Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L., який включає приготування середовища, висадження, укорінення отриманих шляхом мікроклонування рослин на живильних середовищах, перенесення укорінених in vitro рослин в умови ex vitro, який відрізняється тим, що готують середовище на основі Мурасіге-Скуга, доповнене вуглеводами - сахарозою, манітом, при наступному співвідношенні інгредієнтів, мг/л:

NH4NO3

407,5-417,5

KNO3

945-955

СаСl2´2Н2О

215-225

MgSO4´7H2O

180-190

КН2РО4

80-90

ΚΙ

0,410-0,420

Н3ВО3

3,10-3,20

MnSO4´4H2O

11,05-11,15

ZnSO4´7H2O

4,25-1,35

Na2MoO4´2H2O

0,120-0,130

CuSO4´5H2O

0,0120-0,0130

CoSO4´6H2O

0,0120-0,0130

Nа2ЕДТА´2Н2О

18,60-18,70

FeSO4´7H2O

13,85-13,95

кінетин

0,045-0,055

мезоінозит

95-105

сахароза

0-2000

маніт

0-3000

вода

до 1 л,

доводять рівень рH до 5,5, у банки об'ємом 250 мл у співвідношенні 1:4 поміщають суміш агару та агроперліту, розливають по 50 мл середовища, закривають вентиляційними кришками і автоклавують протягом 15 хвилин під тиском в одну атмосферу, охолоджують до кімнатної температури і в них висаджують 1,5-2-місячні мікроклони Gentiana lutea L. та вирощують протягом 3-4 місяців за температури 20-22 °С з 16-годинним світловим днем при інтенсивності освітлення 1500-2000 лк, вологості повітря 70-80 %, укорінені рослини Gentiana lutea L. переносять у ґрунт з додаванням агроперліту у співвідношенні 5:1.

Текст

Реферат: Спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L. Спосіб включає приготування середовища, висадження, укорінення отриманих шляхом мікроклонування рослин на живильних середовищах, перенесення укорінених in vitro рослин в умови ex vitro. Готують середовище на основі Мурасіге-Скуга, доповнене вуглеводами сахарозою, манітом, при наступному співвідношенні інгредієнтів, мг/л: NH4NO3 407,5-417,5 KNO3 945-955 215-225 СаСl22Н2О 180-190 MgSO47H2O KН2РО4 80-90 ΚΙ 0,410-0,420 Н3ВО3 3,10-3,20 11,05-11,15 MnSO44H2O 4,25-1,35 ZnSO47H2O 0,120-0,130 Na2MoO42H2O 0,0120CuSO45H2O 0,0130 0,0120CoSO46H2O 0,0130 18,60-18,70 Nа2ЕДТА2Н2О UA 85377 U (12) UA 85377 U 13,85-13,95 FeSO47H2O кінетин 0,045-0,055 мезоінозит 95-105 сахароза 0-2000 маніт 0-3000 вода до 1 л, доводять рівень рH до 5,5, у банки об'ємом 250 мл у співвідношенні 1:4 поміщають суміш агару та агроперліту, розливають по 50 мл середовища, закривають вентиляційними кришками і автоклавують протягом 15 хвилин під тиском в одну атмосферу, охолоджують до кімнатної температури і в них висаджують 1,5-2-місячні мікроклони Gentiana lutea L. та вирощують протягом 3-4 місяців за температури 20-22 °С з 16-годинним світловим днем при інтенсивності освітлення 1500-2000 лк, вологості повітря 70-80 %, укорінені рослини Gentiana lutea L. переносять у ґрунт з додаванням агроперліту у співвідношенні 5:1. UA 85377 U 5 10 15 20 25 30 35 Корисна модель належить до галузі біотехнології та екології і може бути використана для отримання укорінених in vitro та адаптованих до умов ex vitro мікроклонально розмножених рослин Gentiana lutea L., тобто до способу укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L. Тирлич жовтий - латинською Gentiana lutea L. (скорочена назва G. lutea) - високогірний вид рослин, який раніше був поширений по усій території Українських Карпат. Нині представлений ізольованими популяціями, чисельність яких поступово скорочується. Причинами порушення структури популяцій тирличу жовтого та їх зникнення є заготівля кореневищ для потреб офіційної і народної медицини, випас худоби та низька екологічна пластичність виду. У зв'язку з цим, G. lutea занесений до Червоної книги України [1]. Зважаючи на складну біологію розмноження виду та його тривалий онтогенез, відновлення популяцій традиційними методами та за допомогою підсіву насіння, неможливе. Альтернативою є стабілізація чисельності природних популяцій тирличу жовтого рослинами, отриманими шляхом мікроклонального розмноження in vitro. Однак, цей метод попередньо потребує адаптації культивованих in vitro рослин до умов ex vitro. Відомий спосіб укорінення рослин G. lutea на середовищі Мурасіге-Скуга з половинним вмістом макро- та мікро солей (скорочена назва МС/2) з використанням різних концентрацій (0-3 мг/л) індолілмасляної кислоти - ІМК та нітрату срібла для запобігання інфікуванню. Спосіб застосовували для укорінення та наступної адаптації отриманих in vitro рослин G. lutea до умов ex vitro, а відтак - й in situ у Природному парку "Vitosha", Болгарія [2]. Недоліками даного способу є використання дорогих реактивів-вітамінів, AgNO3, ІМК. Відомий спосіб акліматизації отриманих in vitro рослин до умов ex vitro, що включає вкорінення рослин G. lutea на середовищі МС/2 з використанням 0,1 мг/л 1-нафтилоцтової кислоти (НОК). Спосіб застосовували для укорінення та наступної адаптації отриманих in vitro рослин G. lutea до умов ex vitro [3]. Недоліками даного способу є його дороговартість, порівняно невелика кількість укорінених in vitro та адаптованих до умов ex vitro життєздатних рослин. В основу запропонованої корисної моделі поставлено задачу створити такий спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L, який би зменшив матеріальні витрати і дозволив значно збільшити кількість укорінених in vitro та адаптованих до умов ex vitro життєздатних рослин. Зазначена задача вирішується запропонованим способом укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L., який включає приготування середовища, висадження, укорінення отриманих шляхом мікроклонування рослин на живильних середовищах, перенесення укорінених in vitro рослин в умови ех vitro, а відповідно до пропозиції, готують середовище на основі Мурасіге-Скуга, доповнене вуглеводами - сахарозою, манітом при наступному співвідношенні інгредієнтів, мг/л: NH4NO3 407,5-417,5 KNO3 945-955 215-225 СаСl22Н2О MgSO47H2O 180-190 КН2РО4 80-90 ΚΙ 0,410-0,420 Н3ВО3 3,10-3,20 11,05-11,15 MnSO44H2O 4,25-4,35 ZnSO47H2O 0,120-0,130 Na2MoO42H2O 0,0120CuSO45H2O 0,0130 0,0120CoSO46H2O 0,0130 Na2EДТА2Н2О 18,60-18,70 13,85-13,95 FeSO47H2O кінетин 0,045-0,055 мезоінозит 95-105 сахароза 0-2000 маніт 0-3000 вода до 1 л, доводять рівень рН до 5,5, у банки об'ємом 250 мл у співвідношенні 1:4 поміщають суміш агару та агроперліту, розливають по 50 мл середовища, закривають вентиляційними кришками і автоклавують протягом 15 хвилин під тиском в одну атмосферу, охолоджують до кімнатної 1 UA 85377 U 5 10 15 20 25 30 35 температури і в них висаджують 1,5-2-місячні мікроклони Gentiana lutea L. та вирощують протягом 3-4 місяців за температури 20-22 °C з 16-годинним світловим днем при інтенсивності освітлення 1500-2000 лк, вологості повітря 70-80 %, укорінені рослини Gentiana lutea L. переносять у ґрунт з додаванням агроперліту у співвідношенні 5:1. Авторами експериментально встановлено оптимальні склад і кількість інгредієнтів запропонованого живильного середовища. Вихід за межі встановленого складу при приготуванні середовища не забезпечить позитивного результату. Приклад 1 Готували живильне середовище із сахарозою при наступному співвідношенні інгредієнтів, мг/л: NH4NO3 412,5 KNO3 950 220 СаСl22Н2О 185 MgSO47H2O КН2РО4 85 ΚΙ 0,415 Н3ВО3 3,15 MnSO44H2O 11,1 ZnSO47H2O 4,3 0,125 Na2MoO42H20 0,0125 CuSO45H2O 0,0125 CoSO46H2O 18,65 Nа2ЕДТА2Н2О 13,9 FeSO47H2O кінетин 0,05 мезоінозит 100 сахароза 2000 маніт 0 вода до 1 л, доводили рівень рН до 5,5, розливали по 50 мл у банки об'ємом 250 мл, у які попередньо поміщали, як підтримуючий субстрат, суміш, яка містить 0,2 г агару та 0,8 г агроперліту на одну банку, тобто, у співвідношенні 1:4, банки із середовищем закривали вентиляційними кришками і автоклавували протягом 15 хвилин під тиском в одну атмосферу, охолоджували до кімнатної температури, 1,5-2-місячні мікроклони G. lutea висотою 1,5-2 см з 3-5 парами листків в асептичних умовах висаджували у банки з живильним середовищем та вирощували протягом 34 місяців, висаджені у банки рослини вирощували при температурі 20-22 °C, з 16-годинним світловим днем при інтенсивності освітлення 1500-2000 лк, вологості повітря 70-80 %, після укорінення рослини G. Lutea висаджували у ґрунт з додаванням агроперліту в співвідношенні 5:1 для покращення вентиляції кореневої системи. Hа 30-ту добу вирощування усі рослини були життєздатними, проте не утворювали коренів, тому для укорінення їх висаджували у водопровідну воду. Банки з рослинами закривали ковпаками, які відкривали поступово для адаптації рослин до умов ex vitro. На 60-ту добу в 38 % особин відбувався ризогенез, а на 120-ту добу - 94 % рослин утворили корені (Таблиця 1. Результати укорінення та адаптації до росту в ґрунті рослин тирличу жовтого G. luted). Максимальний приріст висоти рослин спостерігали з 1-ої по 30-ту добу культивування, а приріст через 120 діб становив 2,7±0,24 см (Таблиця 2. Приріст рослин тирличу жовтого G. lutea на етапах укорінення та адаптації до росту у ґрунті). Після пересадження у ґрунт для запобігання пересиханню рослин та їх кращої адаптації до умов ex vitro, горшки закривали склом. Протягом чотирьох - шести тижнів проводили повітряні експозиції, поступово збільшуючи тривалість та частоту відкривання. Відсоток адаптації особин до умов ex vitro на 120-ту добу росту в ґрунті становив 72 % і не змінювався протягом наступних 30-ти діб (Таблиця 1). Приріст висоти висаджених у ґрунт рослин на 120-ту добу росту складав 2,4±0,22 см (Таблиця 2). Приклад 2 Готували живильне середовище із манітом при наступному співвідношенні інгредієнтів, мг/л: NH4NO3 412,5 KNO3 950 220 СаСl22Н2О 185 MgSO47H2O КH2РО4 85 2 UA 85377 U 5 10 15 20 25 30 35 40 ΚΙ 0,415 Н3ВО3 3,15 11,1 MnSO44H2O 4,3 ZnSO47H2O 0,125 Na2MoO42H2O 0,0125 CuSO45H2O 0,0125 CoSO46H2O 18,65 Na2ЕДТА2Н2О 13,9 FeSO47H20 кінетин 0,05 мезоінозит 100 маніт 3000 сахароза 0 вода до 1 л, доводили рівень рН до 5,5, розливали по 50 мл у банки об'ємом 250 мл, у які попередньо поміщали, як підтримуючий субстрат, суміш, яка містить 0,2 г агару та 0,8 г агроперліту на одну банку, тобто, у співвідношенні 1:4, банки із середовищем закривали вентиляційними кришками і автоклавували протягом 15 хвилин під тиском в одну атмосферу, охолоджували до кімнатної температури, 1,5-2-місячні мікроклони G. lutea висотою 1,5-2 см з 3-5 парами листків в асептичних умовах висаджували у банки з живильним середовищем та вирощували протягом 34 місяців, висаджені у банки рослини вирощували при температурі 20-22 °C, з 16-годинним світловим днем при інтенсивності освітлення 1500-2000 лк, вологості повітря 70-80 %, після укорінення рослини G. lutea висаджували у ґрунт з додаванням агроперліту в співвідношені 5:1 для покращення вентиляції кореневої системи. На 30-ту добу вирощування усі рослини були життєздатними, 34 % з них утворили корені. На 90-ту добу частка укорінених рослин складала 97 % і не змінювалася протягом наступних 30-ти діб (Таблиця 1). Максимальний приріст висоти рослин спостерігали з 1-ої по 30-ту добу та з 90ої по 120-ту добу, а приріст через 120 діб становив 4,4±0,35 см (Таблиця 2). Відсоток адаптації особин до умов ex vitro на 120-ту добу росту в ґрунті становив 71 % і не змінювався протягом наступних 30-ти діб (Таблиця 1). Приріст висоти висаджених у ґрунт рослин на 120-ту добу росту складав 2,5±0,24 см (Таблиця 2). Запропонований спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L. дозволив підвищити частку укорінених in vitro рослин на 15-18 %; збільшити кількість адаптованих до умов ex vitro рослин в 1,9-2 рази, що становить 34-35 %. Таким чином, запропонований спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L. дозволяє: 1) укорінювати в умовах in vitro і адаптовувати до умов ex vitro рослини рідкісного та цінного лікарського виду; 2) зменшити, порівняно із відомим способом, матеріальні витрати завдяки використанню живильних середовищ без вітамінів, із зниженим вмістом: у 7-10 разів - цукрів, а також шляхом часткової заміни підтримуючого субстрату агару на дешевший у 20-25 разів агроперліт; 3) підвищити відсоток укорінення in vitro рослин G. lutea до 94-97 %; 4) збільшити кількість адаптованих до умов ex vitro рослин до 7172 %. Джерела інформації: 1. Червона книга України. Рослинний світ / [відп. за ред. Я.П. Дідух]. - К.: Глобалконсалтинг, 2009.-900 с. 2. Petrova M. Effect of silver nitrate on in vitro root formation of Gentiana lutea I M. Petrova, E. Zayova, A. Vitkova // Romanian Biotechnological Letters.-2011. - Vol. 16, № 6. - P. 53-58. 3. Пат. 21499 Україна МПК (2006) C12N 5/00 A01H 4/00 C12N 5/04. Спосіб мікроклонального розмноження видів тирличу жовтого (Gentiana lutea L.) та тирличу безстеблового {Gentiana acaulis L.) / Страшнюк Η.Μ., Мельник Β.Μ., Грицак Л.Р., Леськова О.М., Кунах В.Α.; заявники і патентовласники Інститут молекулярної біології і генетики Η АН України, Тернопільський національний педагогічний університет ім. Володимира Гнатюка. - № u 2006 10671; заявл. 09.10.2006; опубл. 15.03.2007, Бюл. №3. Спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L. 3 UA 85377 U Таблиця 1 Результати укорінення та адаптації до росту в ґрунті рослин тирличу жовтого G. lutea Доба 30 60 90 120 Частка укорінених рослин, % Приклад 1 Приклад 2 0 34±2,5 38±2,7 59±3,3 63±3,6 97±4,7 94±5,3 97±4,7 Частка рослин, адаптованих до росту у ґрунті, % Приклад 1 Приклад 2 86±3,8 79±3,5 75±3,4 79±3,5 75±3,4 75±3,1 72±3,1 71±2,8 Таблиця 2 Приріст рослин тирличу жовтого G. lutea на етапах укорінення та адаптації до росту у ґрунті Доба 30 60 90 120 Приріст на етапі укорінення, см Приклад 1 Приклад 2 1,3±0,21 1,2±0,25 1,9±0,24 2,3±0,26 2,4±0,23 3,2±0,32 2,7±0,24 4,4±0,35 Приріст у ґрунті, см Приклад 1 Приклад 2 0,5±0,11 0,8±0,19 1,3±0,17 1,2±0,20 1,5±0,21 1,3±0,23 2,4±0,22 2,5±0,24 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого Gentiana lutea L., який включає приготування середовища, висадження, укорінення отриманих шляхом мікроклонування рослин на живильних середовищах, перенесення укорінених in vitro рослин в умови ex vitro, який відрізняється тим, що готують середовище на основі Мурасіге-Скуга, доповнене вуглеводами - сахарозою, манітом, при наступному співвідношенні інгредієнтів, мг/л: NH4NO3 407,5-417,5 KNO3 945-955 215-225 СаСl22Н2О 180-190 MgSO47H2O KН2РО4 80-90 ΚΙ 0,410-0,420 Н3ВО3 3,10-3,20 11,05-11,15 MnSO44H2O 4,25-1,35 ZnSO47H2O 0,120-0,130 Na2MoO42H2O 0,0120-0,0130 CuSO45H2O 0,0120-0,0130 CoSO46H2O 18,60-18,70 Nа2ЕДТА2Н2О 13,85-13,95 FeSO47H2O кінетин 0,045-0,055 мезоінозит 15 95-105 сахароза 0-2000 маніт 0-3000 вода до 1 л, доводять рівень рH до 5,5, у банки об'ємом 250 мл у співвідношенні 1:4 поміщають суміш агару та агроперліту, розливають по 50 мл середовища, закривають вентиляційними кришками і автоклавують протягом 15 хвилин під тиском в одну атмосферу, охолоджують до кімнатної температури і в них висаджують 1,5-2-місячні мікроклони Gentiana lutea L. та вирощують протягом 3-4 місяців за температури 20-22 °С з 16-годинним світловим днем при інтенсивності освітлення 1500-2000 лк, вологості повітря 70-80 %, укорінені рослини Gentiana lutea L. переносять у ґрунт з додаванням агроперліту у співвідношенні 5:1. 4 UA 85377 U Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5

Дивитися

Додаткова інформація

Автори англійською

Hrytsak Liudmyla Ruslanivna, Melnyk Vitalii Mykolaiovych, Kunakh Viktor Anatoliovych

Автори російською

Грицак Людмила Руслановна, Мельник Виталий Николаевич, Кунах Виктор Анатолиевич

МПК / Мітки

МПК: C12N 5/00, C12N 5/04, A01H 4/00

Мітки: gentiana, рослин, lutea, спосіб, жовтого, умов, адаптації, тирличу, укорінення, vitro

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/7-85377-sposib-ukorinennya-in-vitro-ta-adaptaci-do-umov-ex-vitro-roslin-tirlichu-zhovtogo-gentiana-lutea-l.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб укорінення in vitro та адаптації до умов ex vitro рослин тирличу жовтого gentiana lutea l.</a>

Подібні патенти