes”, Theriogenology, 1982, 18, Issue 2, P. 209-214. Топурко З.С. “Біотехнологічні методи стимуляції статевої охоти і багатоплідності овець з використанням біологічно активних речовин”. Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук. Львів-2008. ФСГ. Состав, форма выпуска, фармакологическое действие, дозы и способ применения. [Он –лайн]. Знайдено в інтернет [Знайдено 17.06.2011] C2 2 (19) 1 3 не враховується репродуктивний статус тварини, в результаті чого від 20 % до 40 % тварин не реагують на гормональну обробку, що збільшує вартість отриманих ембріонів і знижує ефективність методу. Доведено, що рівень суперовуляторної відповіді позитивно корелює з кількістю дрібних антральних фолікулів на яєчниках на початку обробки фолікулостимулюючими агентами [Brebion P., th Congnie Ч., Рroc. 5 Mtg. Ass. Eur. Trans. Emb. (AETE), 1989, 106 (abst); Veiga-Lopez A. et al., Theriogenology, 2005, 63, 1973-1983]. Способи збільшення кількості дрібних фолікулів на початку застосування ФСГ є шляхом збільшення ефективності гормональної стимуляції суперовуляції. Відомий спосіб збільшення рівня реагування на гормональну стимуляцію суперовуляції, за яким тварин під час обробки фолікулостимулюючими препаратами піддають додатковій обробці сумішшю вітамінів [Шеремета B.І., автореф. дис. д-ра сг. наук, Біла Церква, 1999]. Недоліком цього способу є недостатня ефективність і відсутність стабільності дії. Відомий спосіб збільшення ефективності стимуляції суперовуляції у овець, за яким тваринам щоденно протягом 10 діб перед застосуванням ФСГ ін'єктують антагоніста гонадотропін-релізінггормону (Гн-РГ, 0,5 мг/добу, "AntralixEuropeptides"), що сприяє зниженню рівня "базального" ЛГ в організмі і попереджає атрезію дрібних фолікулів [Brebion P. et al., Ana Zoot, 1992, 41, 333-337]. Відомий спосіб збільшення ефективності стимуляції суперовуляції у тварин WO1995/016459 "Controlled superovulation method for female cattle undergoing prolonged anoestrus, anoestruation metiiod and superovulation kit", за яким тварин піддають пролонгованій обробці агоністами Гн-РГ (Buserelin, Hoechst), що обумовлює десенсибілізацію гіпофізу до ендогенного Гн-РГ і індукування таким чином глибокого анеструсу, внаслідок чого на момент наступного застосування ФСГ дрібні фолікули є неатрезованими. Недоліком двох означених способу є необхідність тривалих (від 10 до 14 діб) щоденних ін'єкцій препаратів, що збільшує застосування ручної праці і стресове навантаження на тварин. Відомий спосіб збільшення ефективності стимуляції суперовуляції у ссавців WO1991/010449 "Drug for improving the reactions of the ovary and the production of ova and embryos in domestic mammals in connection with biotechnological embryo transfer", за яким передбачено введення препарату з антиінгібіном під час обробки ФСГ для усунення негативної дії домінантного фолікула на дрібні фолікули. Недоліком цього способу є труднощі отримання і завищена вартість чистого інгібіну та антитіл до нього. Відомий спосіб збільшення проліферативної активності яєчників US2005/0143788 "Treatment of female fertility conditions through modulation of me autonomic nervous system", за яким за рахунок зміни співвідношення активності ланцюгів вегетативної нервової системи (ВНС) досягається стимуляція формування додаткових фолікулів, і за яким 95869 4 корекцію статевої активності і запліднювальної здатності самиць ссавців проводять ініціюванням зміни співвідношення загальної або місцевої активності симпатикотропного або ваготропного ланцюгів ВНС шляхом електричної стимуляції нервових центрів ВНС або множинної ін'єкцій фармакологічних препаратів, які включають епінефрин, норепінефрин, опіоіди, альфа і бетаагоністи, преднізолон, ангіотензини, блокатори натрієвих та магнієвих каналів, кокаїн, амфітамін, ефедрин, допамін, допутамін та інші. Недоліком способу є орієнтованість його застосування на псових, а також відсутність реакції суперовуляції у тварин. Вагінальні песарії, які вводять у піхву для створення підвищеної концентрації гестагенів в організмі, можуть подразнювати стінки піхви і викликати таким чином перезбудження її механорецепторів. Відомий спосіб зменшення збудження еферентних та аферентних нервових волокон шляхом застосування пресакральної новокаїнової блокади за Ісаєвим С.Т. [Плахотин М. В., Спр. по вет. хирур., М.: Колос, 1977]. Відомий спосіб ініціювання статевої активності у овець шляхом витримки їх у умовах скороченого світлового дня [Yeates N.T.М., Nature, 1947,160,4065]. Необхідною умовою такого способу є створення 5-годинного перепаду між початковою і кінцевою тривалості освітлення. Недоліками такого способу є його тривалість, необхідність залучення великих приміщень, сезонна обмеженість застосування, а також є відсутність реакції суперовуляції у тварин. Прототипом винаходу є спосіб стимуляції суперовуляції у овець в анестральний сезон за Bondioli K.R. et al: "Induction of estrus and superovulation in seasonally anestrous ewes" (Theriogenology, 1982, 18, Issue 2, P. 209-214), за яким тварин піддають 12-денній дії внутрішньовагінальних песаріїв, які містять речовину гестагенної дії медроксипрогестерон, і наступній обробці фолікулостимулюючим гормоном, який ін'єктують шестиразово, починаючи з 11 доби від початку встромлення песаріїв з гестагеном з 12-годинним інтервалом у загальній дозі 24 мг в еквівалентах Арморовського стандарту. Використання цієї схеми дозволяє отримувати реакцію суперовуляції у овець у анестральний період. Недоліком цього способу є значний відсоток тварин, які не реагують на гормональну обробку в анестральний сезон, висока варіабельність реакції, низька якість отриманих ембріонів у частини вівцематок, що знижує ефективність і практичність методу трансплантації. Додаткові ін'єкції лютеїнізуючого гормону на початку індукованої статевої охоти не покращували статево результати застосування схемипрототипу. В основу винаходу поставлено задачу збільшити ефективність гормональної стимуляції суперовуляції у овець в анестральний період, що позначається збільшенням кількості позитивно реагуючих тварин, рівня суперовуляторної реакції і кількості вилучених ембріонів. Поставлена задача вирішується тим, що перед застосуванням гестагенних і гонадотропних гор 5 монів тварин піддають 5-денній дії епінефрину, який вводять у складі вагінальних поролонових губок, для імітації природного зростання статевої активності, яке має місце у овець напередодні настання естрального сезону, а також проведення триразової пресакральної новокаїнової блокади під час дії вагінальних песаріїв з гестагеном для зменшення негативної дії останніх на механорецептори піхви. Для вирішення задачі були проведені відповідні дослідження. У ході цих досліджень встановлено, що обробка вівцематок у анестральних період препаратом епінефрин, який вводили у піхву у складі поролонових губок (5-30 мг/тварину), обумовлює посилення інтенсивності фолікулогенезу в яєчниках, що позначається збільшенням кількості наявних антральних фолікулів на 10-30 % на 10 добу після вилучення губок. Стимулюючий ефект епінефрину був більшим при дозі останнього 20-30 мг і проявлявся лише в анестральний сезон, тоді як в естральний період його дія була різноякісною. Підвищення дози епінефрину вважали недоцільним з можливості місцевого некрозу тканин піхви високими дозами катехоламінів. Крім того, було встановлено, що проведення триразової пресакральної блокади 0,5-1 %-ним розчином новокаїну під час дії вагінальних песаріїв з гестагеном в анестральний і естральний сезони обумовлює збільшення на 31-54 % кількості овуляцій у тварин, які позитивно реагують на гормональну стимуляцію Група тварин дослідна контрольна n 4 5 95869 суперовуляції, проти показників схеми-прототипу, але зменшує частку позитивно реагуючих тварин. На основі результатів досліджень була розроблена схема гормональної стимуляції суперовуляції у овець в анестральнйй період, яка полягає у застосуванні препарату нейротропної дії епінефрину (30 мг/тварину) перед застосуванням вагінальних песаріїв з гестагеном, і триразової пресакральної блокади 1 %-ним розчином новокаїну під час дії вагінальних песаріїв з гестагеном. При визначенні ефективності пропонованої у весняні місяці вівцематок двох груп - дослідної (схема обробки за розробленою схемою) і контрольної (схема обробки за прототипом) - піддавали 12-ти денній дії піхвових пес аріїв, які містили речовину гестагенної дії моноацетат мепрегенолу (30 мг/тварину). Ін'єкції ФСГ починали за добу і закінчували через 36 годин після вилучення песаріїв з гестагеном і здійснювали з 12-годинним інтервалом протягом трьох діб у загальній дозі 25 Арморовських Одиниць. У тварин дослідної групи обробці гестагеном передувала 5-денна дія вагінальних поролонових губок (1,5 × 1,5 × 2,5 см), всередину яких додавали по 30 мг епінефрину ("Sigma", Е1635), а на 0-у, 5-у і 10-у добу від дня встромляння песаріїв з гестагеном тваринам проводили пресакральну блокаду 1 %-ним розчином новокаїну по обидва боки від анусу у загальній кількості 10 мл. Узагальнені результати досліджень наведені у таблиці. Кількість жовтих Реагували суперову- тіл на одну оброляцією, % блену тварину, шт./гол. 100 11,0±2,05 40 3,6±0,97 Таким чином, обробка тварин в анестральний сезон за пропонованим способом сприяє зростанню кількості позитивно реагуючих на гормональну стимуляцію суперовуляції тварин на 150 %, кілько Комп’ютерна верстка А. Рябко 6 Кількість вилучених зародкових клітин на одну оброблену тварину, шт./гол. всього якісних 5,5±1,45 1,2±0,65 1,25±1,09 0,2±0,22 сті сформованих жовтих тіл у 3,05, кількості вилучених ембріонів у 4,58 разів і покращенню їх якості. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601