Композиції і способи контролю нематод як шкідників сільського господарства

Реферат: Описані композиції і способи боротьби з нематодами, що вражають рослини або тварин. Сполуки включають визначені 2,5-заміщені тетразоли. UA 114468 C2 (12) UA 114468 C2 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Нематоди (пішло від грецького слова "нитка") є активними, гнучкими, довгастими організмами, які живуть у вологих поверхнях або рідких середовищах, включаючи плівки води у ґрунті і вологі тканини в інших організмах. Хоча було ідентифіковано тільки 20000 видів нематод, вважається, що фактично існує від 40000 до 10 мільйонів видів. Багато видів нематод еволюціонували таким чином, що зараз є дуже успішними паразитами рослин і тварин і спричиняють значні економічні втрати у сільському господарстві і тваринництві, а також смертність і захворюваність у людей (Whitehead (1998) Plant Nematode Control. CAB International, New York). Паразитарні нематоди рослин можуть заражати усі частини рослин, включаючи корені, квіткові бутони, які розвиваються, листя і стебла. Паразити рослин класифікують на основі їх звичок живлення на широкі категорії мігруючих ектопаразитів, мігруючих ендопаразитів і прикріплених ендопаразитів. Прикріплені ендопаразити, які включають бульбочкові нематоди (Meloidogyne) і цистотворні нематоди (Globodera і Heterodera), індукують ділянки живлення і спричиняють тривалі в часі інфекції в коренях, які часто сильно вражають культури (Whitehead, supra). Оцінено, що паразитарні нематоди коштують садівництву і сільському господарству більш ніж 78 мільярдів доларів США на рік у всьому світі, на основі встановленої середньої щорічної втрати 12 % поширеної серед усіх основних культур. Наприклад, встановлено, що нематоди викликають втрати соєвих бобів приблизно 3,2 мільярдів доларів США на рік у всьому світі (Barker et al. (1994) Plant and Soil Nematodes: Societal Impact and Focus for the Future. The Committee on National Needs and Priorities in Nematology. Cooperative State Research Service, US Department of Agriculture and Society of Nematologists). Декілька чинників обумовлюють потребу у безпечному та ефективному негайному контролі нематод. Продовження зростання населення, голод і руйнування довкілля посилили заклопотаність відносно стійкості сільського господарства, і нові урядові правила можуть запобігти або суттєво обмежити використання багатьох доступних сільськогосподарських протигельмінтних препаратів. Для ефективного контролю нематод існує лише невеликий набір хімічних препаратів (Becker (1999) Agricultural Research Magazine 47(3): 22-24; патент США № 6048714). В цілому хімічні нематициди є високотоксичними сполуками, які, як відомо, викликають значне ушкодження довкілля і все більше обмежені в кількостях і місцях, в яких вони можуть використовуватися. Наприклад, грунтовий фумігант метилбромід, який ефективно використовували для зниження ураження нематодами в цілому ряді окремих культур, контролюється Монреальським протоколом ООН як речовина, що руйнує озоновий шар, і знаходиться на етапі поетапного скорочення у своєму використанні в США і у всьому світі (Carter (2001) California Agriculture, 55(3):2). Очікується, що на виробництво полуниці та інших звичайних сільськогосподарських культур буде здійснено істотний вплив у разі відсутності відповідної заміни метилброміду. Так само, нематициди широкого спектру, такі як Телон (різні композиції 1,3-дихлорпропену), мають значні обмеження у своєму використанні внаслідок токсикологічних впливів (Carter (2001) California Agriculture, 55(3):12-18). Органофосфатні і карбаматні пестициди є іншим важливим класом нематицидів, які проходять регуляторні перевірки, і нині поступово знижують використання деяких таких сполук (наприклад, фенаміфос, тербуфос, кадусафос). На сьогодні був досягнутий незначний успіх у пошуку ефективних безпечних замін токсичних, але ефективних і використовуваних зазвичай нематицидів. Недавній отриманий приклад поганої ефективності багатьох новітніх потенційних замін органофосфатів і карбаматів представлений дослідженням альтернатив фенаміфосу для контролю паразитарних нематод рослин у бермудській траві. У цих дослідженнях жодна з експериментальних обробок не знизила щільності популяції паразитарних нематод рослин і послідовно не сприяла утворенню торфу або виробленню торфу коренями (Crow (2005) Journal of Nematology, 37(4): 477-482). Внаслідок цього зберігається нагальна потреба у розробці безпечних для довкілля і ефективних способів контролю паразитарних нематод рослин. Відомо, що деякі види рослин є надзвичайно резистентними до нематод. Найкращі описані з них включають чорнобривці (Tagetes spp.), дзвінець (Crotalaria spectabilis), хризантему (Chrysanthemum spp.), рицину звичайну (Ricinus communis), мелію (Azardiracta indica) і багато членів сімейства Asteraceae (сімейство Compositae) (Hackney & Dickerson. (1975) J Nematol 7(1): 84-90). У випадку з Asteraceae фотодинамічна сполука альфа-тертиєніл, як було показано, була відповідальна за сильну нематицидну активність коренів. Рицину звичайну заорюють в якості зеленого добрива перед посадкою сільськогосподарської культури. Проте, істотним недоліком рицини звичайної є те, що насіння містить токсичні сполуки (такі як рицин), які згубні для людини, домашніх тварин і худоби, а також є сильними алергенами. Проте, у більшості випадків активний принцип(и) нематицидної активності рослин не був відкритий, і залишається важким 1 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 отримання комерційно успішних нематицидних продуктів з цих резистентних рослин або перенесення резистентності рослинам сільськогосподарського призначення, таким як соєві боби і бавовна. Генетична резистентність до певних нематод є в деяких комерційних сортах (наприклад, соєвих бобів), проте вони обмежені за чисельністю, і наявність сортів з необхідними агрономічними характеристиками і резистентністю обмежена. Крім того, отримання резистентних до нематод комерційних видів стандартними способами розведення рослин, засноване на генетичній рекомбінації за допомогою статевих схрещувань, є повільним процесом і часто додатково ускладнюється відсутністю відповідної зародкової плазми. Хімічні способи контролю паразитарних нематод рослин продовжують залишатися важливими для багатьох культур з відсутністю адекватної природної резистентності або джерела трансгенної резистентності. На спеціалізованих ринках економічні складнощі, які виникли в результаті ураження нематодами, особливо високі для полуниці, бананів та інших овочів і фруктів, що мають велику цінність. На ринках вирощування культур на великих площах ураження нематодами найчастіше відзначається для соєвих бобів і бавовни. Проте, існує безліч інших культур, які страждають від значного ураження нематодами, включаючи картоплю, перець, цибулю, цитрусові, каву, цукровий буряк, парникові декоративні рослини і дернові рослини гольф-полі. Для використання в сучасному сільському господарстві нематициди повинні мати високу активність, широкий спектр активності відносно різних штамів нематод і не повинні бути токсичними для організмів, що не є мішенями. Паразитарні нематоди хребетних (наприклад, людини, сільськогосподарської худоби і домашніх тварин) включають круглих черв'яків кишечника, анкілостоми, гострики, власоголоави і філярії. Зараження може бути здійснене різними шляхами, включаючи зараження водою, проникнення через шкіру, укуси комах або проковтування зараженої їжі. У одомашнених тварин контроль нематод або "дегельмінтизація" відіграє важливу роль в економічній життєздатності виробників тваринницької продукції і є необхідною частиною ветеринарного догляду за домашніми тваринами. Паразитарні нематоди викликають смертність у тварин (наприклад, серцевий гельмінт у кішок і собак) і захворюваність в результаті інгібування паразитами здатності ураженої тварини поглинати поживні речовини. Недостатність поживних речовин, викликана паразитами, веде до захворювань і уповільнення росту у сільськогосподарських і домашніх тварин. Наприклад, у великої рогатої і молочної худоби одна непролікована інфекція остертагією може постійно обмежувати здатність тварини перетворювати їжу у м'язову масу або молоко. Два чинники обумовлюють потребу в новітніх протигельмінтних препаратах і вакцинах для контролю паразитарних нематод тварин. По-перше, деякі більш домінуючі види паразитарних нематод рогатої худоби набувають резистентності до протигельмінтних препаратів, наявних нині, що означає, що ці продукти втрачають свою ефективність. Такі факти недивні, оскільки існує мала кількість ефективних протигельмінтних препаратів, доступних на ринку, і більшість з них використовується на постійній основі. Деякі види паразитів виробили стійкість до більшості антигельмінтиків (Geents et al. (1997) Parasitology Today 13: 149-151; Prichard (1994) Veterinary Parasitology 54: 259-268). Той факт, що більшість антигельмінтиків має подібні механізми дії, ускладнює справу, оскільки втрата чутливості паразита до одного препарату часто супроводжується сторонньою резистентністю, тобто резистентністю до інших препаратів цього ж класу (Sangster & Gill (1999) Parasitology Today 15(4): 141-146). По-друге, існують деякі питання токсичності для більшості наявних зараз сполук. Інфекції паразитарними нематодами також призводять до значної захворюваності і смертності у людей, особливо в тропічних регіонах Африки, Азії та Америки. Всесвітня організація охорони здоров'я вказує на показник уражених людей 2,9 мільярди, і в деяких областях 85 % населения є переносниками нематод. Тоді як показник смертності низький відносно інфекцій, захворюваність є значною і конкурує з показниками років життя, скорегованих за непрацездатністю (DALY), викликаними діабетом і раком легенів у всьому світі. Приклади паразитарних нематод людини включають анкілостоми, філярії і гострики. Анкілостоми (1,3 мільярдів інфекцій) є головною причиною анемії у мільйонів дітей, призводячи до затримки росту і порушення розвитку когнітивної функції. Філярії вражають лімфатичну систему, призводячи до постійно набряклих і деформованих кінцівок (слонізм), і очі, викликаючи африканський онхоцеркоз. Круглий черв'як товстого кишечника Ascaris lumbricoides вражає більш ніж один мільярд людей у всьому світі і викликає розлад травлення та обструктивну хворобу кишечника. У розвинених країнах гострики зустрічаються часто і зазвичай переносяться дітьми в дитячому садку. 2 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Навіть при безсимптомних паразитарних інфекціях нематоди можуть позбавляти хазяїна цінних поживних речовин і підвищувати здатність інших організмів здійснювати вторинні інфекції. В деяких випадках інфекції можуть викликати виснажливі захворювання і можуть привести до анемії, діареї, обезводнення, втрати апетиту або смерті. Незважаючи на деякий прогрес в доступності препаратів і розвиток інфраструктури охорони здоров'я, а також практично повну елімінацію однієї трофічної нематоди (плаваючої ришти), більшість нематодних захворювань залишаються важковирішуваними завданнями. Лікування анкілостомозу антигельмінтиками, наприклад, не забезпечує відповідного контролю в областях з високою частотою виникнення внаслідок швидкої повторної інфекції, що виникає після лікування. Насправді впродовж останніх 50 років, тоді як показники інфекції нематодами в США, Європі і Японії впали, загальна кількість інфекцій у всьому світі підвищується із зростанням населення світу. За допомогою широкомасштабних ініціатив, що проводяться регіональними урядами, Всесвітньою організацією охорони здоров'я, фондами і фармацевтичними компаніями, нині намагаються контролювати інфекції нематодами наявними нині способами, включаючи три програми для контролю онхоцеркозу в Африці і Америці, з використанням івермектину і боротьби з переносниками; Глобальний альянс з елімінації лімфатичного філяріатозу з використанням DEC, албендазолу та івермектину; і надзвичайно успішну програму зі знищення ришти. До того часу, поки не будуть розроблені безпечні та ефективні вакцини для профілактики інфекцій паразитарними нематодами, антигельмінтики продовжуватимуть використовувати для контролю і лікування інфекцій паразитарними нематодами у людини і домашніх тварин. У науці були описані визначені інсектицидні оксазоли (патент США № 4791124) і тіазоли (патент США № 4908357), а також нематицидні піразоли (патент США № 6310049). Цей винахід описує специфічні сполуки тетразолів з напрочуд сильною нематицидною активністю, порівнянною з представленими на ринку стандартами. Нематицидна активність комерційного рівня раніше не була продемонстрована для тетразолів. Важливим є і той факт, що ці сполукимають широкий спектр активності відносно нематод, при цьому безпечний для інших організмів. СУТНІСТЬ ВИНАХОДУ Описані композиції і способи для контролю нематод, наприклад, нематод рослини, що вражають рослини або місце виростання рослин. Нематоди, які паразитують на хребетних (наприклад, у людини або іншого хребетного, зокрема, схильного до інфікування або інфікованого одним або більше видів нематод), также могут контролюватся з використанням описаних тут способів і композицій. Даний винахід описує нематицидні композиції, що включають ефективну кількість сполуки або суміші сполук, які мають будь-яку з описаних тут формул, наприклад, сполук, представлених нижче. Даний винахід описує сполуку за Формулою I або її сіль, наприклад, фармацевтично прийнятну сіль, N A C N N N Формула I де A є, необов'язково, заміщеним арилом або, необов'язково, заміщеним арилалкілом (наприклад, арилC1алкілом або арилC2алкілом) або, необов'язково, заміщеним арилоксо або, необов'язково, заміщеним арилтіо, або, необов'язково, заміщеним гетероарилом (включаючи піридил, піразил, оксазоліл або ізоксазоліл) або, необов'язково, заміщеним гетероарилалкілом (наприклад, гетероарилC1алкілом або гетероарилC2алкілом, або гетероарилC3алкілом, або гетероарилC4алкілом), або, необов'язково, заміщеним гетероарилоксо, або, необов'язково, заміщеним гетероарилтіо, при цьому вказані замінники вибрані з групи, яка складається із галогену, C1-C6 галогеналкілу, C6-C10 арилу, C4-C7 циклоалкілу, C2-C6 алкілу, C2-C6 алкенілу, C2C6 алкінілу, C6-C10 арил(C1-C6)алкілу, C6-C10 арил(C2-C6)алкенілу, C6-C10 арил(C2-C6) алкінілу, C1C6 гідроксіалкілу, аміно, уреїдо, циано, C1-C6 ациламіно, гідроксі, тиолу, C1-C6 ацилокси, азидо, C1-C6 алкокси і карбокси, C(H)O; і C є гетероарилом (включаючи тиєніл, фураніл, оксазоліл та ізоксазоліл), кожен з котрих незалежно може бути, необов'язково, заміщений одним або більше замінників, які можуть бути 3 UA 114468 C2 5 10 вибрані із: фтору, хлору, CH3 і OCF3 або, незалежно, необов'язково, заміщений піролідинілом (включаючи піролідиніл-1, піролідиніл-2 і піролідиніл-3) або, незалежно, необов'язково, заміщений піперидинілом (включаючи піперидиніл -1, піперидиніл -2 або піперидиніл -3 і піперидиніл -4), або, незалежно, необов'язково, заміщений піролілом (включаючи піроліл-1, піроліл-2 або піроліл-3), або, незалежно, необов'язково, заміщений піролілоксо (включаючи піроліл-2 і піроліл-3), або, незалежно, необов'язково, піролілтіо (включаючи піроліл-2 і піроліл3), або, незалежно, необов'язково, заміщений піролілалкілом (наприклад, піроліл C1 алкілом і піроліл C2 алкілом) (включаючи піроліл-1, піроліл-2 і піроліл-3), при цьому вказані замінники вибрані із групи, яка складається із метилу, алкілу (наприклад, C2, C3, C4, C5 і C6 алкілу), циклу, гетероциклу, гідроксіалкілу і галогену. Сполука за Формулою Ia або її сіль, R2 R6 R7 R 1 R3 N N N R4 N R8 N R9 R5 15 Формула Ia де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6, R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену. Сполука за Формулою Ib або її сіль, R2 R7 R 1 E R3 N N R4 20 25 R8 N N R9 R5 Формула Ib де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S. Сполука за Формулою Ic або її сіль, R2 R6 R 1 E R3 N N R4 R8 N N R9 R5 30 Формула Ic 4 UA 114468 C2 5 де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R6, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S. Сполука за Формулою Id або її сіль, R2 R7 R8 R1 R6 R3 N R11 N 15 R12 N R13 R5 10 R10 N N R4 R9 Формула Id де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6-R13 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену. Сполука за Формулою II або її сіль, наприклад, фармацевтично прийнятна сіль, N A C N N N Формула II 20 25 30 35 40 де A є, необов'язково, незалежно заміщеним арилом або, необов'язково, незалежно заміщеним арилулкілом (наприклад, арилC1алкілом и арилC2алкілом) або, необов'язково, заміщеним, незалежно, арилоксо або, необов'язково, незалежно, заміщеним арилтіо, або, необов'язково, заміщеним, незалежно, гетероарилом (включаючи піридил, піразил, оксазоліл і ізоксазоліл), або, необов'язково, заміщеним незалежно гетероарилалкілом (наприклад, гетероарилC1алкілом або гетероарилC2алкілом, або гетероарилC3алкілом, або гетероарилC4алкілом), або, необов'язково, заміщеним незалежно гетероарилоксо-, або, необов'язково, заміщеним незалежно гетероарилтіо, при цьому вказані замінники вибрані із групи, яка складається із галогену, метилу, C1-C6 галогеналкілу, C6-C10 арилу, C4-C7 циклоалкілу, C2-C6 алкілу, C2-C6 алкенілу, C2-C6 алкінілу, C6-C10 арил(C1-C6)алкілу, C6-C10 арил(C2-C6)алкенілу, C6-C10 арил(C2-C6) алкінілу, C1-C6 гідроксіалкілу, аміно, уреїдо, циано, C1-C6 ациламіно, гідроксі, тиолу, C1-C6 ацилокси, азидо, C1-C6 алкокси і карбокси, C(H)O; і; C є гетероарилом, включаючи тиєніл, фураніл, оксазоліл або ізоксазоліл, кожен з яких незалежно може бути, необов'язково, заміщений одним або більше замінників, які можуть бути вибрані із: фтору, хлору, CH3 і OCF3 або, необов'язково, заміщеним незалежно піролідинілом (включаючи піролідиніл-1, піролідиніл-2 і піролідиніл -3), або, необов'язково, заміщеним незалежно піперидинілом (включаючи піперидиніл -1, піперидиніл -2 або піперидиніл -3 і піперидиніл -4), або, необов'язково, заміщеним незалежно піролілом (включаючи піроліл-1, піроліл-2 або піроліл-3), або, необов'язково, заміщеним незалежно піролілоксо (включаючи піроліл-2 і піроліл-3), або, необов'язково, заміщеним незалежно піролілтіо (включаючи піроліл-2 і піроліл-3), або, необов'язково, заміщеним незалежно піролілалкілом (наприклад, піроліл C1 алкілом і піроліл C2 алкілом) (включаючи піроліл-1, піроліл-2 і піроліл-3), при цьому вказані замінники вибрані із групи, яка складається із метилу, алкілу (наприклад, C2, C3, C4, C5 і C6 алкілу), циклу, гетероциклу, гідроксіалкілу і галогену. Сполука за Формулою ІІа або її сіль, 5 UA 114468 C2 R2 R6 R1 R7 R3 N N R4 N N R8 N R9 R5 5 Формула ІІа де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6, R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену. Сполука за Формулою IIb або її сіль, R2 R7 R 1 E R3 N N R4 N N R9 R5 10 15 R8 Формула IIb де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S. Сполука за Формулою IIc або її сіль, R2 R6 R 1 E R3 N N R4 N N R9 R5 20 25 R8 Формула IIc де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R6, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S. Сполука за Формулою IId або її сіль, 6 UA 114468 C2 R2 R7 R1 R8 R6 R9 R3 R10 N N R4 N 10 15 20 25 30 35 40 45 50 R11 R12 N R13 R5 5 N Формула IId де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6-R13 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену. Крім того, у тексті даної заявки описаний спосіб контролю небажаних нематод, і такий спосіб включає введення ссавцям, птахам, або в їх корми, рослини, насіння, або в ґрунт композиції, що включає ефективну кількість сполуки за кожною з Формул I, Ia, Ib, Ic, Id, II, ІІа, IIb, IIc і IId. В деяких випадках спосіб включає контроль паразитарних нематод рослин і включає введення рослині, підданій атаці (чи вже інфікованій) такими нематодами, в насіння таких рослин або грунт, в якому такі рослини ростуть або передбачається вирощувати. Також описана нематицидна композиція, що включає сполуку за будь-якою з Формул I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc і IId, в концентрації, достатній для зниження життєздатності паразитарних нематод. В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає водний сурфактант. Приклади сурфактантів, які можуть використовуватися, включають Спан 20, Спан 40, Спан 80, Спан 85, Твін 20, Твін 40, Твін 80, Твін 85, Тритон X 100, Макон 10, Ігепал CO 630, Бридж 35, Бридж 97, Бридж 58, Бридж 78, Бридж 98, Тергітол TMN 6, Доуфакс 3B2, Фізан, Агример VA6 і і Токсимул TA 15. В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає підсилювач проникності (наприклад, циклодекстрин). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає співрозчинник. Приклади співрозчинників, які можуть використовуватися, включають етиллактат, метилсойат/етиллактатні суміші співрозчинників (наприклад, Степозол), ізопропанол, ацетон, 1,2-пропандиол, n- алкілпіролідони (наприклад, серію Agsolex), олію на нафтовій основі (наприклад, ароматичну 200) або мінеральну олію (наприклад, парафінову олію). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає інший пестицид (наприклад, нематицид, інсектицид або фунгіцид), такий як авермектин (наприклад, абамектин, івермектин), мілбеміцин, флуенсульфон, хлотіанідин, тіаметоксан, імідаклоприд, тіодикарб, алдикарб, оксамил, фенаміфос, фостиазат, метам натрію, етридіазол, пента-хлор-нітробензен (PCNB), флутоланіл, металаксил, мефоноксам і фосетил-ал. Корисні фунгіциди включають, але не обмежуються перерахованим, силтіофам, флудиоксоніл, міклобутаніл, азоксистробін, трифлоксистробін, хлороталоніл, пропіконазол, тебуконазол і піраклостробін. Композиція може також включати гербіциди (наприклад, трифлоксисульфурон, гліфосат, галосульфурон) та інші хімічні речовини для контролю захворювання (наприклад, хітозан). Також описана нематицидна композиція, яка включає: аналоги тетразолу або суміші аналогів, які можуть бути вибрані із групи, яка складається зі сполук: 2-феніл-5-(тіофен-2-іл)-2Hтетразол, 5-(фуран-2-іл)-2-феніл-2H-тетразол, 2-(4-хлорфеніл)-5-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 2-(4хлорфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразол, 2-(4-хлор-2-метилфеніл)-5-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 2(4-хлор-2-метилфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразол, 5-феніл-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 2(фуран-2-іл)-5-феніл-2H-тетразол, 5-(4-хлорфеніл)-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 5-(4-хлорфеніл)2-(фуран-2-іл)-2H-тетразол, 5-(4-хлор-2-метилфеніл)-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 5-(4-хлор-2метилфеніл)-2-(фуран-2-іл)-2H-тетразол. У різних варіантах втілення композиція додатково включає водний сурфактант. Приклади сурфактантів, які можуть використовуватися, включають Спан 20, Спан 40, Спан 80, Спан 85, Твін 20, Твін 40, Твін 80, Твін 85, Тритон X 100, Макон 10, Ігепал CO 630, Бридж 35, Бридж 97, Бридж 58, Бридж 78, Бридж 98, Тергітол TMN 6, Доуфакс 3B2, Фізан, Агример VA6 і Токсимул TA 15. В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає підсилювач проникності (наприклад, циклодекстрин). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає співрозчинник. Приклади співрозчинників, які можуть використовуватися, включають 7 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 етиллактат, метилсойат/етиллактатні суміші співрозчинників (наприклад, Степозол), ізопропанол, ацетон, 1,2-пропандиол, n- алкілпіролідони (наприклад, серію Agsolex), олію на нафтовій основі (наприклад, ароматичну 200) або мінеральну олію (наприклад, парафінову олію). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає інший пестицид (наприклад, нематицид, інсектицид або фунгіцид), такий як авермектин (наприклад, абамектин, івермектин), мілбеміцин, флуенсульфон, хлотіанідин, тіаметоксан, імідаклоприд, тіодикарб, алдикарб, оксаміл, фенаміфос, фостіазат, метам натрію, етридіазол, пента-хлор-нітробензен (PCNB), флутоланіл, металаксил, мефоноксам і фосетил-ал. Корисні фунгіциди включають, але не обмежуються перерахованим, силтіофам, флудиоксоніл, міклобутаніл, азоксистробін, трифлоксистробін, хлороталоніл, пропіконазол, тебуконазол і піраклостробін. Композиція може також включати гербіциди (наприклад, трифлоксисульфурон, гліфосат, галосульфурон) та інші хімічні речовини для контролю захворювання (наприклад, хітозан). Також описаний спосіб контролю небажаних паразитарних нематод (наприклад, нематод, окрім C. elegans), і такий спосіб включає введення хребетним, рослинам, в насіння або грунт, нематицидної композиції, що включає сполуку за будь-якою описаною тут Формулою у будь-якій описаній тут нематицидній композиції. В деяких випадках нематоди інфікують рослини, і нематицидна композиція застосовується до грунту або рослин. В деяких випадках нематицидну композицію застосовують до грунту перед посадкою рослин. В деяких випадках нематицидну композицію застосовують до грунту після посадки рослин. В деяких випадках нематицидну композицію застосовують до грунту з використанням краплинної системи зрошування. В деяких випадках нематицидну композицію застосовують до грунту з використанням дренажної системи. В деяких випадках нематицидну композицію застосовують до коренів рослини або листової системи рослини (наприклад, листя, стебел). В деяких випадках нематицидну композицію вводять в грунт при оранці або у борозни. В деяких випадках нематицидну композицію застосовують до насіння. В деяких випадках паразитарні нематоди інфікують хребетну тварину. В деяких випадках нематицидну композицію вводять хребетній тварині (наприклад, людині або хребетній тварині, що не є людиною, зокрема, підданій або інфікованій одним або більше видів нематод). В деяких випадках нематицидну композицію вводять хребетній тварині, що не є людиною. В деяких випадках нематицидну композицію вводять людині. В деяких випадках нематицидну композицію розробляють у вигляді дози для введення тварині, що не є людиною. В деяких випадках нематицидну композицію розробляють у вигляді препарату, що перорально вводиться. В деяких випадках нематицидну композицію розробляють у вигляді препарату, що ін'єктується. В деяких випадках нематицидну композицію розробляють для місцевого застосування, такого як підливання, або для використання у бирках або загривках. Також описаний спосіб лікування порушення (наприклад, інфекції), викликаного паразитарною нематодою (наприклад, M. incognita, H. glycines, B. longicaudatus, H. contortus, A. suum, B. malayi), у суб'єкта, наприклад, рослини-хазяїна, тварини або індивідуума. Спосіб включає введення суб'єктові ефективної кількості сполуки за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId. Сполука може бути доставлена декількома способами, включаючи обробку перед посадкою, після посадки, обробку насіння і в як добавка в корм, дренаж, у вигляді способу для зовнішнього застосування, пігулки або ін'єкції. У ще одному аспекті описані способи інгібування паразитарних нематод (наприклад, M. incognita, H. glycines, B. longicaudatus, H. contortus, A. suum, B. malayi). Такі способи можуть включати контакт нематоди (на будь-якій стадії зростання) зі сполукою, наприклад, сполукою за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId. У іншому аспекті описані способи зниження життєздатності або плодючості, або уповільнення росту або розвитку, або інгібування інфекційної здатності нематоди з використанням нематицидної сполуки, наприклад, сполуки за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId. Такі способи можуть включати контакт нематоди зі специфічною сполукою, наприклад, сполукою за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId; (с) зниження життєздатності або плодючості паразитарної нематоди. Також описаний спосіб зниження життєздатності, росту або плодючості паразитарної нематоди, і такий спосіб включає дію на нематоду сполукою за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId, і спосіб захисту рослини від інфекції нематодами, і такий спосіб включає застосування до рослини, грунту або насіння рослини сполуки за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId. Також описаний спосіб захисту хребетної тварини (наприклад, птаха або ссавця) від інфекції нематодами, і такий спосіб включає введення хребетному сполуки за Формулою I, Ia, Ib, Ic, Id, II, IIa, IIb, IIc або IId. Птах може бути представлений одомашненим птахом (наприклад, куркою, 8 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 індичкою, качкою або гусаком). Ссавець може бути представлений одомашненою твариною, наприклад, домашньою твариною (наприклад, собакою, кішкою, конем або кроликом) або худобою (наприклад, коровою, вівцею, свинею, козою, альпакою або ламою), або може бути представлена людиною. Винахід описує способи контролю паразитарних нематод шляхом введення описаної тут сполуки. Способи включають хребетним, рослинам, в насіння або грунт, нематицидної композиції, яка включає: (a) ефективну кількість сполуки або суміші сполук, що мають будь-яку з описаних тут формул, наприклад, одну з наступних формул: де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і CO; R6, R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену; де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S; де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R6, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; 9 UA 114468 C2 E є O або S; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6-R13 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену. Композиції також можуть включати водний сурфактант. Приклади сурфактантів, які можуть використовуватися, включають Спан 20, Спан 40, Спан 80, Спан 85, Твін 20, Твін 40, Твін 80, Твін 85, Тритон X 100, Макон 10, Ігепал CO 630, Бридж 35, Бридж 97, Бридж 58, Бридж 78, Бридж 98, Тергітол TMN 6, Доуфакс 3B2, Фізан, Агример VA6 і Токсимул TA 15. В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає підсилювач проникності (наприклад, циклодекстрин). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає співрозчинник. Приклади співрозчинників, які можуть використовуватися, включають етиллактат, метилсойат/етиллактатні суміші співрозчинників (наприклад, Степозол), ізопропанол, ацетон, 1,2-пропандіол, n- алкілпіролідони (наприклад, серію Agsolex), олію на нафтовій основі (наприклад, ароматичну 200) або мінеральну олію (наприклад, парафінову олію). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає інший пестицид (наприклад, нематицид, інсектицид або фунгіцид), такий як авермектин (наприклад, абамектин, івермектин), мілбеміцин, флуенсульфон, хлотіанідин, тіаметоксан, імідаклоприд, тіодикарб, алдикарб, оксаміл, фенаміфос, фостіазат, метам натрію, етридіазол, пента-хлор-нітробензен (PCNB), флутоланіл, металаксил, мефоноксам і фосетил-ал. Корисні фунгіциди включають, але не обмежуються перерахованим, силтіофам, флудиоксоніл, міклобутаніл, азоксистробін, трифлоксистробін, хлороталоніл, пропіконазол, тебуконазол і піраклостробін. Композиція може також включати гербіциди (наприклад, трифлоксисульфурон, гліфосат, галосульфурон) та інші хімічні речовини для контролю захворювання (наприклад, хітозан). Також описаний спосіб контролю небажаних нематод, який включає введення в рослини, насіння або грунт нематицидної композиції, яка включає ефективну кількість: (а) сполуки, яка може бути вибрана із групи, яка складається із 2-феніл-5-(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 5-(фуран2-іл)-2-феніл-2H-тетразолу, 2-(4-хлорфеніл)-5-(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(4-хлорфеніл)-5(фуран-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(4-хлор-2-метилфеніл)-5-(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(4-хлор-2метилфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразолу, 5-феніл-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(фуран-2-іл)5-феніл-2H-тетразолу, 5-(4-хлорфеніл)-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 5-(4-хлорфеніл)-2-(фуран2-іл)-2H-тетразолу, 5-(4-хлор-2-метилфеніл)-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 5-(4-хлор-2метилфеніл)-2-(фуран-2-іл)-2H-тетразолу. Також описаний спосіб контролю небажаних нематод, який включає введення хребетним (наприклад, людині або іншому хребетному, який не є людиною, зокрема, підданому або інфікованому одним або більше видів нематод) нематицидної композиции, яка включає ефективну кількість: (а) сполуки, яка може бути вибрана із групи, яка складається із 2-феніл-5(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 5-(фуран-2-іл)-2-феніл-2H-тетразолу, 2-(4-хлорфеніл)-5-(тіофен-2іл)-2H-тетразолу, 2-(4-хлорфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(4-хлор-2-метилфеніл)-5(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(4-хлор-2-метилфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразолу, 5-феніл-2(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 2-(фуран-2-іл)-5-феніл-2H-тетразолу, 5-(4-хлорфеніл)-2-(тіофен-2іл)-2H-тетразолу, 5-(4-хлорфеніл)-2-(фуран-2-іл)-2H-тетразолу, 5-(4-хлор-2-метилфеніл)-2(тіофен-2-іл)-2H-тетразолу, 5-(4-хлор-2-метилфеніл)-2-(фуран-2-іл)-2H-тетразолу. У певних варіантах втілення способу композиція додатково включає водний сурфактант. Приклади сурфактантів, які можуть використовуватися, включають Спан 20, Спан 40, Спан 80, Спан 85, Твін 20, Твін 40, Твін 80, Твін 85, Тритон X 100, Макон 10, Ігепал CO 630, Бридж 35, Бридж 97, Бридж 58, Бридж 78, Бридж 98, Тергітол TMN 6, Доуфакс 3B2, Фізан, Агример VA6 і Токсимул TA 15. В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає підсилювач проникності (наприклад, циклодекстрин). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає співрозчинник. Приклади співрозчинників, які можуть використовуватися, включають 10 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 етиллактат, метилсойат/етиллактатні суміші співрозчинників (наприклад, Степозол), ізопропанол, ацетон, 1,2-пропандіол, n- алкілпіролідони (наприклад, серію Agsolex), олію на нафтовій основі (наприклад, ароматичну 200) або мінеральну олію (наприклад, парафінову олію). В деяких випадках нематицидна композиція додатково включає інший пестицид (наприклад, нематицид, інсектицид або фунгіцид), такий як авермектин (наприклад, абамектин, івермектин), мілбеміцин, флуенсульфон, хлотіанідин, тіаметоксан, імідаклоприд, тіодикарб, алдикарб, оксаміл, фенаміфос, фостіазат, метам натрію, етридіазол, пента-хлор-нітробензен (PCNB), флутоланіл, металаксил, мефоноксам і фосетил-ал. Корисні фунгіциди включають, але не обмежуються перерахованим, силтіофам, флудиоксоніл, міклобутаніл, азоксистробін, трифлоксистробін, хлороталоніл, пропіконазол, тебуконазол і піраклостробін. Композиція також може включати гербіциди (наприклад, трифлоксисульфурон, гліфосат, галосульфурон) та інші хімічні речовини для контролю захворювання (наприклад, хітозан); нематода інфікує рослини, і нематицидна композиція застосовується в грунті або до рослин; нематицидна композиція застосовується в грунті перед посадкою; нематицидна композиція застосовується в грунті після посадки; нематицидна композиція застосовується в грунті з використанням системи краплинного зрошування; нематицидна композиція застосовується в грунті з використанням дренажної системи; нематицидна композиція застосовується до коренів рослини; нематицидна композиція застосовується до насіння; нематицидна композиція застосовується до листової системи рослини; нематода інфікує хребетну тварину; нематицидну композицію вводять птахові або ссавцеві, що не є людиною; нематицидну композицію вводять людині; нематицидну композицію розробляють як розчин для введення тварині, що не є людиною; нематицидну композицію розробляють у вигляді препарату, що приймається перорально; і нематицидну композицію розробляють у вигляді препарату, що ін'єктується. Описані тут способи особливо цінні для контролю нематод, що атакують корені відповідних сільськогосподарських культур, декоративних культур і дерноутворюючих культур. Відповідні сільськогосподарські культури можуть бути представлені, наприклад, соєвими бобами, бавовною, кукурудзою, тютюном, пшеницею, полуницею, томатами, бананами, цукровим буряком, цукровою тростиною, картоплею або цитрусовими. Також описані нематицидні корми для хребетної тварини, яка не є людиною, що включають: (a) корм; і (б) нематицидну композицію, включаючи описану тут нематицидну композицію. В деяких випадках корм вибраний з групи, що складається із: сої, пшениці, кукурудзи, сорго, проса, люцерни, конюшини та жита. Також описані корми, які використали як добавку для включення однієї або більше описаних тут сполук. Нематицидний корм для хребетної тварини, що не є людиною, може включати: (а) тваринний корм; і(б) ефективну кількість нематицидної сполуки або сумішей сполук, що мають будь-яку із представлених тут формул, наприклад, що має одну з наступних формул: де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6, R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену; 11 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R7, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S; де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3, OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN, C(H)O; R6, R8 і R9 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br, CH3, OCF3; E є O або S; де R1 і R5 незалежно вибрані із водню, CH3, F, Cl, Br, CF3 і OCF3; R2 і R4 незалежно вибрані із водню, F, Cl, Br і CF3; R3 вибране із водню, CH3, CF3, F, Cl, Br, OCF3, OCH3, CN і C(H)O; R6-R13 незалежно вибрані із водню, CH3, алкілу, циклоалкілу, гетероциклу і галогену. Корм можуть вибирати з групи, що складається із: сої, пшениці, кукурудзи, сорго, проса, люцерни, конюшини та жита. У контексті даного винаходу агент з "протигельмінтною або антигельмінтною, або протиглистовою активністю" є агентом, який при тестуванні має вимірювану активність в загибелі нематод або призводить до зниження фертильності або стерильності нематод, що призводить до нечисленного життєздатного або відсутнього потомства, або порушує здатність нематоди інфікувати або розмножуватися в її хазяїнові, або порушує ріст або розвиток нематоди. Агент також може володіти або заміщати властивості несприйнятності нематод. У аналізі агент комбінують з нематодами, наприклад, в лунці планшета для мікротитрації, в рідині або твердому середовищі, або в ґрунті, що включає агент. Стадії нематод поміщають на середовище. Вимірюють час виживання, життєздатність потомства і/або пересування нематод. 12 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Агент з "протигельмінтною або антигельмінтною, або протиглистовою активністю" може, наприклад, знизити час виживання дорослих нематод порівняно з дорослими особинами цієї стадії, не підданими дії, наприклад, приблизно на 20 %, 40 %, 60 %, 80 % або більше. З іншого боку агент з "протигельмінтною або антигельмінтною, або протиглистовою активністю" може також викликати припинення реплікації, регенерації і/або породження життєздатного потомства нематод, наприклад, приблизно на 20 %, 40 %, 60 %, 80 % або більше. Ефект може спостерігатися негайно або в наступних поколіннях. Термін "гало" або "галоген" означає будь-який радикал фтору, хлору, брому або йоду. Термін "алкіл" в контексті цього винаходу, використовуваний самостійно або у складі іншої групи, означає радикали з прямим і розгалуженим ланцюгом до десяти атомів вуглецю. Звичайні алкільні групи C1–10 (посилання на, наприклад, алкіли C1-C6, включає C1, C2, C3, C4, C5, C6, C2-C4, C3-C6 і так далі) включають метилові, етилові, пропілові, ізопропілові, бутилові, вторинні бутилові, третинні бутилові, 3-пентилові, групи гексилів і октилові, які можуть бути, необов'язково, заміщені. Термін "алкеніл" в контексті цього винаходу, використовуваний самостійно або у складі іншої групи, означає радикал з прямим або розгалуженим ланцюгом з 2-10 атомів вуглецю, якщо не вказана інша довжина ланцюга, включаючи щонайменше один подвійний зв'язок між двома атомами вуглецю в ланцюзі. Типові групи алкенілів включають етеніл, 1-пропеніл, 2-пропеніл, 2метил-1-пропеніл, 1-бутеніл і 2-бутеніл. Термін "алкініл" в контексті цього винаходу означає радикал з прямим або розгалуженим ланцюгом з 2-10 атомів вуглецю, якщо довжина ланцюга не обмежена, при цьому існує щонайменше один потрійний зв'язок між двома атомами вуглецю в ланцюзі. Типові групи алкінілів включають етиніл, 1-пропініл, 1-метил-2-пропініл, 2-пропініл, 1-бутиніл і 2-бутиніл. Групи алкоксилів (наприклад, метокси і етокси) містять кисень, заміщений однією з алкільних груп С1-10, вказаних вище, яка також може бути, необов'язково, заміщена. Алкілтіо групи містять сірку, заміщену однією з алкільних груп С1-10, вказаних вище, яка також може бути, необов'язково, заміщена. Також включені сульфоксиди і сильфони таких алкілтіо груп. Аміногрупи включають NH2, - NHR15 і - NR15R16, при цьому R15 і R16 є алкільними або циклоалкільними групами C1-10, або R15 і R16 сполучені з N з утворенням кільцевої структури, такої як піперидин, або R15 і R16 сполучені з N та іншою групою з утворенням кільця, такого як піперазин. Алкільна група може бути, необов'язково, заміщена. Термін "арил" в контексті цього винаходу, використовуваний самостійно або у складі іншої групи, означає моноциклічні, біциклічні або трицикличні ароматичні групи, що містять від 6 до 14 (наприклад, 6 або 8) атомів вуглецю в кільці. Звичайні арильні групи включають арил С6-14, переважно - арил С6-10. Звичайні арильні групи С6-14 включають групи фенілу, нафтилу, фенантренілу, антраценілу, інденілу, азуленілу, біфенілу, бифеніленілу і фторфенілу. Циклоалкільні групи являються циклоалкілом С3-8. Звичайні циклоалкільні групи включають циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил і циклогептил. Термін "арилалкіл" в контексті цього винаходу означає будь-яку з представлених вище алкільних груп С1-10, заміщену будь-якою із вказаних вище арильних груп С6-14. Переважно арилалкільна група є бензилом, фенетилом або нафтилметилом. Переважно арилалкільні групи є арилC1алкілом і арилC2алкілом. Термін "арилалкеніл" в контексті цього винаходу означає будь-яку з представлених вище алкенільних груп С2-10, заміщену будь-якою з вказаних вище арильних груп С 6-14. Термін "арилалкініл" в контексті цього винаходу означає будь-яку з представлених вище алкінільних груп С2-10, заміщену будь-якою з вказаних вище арильних груп С6-14. Термін "арилокси" в контексті цього винаходу означає кисень, заміщений однією з вказаних вище арильних груп С6-14, яка може бути, необов'язково, заміщена. Звичайні арилоксильні групи включають фенокси і 4-метилфенокси. Термін "арилалкокси" в контексті цього винаходу означає будь-яку з представлених вище алкоксильних груп С1-10, заміщену будь-якою з вказаних вище арильних груп, які можуть бути, необов'язково, заміщені. Типові арилалкоксильні групи включають бензилокси і фенетилокси. Типові галогеналкільні групи включають алкільні групи С 1-10, заміщені одним або більше атомів фтору, хлору, брому або йоду, наприклад, групи фторметилу, дифторметилу, трифторметилу, пентафторетилу, 1,1-дифторетилу, хлорметилу, хлорфторметилу і трихлорметилу. Групи ациламіно(ациламідо) включають будь-який ацил С1-6(алканоїл), приєднаний до амінного азоту, наприклад, ацетамідо, хлорацетамідо, пропіонамідо, бутаноїламідо, 13 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 пентаноїламідо і гексаноїламідо, а також арил-заміщенні групи ациламіно С1-6, наприклад, бензоїламідо і пентафторбензоїламідо. Звичайні групи ацилокси є будь-яким ацилом С1-6 (алканоїлом), приєднаним до оксигрупи (O-), наприклад, формілокси, ацетоксі, пропіоноїлокси, бутаноїлокси, пентаноїлокси і гексаноїлокси. Термін гетероцикл в контексті даного винаходу означає насичену або частково насичену 37-членну моноциклічну або 7-10-членну біциклічну кільцеву систему, яка складається із атомів вуглецю і від одного до чотирьох гетероатомів, які незалежно вибрані із групи, яка складається із O, N і S, при цьому гетероатоми азоту і сірки можуть бути, необов'язково, окислені, азот може бути, необов'язково, кватернізований, і включати будь-яку біциклічну групу, в якій будь-яке із вказаних вище гетероциклічних кілець поєднане з кільцем бензолу, і при цьому гетероциклічне кільце може бути заміщене атомом вуглецю або азоту, якщо отримувана сполука стійка. Звичайні насичені або частково насичені гетероцикличні групи включають групи тетрагідрофуранілу, піранілу, піперидинілу, піперазинілу, піролідинілу, імідазолідинілу, імідазолінілу, індолінілу, ізоіндолінілу, хінуклідинілу, морфолінілу, ізохроманілу, хроманілу, піразолідинілу, піразолінілу, тетроноїлу і тетрамоїлу. Термін "гетероарил", як це використовується в тексті цієї заявки, означає групи, що мають від 5 до 14 атомів в кільці; 6, 10 або 14 π електронів, розподілених циклічно; і які містять атоми вуглецю і 1, 2 або 3 гетероатоми кисню, азоту або сірки. Типові гетероарильні групи включають тиєніл (тіофеніл), бензо[b]тиєніл, нафто[2,3-b]тиєніл, тіантреніл, фурил (фураніл), піраніл, ізобензофураніл, хроменіл, ксантеніл, феноксантиїніл, піроліл, включаючи, без обмеження, 2H-піроліл, імідазоліл, піразоліл, піридил (піридиніл), включаючи, без обмеження, 2-піридил, 3-піридил і 4-піридил, піразиніл, піримідиніл, піридазиніл, індолізиніл, ізоіндоліл, 3H-індоліл, індоліл, індазоліл, пуриніл, 4H-хінолізиніл, ізохіноліл, хіноліл, фталзиніл, нафтиридиніл, хінозалініл, цинолініл, птеридиніл, карбазоліл, β-карболініл, фенантридиніл, акриндиніл, перимідиніл, фенантролініл, феназиніл, ізотіазоліл, фенотіазиніл, ізоксазоліл, фуразаніл, феноксазиніл, 1,4-дигідрохіноксалін-2,3-дион, 7-аміноізокумарин, піридо[1,2-α]піримідин-4-он, піразоло[1,5-α]піримідиніл, включаючи, без обмеження, піразоло[1,5-α]піримідин-3-іл, 1,2-бензоізоксазол-3-іл, бензімідазоліл, 2-оксиндоліл і 2оксобензимідазоліл. Якщо гетероарильна група містить атом азоту в кільці, такий атом азоту може бути представлений у формі N- оксиду, наприклад, піридил N- оксиду, піразиніл N- оксиду і піримідиніл N- оксиду. Термін "гетероарилокси" в контексті цього винаходу означає кисень, заміщений однією із вказаних вище гетероарильних груп, яка може бути, необов'язково, заміщена. Використовувані гетероарилоксильні групи включають піридилокси, піразинілокси, піролілокси, піразолілокси, імідазолілокси і тіофенілокси. Термін "гетероарилалкокси" в контексті цього винаходу означає будь-яку з представлених вище алкоксильних груп С1-10, заміщених будь-якою із вказаних вище гетероарильних груп, які можуть бути, необов'язково, заміщені. Переважний піролалкіл є пірол С1 алкілом. Переважні групи фуранілалкілу, тиєнілалкілу, оксазолілалкілу та ізоксазолілалкілу є фуранілC1алкілом, тиєнілC1алкілом, оксазолілC1алкілом та ізоксазолілC1алкілом, відповідно. Підсилювач проникнення зазвичай є агентом, що полегшує проникнення активних сполук згідно з винаходом. Співрозчинник (тобто латентний розчинник або непрямий розчинник) є агентом, який стає ефективним розчинником за присутності активного розчинника і який може покращувати властивості первинного (активного) розчинника. Композиція може бути отримана в концентрованій формі, яка включає незначну кількість води або її відсутність. Композиція може бути розведена водою або іншим розчинником перед використанням для обробки рослин, грунту або хребетних тварин. Деталі одного або більше варіантів втілення винаходу представлені в доданих кресленнях і описі нижче. Інші характеристики, об'єкти і переваги винаходу будуть очевидними з опису, креслень і формули винаходу. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС Винахід описує певні сполуки тетразолів із сильною нематицидною активністю широкого спектру дії. Нематицидні сполуки можуть доставлятися в рослини екзогенно, наприклад, за допомогою розпилювання. Такі сполуки можуть також застосовуватися на оболонку насіння. Сполуки можуть застосовуватися до рослин або довкілля рослин з необхідним нематодним контролем, або до тварин, або корму тварин за необхідності контролю паразитарних нематод. Композиції 14 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 можуть застосовуватися, наприклад, за допомогою систем дренажу або краплинного зрошування. При використанні в системах краплинного зрошування сполуки можуть застосовуватися безпосередньо на основу рослин або грунт, безпосередньо прилеглий до рослин. Композиція може бути застосована за допомогою існуючих іригаційних систем краплинного зрошування. Ця процедура особливо застосовна для бавовни, полуниці, томатів, картоплі, овочів і декоративних рослин. З іншого боку може використовуватися дренажна система, при цьому достатня кількість нематицидної композиції застосовується таким чином, що вона поступає до кореневої зони рослин. Спосіб дренажу може використовуватися для цілого ряду культур і дернових трав. Спосіб дренажу також може використовуватися і у тварин. Переважно нематицидні композиції повинні вводити перорально для забезпечення активності проти внутрішніх паразитарних нематод. Нематицидні композиції також можуть бути введені в деяких випадках шляхом ін'єкції тварині-хазяїну або місцевими способами. Концентрації нематицидної композиції повинно бути досить для контролю паразита без виникнення фітотоксичності, по суті, у відповідної рослини або небажаної токсичності у тваринихазяїна. Сполуки, описані в даному винаході, мають гарне терапевтичне вікно. Ми були здивовані, виявивши, що деякі аналоги тетразолів (наприклад, 2-феніл-5-(тіофен-2іл)-2H-тетразол, 5-(фуран-2-іл)-2-феніл-2H-тетразол, 2-(4-хлорфеніл)-5-(тіофен-2-іл)-2Hтетразол, 2-(4-хлорфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразол, 2-(4-хлор-2-метилфеніл)-5-(тіофен-2-іл)2H-тетразол, 2-(4-хлор-2-метилфеніл)-5-(фуран-2-іл)-2H-тетразол, 5-феніл-2-(тіофен-2-іл)-2Hтетразол, 2-(фуран-2-іл)-5-феніл-2H-тетразол, 5-(4-хлорфеніл)-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 5-(4хлорфеніл)-2-(фуран-2-іл)-2H-тетразол, 5-(4-хлор-2-метилфеніл)-2-(тіофен-2-іл)-2H-тетразол, 5(4-хлор-2-метилфеніл)-2-(фуран-2-іл)-2H-тетразол) мають нематицидну активність, порівнянну зі стандартними органофосфатами і карбаматами, проте характеризуються чудовою вибірковістю відносно нематод рослин і тварин. Таким чином, такі аналоги забезпечать наявність корисних сполук для контролю паразитарних нематод. Нематицидні агенти, описані в тексті цієї заявки, можуть використовуватися в комбінації з іншими пестицидними агентами. Другий агент може бути застосований, наприклад, одночасно або послідовно. Такі пестицидні агенти можуть включати, наприклад, авермектини для застосування у тварин. Вказані вище нематицидні композиції можуть використовуватися для лікування захворювання або ураження, спричинених нематодами наступних не обмежуючих типових родів: Ditylenchus, Tylenchorhynchus, Pratylenchus, Radopholus, Hirschmanniella, Nacobbus, Hoplolaimus, Scutellonema, Rotylenchus, Helicotylenchus, Rotylenchulus, Belonolaimus, Heterodera, інші цистотворні нематоди, Meloidogyne, Criconemoides, Hemicycliophora, Paratylenchus, Tylenchulus, Aphelenchoides, Bursaphelenchus, Rhadinaphelenchus, Longidorus, Xiphinema, Trichodorus, і Paratrichodorus, Dirofiliaria, Onchocerca, Brugia, Acanthocheilonema, Aelurostrongylus, Anchlostoma, Angiostrongylus, Ascaris, Bunostomum, Capillaria, Chabertia, Cooperia, Crenosoma, Dictyocaulus, Dioctophyme, Dipetalonema, Dracunculus, Enterobius, Filaroides, Haemonchus, Lagochilascaris, Loa, Manseonella, Muellerius, Necator, Nematodirus, Oesophagostomum, Ostertagia, Parafilaria, Parascaris, Physaloptera, Protostrongylus, Setaria, Spirocerca, Stephanogilaria, Strongyloides, Strongylus, Thelazia, Toxascaris, Toxocara, Trichinella, Trichostrongylus, Trichuris, Uncinaria і Wuchereria. Зокрема, переважними є нематоди, включаючи Dirofilaria, Onchocerca, Brugia, Acanthocheilonema, Dipetalonema, Loa, Mansonella, Parafilaria, Setaria, Stephanofilaria і Wucheria, Pratylenchus, Heterodera, Meloidogyne, Paratylenchus.Види, що є особливо переважними, представлені наступними: Ancylostoma caninum, Haemonchus contortus, Trichinella spiralis, Trichurs muris, Dirofilaria immitis, Dirofilaria tenuis, Dirofilaria repens, Dirofilari ursi, Ascaris suum, Toxocara canis, Toxocara cati, Strongyloides ratti, Parastrongyloides trichosuri, Heterodera glycines, Heterodera schachtii, Globodera pallida, Globodera rostochiensis, Meloidogyne javanica, Meloidogyne incognita, і Meloidogyne arenaria, Radopholus similis, Longidorus elongatus, Meloidogyne hapla, Belonolaimus longicaudatus, Hoplolaimus galeatus, Pratylenchus scribberi, Pratylenchus brachyurus, Pratylenchus zeae і Pratylenchus penetrans. Таким чином, представлені нижче приклади слід розглядати тільки як ілюстративні і необмежуючі частину винаходу, що залишилася, жодним чином. Усі процитовані тут публікації включені сюди у всій своїй повноті за допомогою посилання. ПРИКЛАДИ Приклад 1: Тестування декількох нематицидних сполук на M. incognita під час мініатюрного аналізу в теплиці. Огляд: Досліджувану сполуку розчиняють в розчині ацетону і додають до води. Пророщене насіння огірків поміщають у флакон із сухим піском, після чого негайно додають водно-хімічний розчин. 15 UA 114468 C2 5 10 15 20 25 Через двадцять чотири години додають яйця Meloidogyne incognita у флакони і через 10-12 днів корені оцінюють на предмет налипання нематод. Процедура: Насіння огірків пророщують впродовж 3 днів на вологих паперових рушниках. Відповідні проростки повинні мати довжину від 3 до 4 см з декількома латеральними корінцями, які щойно проросли. Маткові розчини хімічного препарату готують в суміші ацетону і Тритону Х100 (412 мг в 500 мл) до фінальної концентрації 5 мг/мл. Матковий розчин хімічної речовини потім був доданий до 10 мл деіонізованої води плюс 0,015 % Тритон Х100 і ретельно перемішаний. Цього вистачає для тестування кожного стану в трьох повторностях. Десять мл сухого піску вносять в кожен флакон. На даний момент розчинність хімічного препарату візуально визначають і записують в показниках проміле (великий осад) або непрозорості (дрібнодисперсний осад). Паростки висаджують шляхом нахилу флакона і розташування паростків у правильній орієнтації, так, щоб сім'ядолі розташовувалися трохи вище за пісок, і потім зворотного нахилу для покриття корінців піском. У кожен флакон додають 3,3 мл суміші води/хімічної речовини, і флакони поміщають в штативи в умови флуоресцентного освітлення. Через два дні після посадки флакони інокулюють шляхом внесення 500 червоподібних яєць M. incognita в кожен флакон в 50 мкл деіонізованої або джерельної води. Потім флакони знаходяться під флуоресцентними лампами при кімнатній температурі навколишнього середовища, і в них вносять 1 мл деіонізованої води, при необхідності, зазвичай двічі впродовж тривалості тесту. Збір рослин огірків роблять через 10-12 днів після інокуляції промиванням піску з коренів. Показник кореневих бульб і візуальної фітотоксичності визначають з використанням наступної шкали: шкала кореневих бульб (Гал: % корневої маси з галами): 0=0-5 %, 1=6-20 %, 2=21-50 % і 3=51-100 %. Середній показник галів в трьох повторностях потім розраховують таким чином: зелений = 0,00-0,33 (відсутність галів); жовтий = 0,67-1,33 (незначне утворення галів); помаранчевий = 1,67-2,33 (помірне утворення галлів); червоний = 2,67-3,00 (велике утворення галів). Шкала візуальної фітотоксичності представлена наступним (візуальна токсичність; візуальне зниження кореневої маси порівняно з контролем): rs1 = незначна зупинка росту; rs2 = помірна зупинка росту; rs3 = сильна зупинка росту. Таблиця 1А: Сильні нематицидні аналоги тетразолу як приклади заміни, сумісні з високою активністю Назва Аналог Показник галів 8/1 проміле S Cl N 1 а N b 0 /0,67 N N S N 2 a N N O Cl N 3 b 0,33 /0,67 N c d 0 /1,33 N N N 4 0,33/1,33 5 0,00/2,33 30 16 UA 114468 C2 Назва Аналог Показник галів 8/1 проміле 6 0,00/1,33 7 0,33/1,67 Оксаміл (1 проміле) 1,33 , 1,33 , 0,67 , 1,67 a b c d *Дані з однаковими буквами узяті з одного і того ж тесту. 5 10 Цілий ряд одинарних або подвійних замін в шестичленному ароматичному кільці тетразолів феніл-2-фуран і феніл-2-тіофен сумісні з високою нематицидної активністю, порівнянною з оксамілом (оксаміл є високотоксичною сполукою, класифікованою як хімічна речовина з токсичністю класу I Управлінням охорони навколишнього середовища США). Приклади переважних одинарних замін включають, але не обмежуються перерахованим, галогени, CH 3, CF3, OCF3 і OCH3, зокрема, в пара-положенні (положенні 4) фенільного кільця. Фенільне кільце також може мати декілька замін відповідно до високої нематицидної активності. Система нумерації кільця представлена ниже. 2 3 S,O 4 N 1 1 N N 15 20 25 30 35 N Приклад 2: Загальні протоколи випробувань в теплицях Посадка і ріст соєвих бобів: Насіння соєвих бобів высівають в 100 % пісок у квадратних пластикових горщиках розміром два дюйми. Хімічну обробку здійснюють на стадії появи перших трьох листків соєвих бобів через приблизно 10-12 днів після посадки. Через щонайменше чотири години після хімічної обробки вносять яйця цистотворних нематод соєвих бобів (SCN) і через 28 днів після інокуляції яєць роблять оцінку. Посадка і ріст огірків Насіння огірків висівають у суміш піску і грунту в квадратних пластикових горщиках розміром два дюйми. Після повного відкриття сім'ядоль і відразу ж після появи першого листка, зазвичай через 7 днів після посадки, здійснюють обробку хімічним препаратом на 7 день. Через один тиждень здійснюють обробку хімічним препаратом рослини для дня 0. Для кожного застосування використовують окремі рослини. На даний момент рослини зазвичай знаходяться на стадії 1-2 листків. Через щонайменше чотири години після обробки хімічним препаратом в горщики інокулюють яйця бульбочкових нематод (RKN). Рослини оцінюють на предмет утворення галів через 14 днів після інокуляції яєць. Розробка хімічної сполуки і застосування Один міліграм хімічного препарату на чотири горщики дорівнює одному кілограму хімічного препарату на гектар. У стандартному тесті проводять чотири повторності. Для показників вище 2 кг/га необхідну кількість хімічного препарату зважують в 30 мл флаконі (наприклад: показник 8 кг/га = 8 мг хімічного препарату в 30 мл флаконі). Хімічний препарат розчиняють в 2 мл відповідного розчинника, зазвичай ацетону. Для показників нижче 2 кг/га 2 міліграми хімічного препарату зважують у флаконі і розчиняють в 2 мл розчинника. Відповідну кількість концентрату хімічного препарату потім вносять піпеткою в окремий флакон 30 мл, після чого додають розчинник для доведення об'єму до 2 мл (наприклад, 0,5 кг/га = 0,5 мл концентрату +1,5 мл розчинника). Кожен розчинений концентрат потім доводять до загального об'єму 20 мілілітрів з 17 UA 114468 C2 5 10 15 використанням розчину сурфактанту 0,05 % Тритону Х 100. Хімічний препарат і застосування до нематод Горщики для обробки мають бути вологими, але не насиченими. У кожен з чотирьох горщиків вносять піпеткою п'ять мілілітрів відповідного розчину хімічного препарату на поверхневе середовище, уникаючи контакту з основою рослини. Безпосередньо після застосування хімічного препарату, з використанням насадки для аерозольного зрошування, поверхню горщика змочують достатнім чином для насичення горщика водою за присутності хімічного препарату. Обробка хімічним препаратом завершується вранці. Яйця нематод, SCN або RKN, додають в дистильовану воду для створення концентрації 1000 червоподібних яєць на літр води. Через щонайменше чотири години після хімічної обробки (день тестування 0) або через 1 тиждень (тривалість тестування 7 днів), яйця вносять в оброблені горщики і в горщики з необробленими контрольними рослинами. На поверхні горщика роблять невелике заглиблення приблизно 1 см в глибину. Один мілілітр рідини з яйцями нематод вносять піпеткою в заглиблення. Безпосередньо після цього заглиблення обережно присипають. Зволоження досліджуваних рослин потім обмежене тільки водою, необхідною для запобігання в'яненню впродовж 24 годин. Через 24 години обмеженого зволоження проводять звичайне суб-іригаційне підживлення водою впродовж тривалості тесту. Таблиця 2А: Аналіз ґрунту з теплиці RKN з рослинами огірків Назва Аналог Показник на 7 день 0,25/0,1 кг/га* S Cl N 1 92 %/89 % N N N S N 2 53 %/47 % N N N Фенаміфос 94 %/80 % *Дані показують відсоток контролю (тобто зниження показника галів) щодо контрольної неодруженої марної обробки. Дані с однаковими буквами взяті із одного і того ж тесту. Таблиця 2В: Аналіз ґрунту з теплиці SCN з рослинами соєвих бобів Назва Аналог Показник день 0 0,25 кг/га* S Cl N 1 24 % N N N S 2 N 52 % N N N 20 18 UA 114468 C2 Назва Аналог Показник день 0 0,25 кг/га* O Cl N 3 44 % N N N ОксамілФенаміфос 75 % a 90 % *Дані показують відсоток контролю (тобто зниження показника цист) відносно контрольної марної обробки. Дані з однаковими буквами взяті з одного і того ж тесту. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Певні оксазоли, оксадіазоли і тіадіазоли є високоефективними нематицидами у біоактивному ґрунті з активністю, порівнянною з фенаміфосом та оксамілом. Приклад 3: Протоколи дослідження Belonalaimus longicaudatus (жаляча нематода) Популяції жалячих нематод (Belonolaimus longicaudatus) утримують на августиновій траві в ґрунті в горщиках 15 см. На початок дослідження дерен видаляють з горщиків, і грунт, що містить яйця нематод, ювенільні і дорослі форми, розділяють між горщиками, вносячи в кожен 3 горщик об'єм 125 см . Сполуки для випробувань розчиняють в 3 мл ацетону з використанням 3, 6 або 15 мг для досягнення показників для еквівалентної площі поверхні 2, 4 або 10 кг/га, відповідно. 3 мл маткового розчину в ацетоні додають в 30 мл води, і 5 мл цього розчину використовують для дренажу кожної з 6 повторностей досліджуваних горщиків, приготованих, як це описано вище. Оброблені горщики, що містять нематоди, інкубують в лабораторії при кімнатній температурі приблизно 25ºC. Через 3 дні грунт з кожного горщика промивають в модифікованому апараті Бермана, що складається з екрану, що підтримує шар фільтрувального паперу, на який поміщають зразок грунту, і тарілки з водою. Потім зразки інкубують при 25ºC впродовж 24 годин для того, щоб живі нематоди мігрували через папір і екран в резервуар з водою для подальшого збору для підрахунку під світловим мікроскопом. Нематоди, які були вбиті або імобілізовані досліджуваними сполуками, не здатні мігрувати в резервуар. Приклад 4: Протоколи дослідження C. elegans і H. contortus C. elegans: Різні сполуки були тестовані на предмет нематицидної активності відносно C. elegans з використанням контактних аналізів в лунках. Аналізи проводили відповідно до представленого нижче опису. Досліджувані сполуки були солюбілізовані в ДМСО при концентрації 10 мг/мл для створення маткових розчинів 100Х. Серія розведень була створена шляхом розведення маткового розчину ДМСО. Для аналізу кожної лунки 4 мкл відповідного розведення додають в лунку досліджуваного планшета. 400 мкл аліквоти бактерійного маткового розчину (у буфері М9 з ампіциліном) додають в кожну лунку досліджуваного планшета. Вносять нематоду і досліджуваний планшет поміщають на ротаційний шейкер з інкубацією при 20 °C. Нематоди досліджують і роблять підрахунок після 24 ч, 48 ч і 72 ч. Нематоди L1, використовувані в аналізі, отримують вирощуванням яєць на чашці без шару бактерійного середовища. Яйця збирають і фіксують на стадії L1. Така популяція на стадії L1 потім використовується для створення банку для експериментів. У кожну лунку для аналізу вводять 25 мкл аліквот нематод. H. contortus: Аналіз проводили по суті відповідно до опису, представленого в Hubert J, Kerboeuf D. A new method for culture of larvae used in diagnosis of ruminant gastrointestinal strongylosis: comparison with fecal cultures. Can J Comp Med. 1984 48(1):63-71. Яйця H. contortus були надані Myers Parasitology (Magnolia, KY). Досліджувані сполуки були солюбілізовані в ДМСО для створення маткових розчинів 100Х. 2 мкл сполуки при різних концентраціях з подальшим додаванням 200 мкл розігрітого агару були змішані в лунках. Приблизно 50 яєць було поміщено в лунку та інкубовано впродовж 24 годин. Після цього періоду >50 % яєць були вилуплені в контролях ДМСО. Через 24 ч 100 мкл поживного середовища (сольовий розчин Ерла, 1 % дріжджовий екстракт, 0,9 % фізиологічний розчин і натрію бікарбонат для приведення до рН 7), що містить сполуку, було додано для живлення личинок. Через 48 ч у поживному середовищі (всього 72 години) лунки були оцінені на предмет вилуплення з яєць і переміщення личинок. 19 UA 114468 C2 Таблиця 4А: Дослідження C. elegans в лунках Назва Аналог EC50 проміле 1/2/3 дні S Cl N 1 0,8/0,8/0,9 N N N S N 2 >50/0,8/0,8 N N N O Cl N 3 0,8/0,8/0,8 N N N Таблиця 4В: Аналіз розвитку личинок H. contortus Назва Аналог EC50 в проміле через 72 годин S Cl N 1