Спосіб стерилізації штучно пробуджених експлантів populus tremula l. зеленокорої

Реферат: Спосіб стерилізації штучно пробуджених експлантів Populus tremula L. зеленокорої, до складу якого входить асептична культура однорічних пагонів, стійких до збудників хвороб, з верхівковими та бічними бруньками, молоді проростки, розчин етанолу та стерильна dH2O. Додатково у будь-який період року пагони типу - штучно пробуджені пагони (ШПП) - поміщають у посудину з водою, у контрольовані умови з t=24±2 C, відносною вологістю повітря 70 %, освітленням 3-4 тис. лк., штучно пророщують до отримання зеленого конусу довжиною 1,5-3,0 см. Поетапно стерилізують у розчинах: детергенту (15 хв.), здійснюють відмивання у проточній воді (10 хв.), перенесення у стерильну dH2O, а після у С2Н5ОН - 70 % (30 с), H2O2 - 25 % (10 хв.) з п'ятихвилинним відмиванням у стерильній dH2O. Експланти розрізають на фрагменти стебел довжиною 1,5-2,0 см з однією брунькою. UA 96130 U (12) UA 96130 U UA 96130 U 5 10 15 20 25 30 35 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема до лісорозведення. Відомим аналогом способу розмноження є (Aubakirova L., Kalashnikova E. Application of cellular biotechnology for storage of aspen biodiversity (Populus tremula L.) / International Journal of Agriculture: Research and Review. - Vol., 1(1), 16-20, 2011), який складається з відбору однорічних пагонів з верхівковими та бічними бруньками довжиною 15-20 см, ізольованих із крони дорослого дерева Populus tremula L., стійкого до збудника серцевинної гнилі. Їх штучно пробуджували за кімнатних умов до отримання молодих паростків, які обробляли 96 %-им розчином етанолу, розділяли на сегменти довжиною 1-1,2 см і витримували у концентрованому розчині гіпохлориту натрію або 3 % хлораміну протягом 30-45 хв. Промивали експланти у стерильній дистильованій воді. Недоліком відомого аналога є те, що у способі використовуються стерилянти, які більш токсичні для молодих рослинних тканин та такі, що значно ускладнюють процес отримання асептичної культури. Також не передбачено застосування розчину Н2O2, що є простим у використанні, не токсичним для дослідника та молодих тканин рослини. Забезпечує високий відсоток виходу стерильних експлантів за короткий час та не потребує відмивання у стерильній dН2O. Спосіб стерилізації штучно пробуджених експлантів Populus tremula L. зеленокорої включає використання як рослин-донорів осики зеленокорої форми без морфологічних та фізіологічних відхилень, не уражених хворобами та шкідниками, віком 30-40 років. Як первинні експланти використовують штучно пробуджені пагони (ШПП), які отримують із бруньок, що знаходяться у стані спокою. Для цього частини пагонів з верхівковими та бічними бруньками, які відбирають упродовж року, завдовжки 20-30 см, поміщають у посудину з водою і за рахунок контрольованих лабораторних умов (t=24±2 °С, відносна вологість повітря -70 %, освітлення 3-4 тис. лк.) штучно пророщують до отримання зеленого конусу довжиною 1,5-3,0 см. Для ефективного знешкодження екзогенної та ендогенної мікрофлори експланти стерилізували в лабораторних умовах у два етапи: І - в нестерильних умовах та II - в умовах ламінарного боксу. На І - етапі пагони витримують у мильному розчині 15 хв., інтенсивно помішуючи. Після відмивають у проточній воді протягом 10 хв. та переносять у посудину із стерильною dН2O. На II - етапі усі маніпуляції проводять у стерильному ламінарному боксі із стерильними розчинами та інструментами. У запропонованому способі стерилізації використовують стерилянти у такій послідовності: 70 %-вий розчин етанолу (С2Н5ОН) - 30 с, 25 %-вий розчину пероксиду гідрогену (Н2O2) 10 хв. та одноразове відмивання 5 хв. При використанні 12,5 %-го розчину Н2O2-15 хв. експланти не відмивають від залишків стерилянта, а відразу переносять на чашку Петрі з фільтрувальним папером. Використання даного способу стерилізації експлантів Populus tremula L. зеленокорої надасть можливість отримати 98 % стерильних життєздатних експлантатів з мінімальною шкодою для рослинних тканин. Забезпечить лісову галузь значною кількістю високоякісного генетичнооднорідного садивного матеріалу для плантаційного лісовирощування та інших потреб. 40 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 50 Спосіб стерилізації штучно пробуджених експлантів Populus tremula L. зеленокорої, до складу якого входить асептична культура однорічних пагонів, стійких до збудників хвороб, з верхівковими та бічними бруньками, молоді проростки, розчин етанолу та стерильна dH2O, який відрізняється тим, що додатково у будь-який період року пагони типу - штучно пробуджені пагони (ШПП) - поміщають у посудину з водою, у контрольовані умови з t=24±2 C, відносною вологістю повітря 70 %, освітленням 3-4 тис. лк., штучно пророщують до отримання зеленого конусу довжиною 1,5-3,0 см, поетапно стерилізують у розчинах: детергенту (15 хв.), здійснюють відмивання у проточній воді (10 хв.), перенесення у стерильну dH2O, а після у С2Н5ОН -70 % (30 с), H2O2 - 25 % (10 хв.) з п'ятихвилинним відмиванням у стерильній dH2O при цьому, експланти розрізають на фрагменти стебел довжиною 1,5-2,0 см з однією брунькою. Комп’ютерна верстка С. Чулій Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1