Біологічно активний засіб муміє та спосіб його одержання

1 Спосіб одержання водорозчинного засобу муміє, згідно з яким сировину подрібнюють, екстрагують її дистильованою водою при 40-50°С, фільтрують, відокремлюють екстракт шляхом проведення двостадійного випаровування, при якому верхній край ємності, що співпадає за рівнем з верхнім шаром екстракту, нагрівають до 70-80°С, підігрівають екстракт до 55-60°С при підвищеному тиску, видавлюють підігріту масу безперервним потоком через круглий отвір, подають її на валки для формування безперервної стрічки, таблетують, який відрізняється тим, що рівень екстракту в ємності для випаровування підтримують постійним за рахунок зібраного при випаровуванні конденсату 2 Спосіб згідно з п 1, який відрізняється тим, що контроль температури ведуть безперервно, а нагрівання верхнього шару екстракту ведуть дискретно в релейному режимі за результатами показників датчика температури 3 Спосіб згідно з п 1, який відрізняється тим, що вилученні при випаровуванні екстракту летючі фракції збирають шляхом конденсації в охолодженій ємності з можливістю їх використання для підтримання постійного рівня екстракту та як цільового продукту 4 Спосіб згідно з п 1, який відрізняється тим, що екстракт підігрівають до 55-60°С при надлишковому тиску в 6 атм 5 Спосіб згідно з п 1, який відрізняється тим, що перед таблетуванням проводять додаткову теплофізичну обробку висушеного засобу при температурі 20-25° С та надлишковому тиску в ЗО атм 6 Спосіб згідно з п 5, який відрізняється тим, що екструзію нагрітої маси засобу здійснюють через отвір круглої форми діаметром 5 мм 7 Спосіб згідно з п 5, який відрізняється тим, що при пропусканні нагрітої маси засобу через вальці формують стрічку товщиною 2 мм і шириною не менше 11 мм, а наступне таблетування проводять з дозуванням 0,2 г 8 Водорозчинний біологічно активний засіб муміє, одержаний згідно зі способом за п 1, який відрізняється тим, що містить не більше 0,3 мас % водонерозчинних домішок і має наступний склад в мас % бензоламінооцтова кислота 73,82 Група винаходів стосується лікарських препаратів та засобів які містять речовини або продукти реакції невідомої будови, зокрема, біологічно активного засобу мумійо, який має імуномоделюючі властивості, та може бути використаний в фармакології і медичній практиці ПОХІДНІ флавону та флавану низькомолекулярні пептиди та амінокислоти водонерозчинні домішки 9,53 2,50 не більше ніж 0,3 суміш 13 реперних органічних речовин невстановленого складу решта 9 Засіб згідно з п 8, який відрізняється тим, що суміш реперних органічних речовин містить від 1,0 до 1,5 % кожної з них 10 Засіб згідно з п 8, який відрізняється тим, що водонерозчинні домішки містять не більше ЗО % загальної золи, 0,01 % сульфатної золи та не менше 0,6 % оксикумаринів ( в перерахунку на 7окси-4-метилкумарин) 11 Засіб згідно з п 8, який відрізняється тим, що є хроматографічно стабільним CM О ю со со го ю для лікування захворювань широкого профілю ВІДОМІ біологічно активні засоби природного та синтетичного походження, наприклад, мумійо, який має імуномоделюючі властивості, описаний в слідуючих працях КФ Блінова та ІНШІ "ХІМІЧНІ дослідження природних продуктів мумійо, та препаратів із нього" - тези доповідей Всесоюзної наукової конференції "БІОЛОГІЧНО активні речовини природного та синтетичного походження" Ленінград, 1977, с 122, К Ф Блінова та М В Сировежко "Стероїдний склад природних продуктів мумійо" в книзі "Вивчення препаратів рослинного та синтетичного походження" - Томськ, 1978, с 134 135, Н В Сировежко та КФ Блінова "Ергостерин та його ПОХІДНІ" - тези доповідей Всесоюзної наукової конференції "Результати та перспективи робіт по пошуку нових лікарських засобів в Ленінградському ХІМІКОфармацевтичному інституті" -Ленінград, 1979, с 110 111 ХІМІЧНИЙ склад та імуномоделюючі властивості таких речовин дуже залежать від способу їх одержання, в тому числі і від його очищення від домішок, що не мають біологічної активності За прототип біологічно активного засобу мумійо прийнято засіб, що має імуномоделюючу властивість, приготовлений з органомінеральної сировини див працю - В Н Ісмаїлов "Про спосіб очищення та ХІМІЧНИЙ склад мумійо" - ДОПОВІДІ АН Узб РСР, 1969, № 4, с,48 49 Цей засіб є композицією ХІМІЧНИХ речовин невстановленого складу та структури, добре розчинний у воді, не розчинний у етиловому та інших спиртах, хлороформі має температуру плавлення 32,1 °С, питому вагу 1,1г/см3, містить водонерозчинні домішки, має у своєму складі бензоламінооцтову (гіпюрову) кислоту, речовини, які входять до складу вітаміну р, низькомолекулярні амінокислоти та пептиди Наведена сукупність основних ознак не дає, як в запропонованому засобі, достатньої чистоти продукту, в ньому багато домішок В цьому засобі недостатньо виявлені складові і не оптимізовано їхній КІЛЬКІСНИЙ підбір У вказаній вище праці викладений і спосіб приготування біологічно активного засобу мумійо, який включає змішування сировини з холодною водою при співвідношенні 1 3, витримку суміші при кімнатній температурі 2 3 доби з періодичним перемішуванням суміші, відділення рідкої фази структури мумійо від водорозчинного осаду шляхом фільтрації через тканину, наступне, упарювання рідкої фази на водяній бані при температурі 60 70°С при постійному перемішуванні суміші, до утворення тістовидної маси,і сушіння при температурі не вище 50°С Готовий засіб мумійо в порошкоподібній формі зберігають в закритих ємностях Цей спосіб складний та енергоємний (використовують постійне перемішування маси на протязі 2 - 3-х діб на стадіях витримки та випаровування) Крім того, спосіб дає неякісний засіб, оскільки для отримання пілюль в екстракт додають технологічні добавки, які знижують біологічну активність засобу мумійо Відомий спосіб отримання біологічно 53635 активного засобу мумійо з сировини, яка містить мумійо, див працю Ю Нуралієва та ін "До таємниці мумійо", видання 2-е, допрацьоване, Душамбе, видавництво "Іфрон", 1985, с 54 59 Цей спосіб частково усуває вказані недоліки і включає подрібнення сировини, заливку подрібненого дистильованою водою при співвідношенні 1 10, витримку суміші при температурі 40 50°С на протязі 6 годин, відокремлення рідкої фази екстракту від водонерозчинних домішок шляхом фільтрації, багаторазове послідуюче відстоювання екстракту з фільтруванням, випарювання при температурі 70 80°С, розлив в ємності з утворенням пласту, його сушіння до вологості 5%, подрібнення та упаковку На відміну від заявленого, цей спосіб не дозволяє отримати засіб мумійо високого ступеню очистки і якості, він довготривалий, а так як розчин слабоконцентрований (10%) - він "закисає' та гідролізується, що погіршує біологічну активність засобу мумійо Явище "закисання" підтверджене працею А А Алтимашева та ін - "Що ми знаємо про мумійо?", Москва, видання Комітету космонавтики ДТСААФ СРСР, 1989, с 44 47 За прототип способу приготування біологічно активного засобу мумійо прийнято патент РФ № 2001618, МПК А 61К 35/00, 1991р "Спосіб отримання екстракту мумійо" Спосіб включає подрібнення сировини, що вміщує мумійо, до розміру часток не більше 1мм, заливку його дистильованою водою у співвідношенні, ВІДПОВІДНО, від 1 4 до 1 5 при температурі 40 50°С, та екстрагування з нього водорозчинних складників, відокремлення водного екстракту та його двостадійне упарювання на водяній бані при температурі 70 80°С,з вилученням осаду після кожної стадії упарювання, та досягненням 10 12%-ноі концентрації мумійо в екстракті не першій стадії, та ЗО 40%-ноі - на другій, після чого упарений екстракт висушують при кімнатній температурі Сукупність основних ознак цього способу, на відміну від запропонованого не дає достатнього рівня очищення біологічно активного засобу мумійо від нерозчинних домішок, що знижує його біологічно активні властивості, оскільки відносно знижується концентрація біологічно активних компонентів Упарювання ведуть за умов, коли можливе "закисання" водного екстракту і пдролізація його компонентів, так як на кожній стадії упарювання весь обсяг екстракту підігрівають до температури 70 80°С При цьому, у всьому об'ємі упарюваного екстракту виникають турбулентні потоки, спрямовані вертикально вгору, які змушують зависати водорозчинні суспендовані дрібнодисперсні частки, які весь час знаходяться у завислому стані і гідролізуються На відміну від запропонованого способу, недоліком прототипу є і те, що після стадії висушування екстракту мумійо його пластичність така, що утруднює таблетування Цей спосіб не дає змогу отримати мумійо з високими органолептичними властивостями Вказані вище недоліки відсутні у запропонованому способі і в біологічно активному засобі мумійо, 53635 приготовленому запропонованим способом В основу винаходу поставлено задачу покращання споживчих якостей біологічно активного засобу мумійо шляхом приготування його більш чистим, з мінімальною КІЛЬКІСТЮ ДОМІШОК, з кращими лікувальними імуномоделюючими властивостями, шляхом підбору та визначення найбільш оптимальної КІЛЬКОСТІ складових та їх співвідношень в композиції засобу, шляхом властивій тільки запропонованій технології приготування, таблетування і застосування Задача вирішується тим, що в біологічно активному засобі мумійо, приготовленому у вигляді висушеного водного екстракту з мумійовміщуючої органо-мінеральної сировини, який має імуномоделюючі властивості, водорозчинний, нерозчинний у етиловому та інших спиртах, хлороформі, має температуру плавлення 32,1 °С, питому вагу 1,1г/см , містить водонерозчинні домішки, що не мають біологічної активності, бензоламінооцтову (ппурову) кислоту, речовини, які входять до складу вітаміну Р, низькомолекулярні (м < Ю.ОкДа) амінокислоти і пептиди, новими, відрізняючими від прототипу суттєвими ознаками є те, що біологічно активний засіб мумійо має вміст водонерозчинних органічних та мінеральних домішок не більше О.Змас %, - загальної золи не більше ЗОмас %, - сульфатної золи не більше 0,01 мас %, - оксикумаринів в КІЛЬКОСТІ не менше 0,6мас% в перерахунку на 7-окси-4-метилкумарин, та суху речовину, хроматографічно-стабільний Новими, відрізняючими від прототипу суттєвими ознаками є ще й те, що біологічно активний засіб мумійо вміщує суміш (композицію) З 16-ТИ реперних органічних речовин, включаючи бензоламінооцтову ппурову кислоту із структурною формулою ПОХІДНІ флавону із структурною формулою де R = Н, кверцетин, R = рамноглюкоза, рутин низькомолекулярні (М < Ю.ОкДа) амінокислоти і пептиди та 13 інших реперних органічних речовин невстановленого складу та структури з вмістом кожного з них в кількості від 1,0 до 1,5мас%, при цьому, вміст вище вказаних речовин в водорозчинній частині засобу складає, мас % - бензоламінооцтова (ппурова) кислота - до 73,82, - ПОХІДНІ флавану та флавону - до 9,53, - низькомолекулярні амінокислоти та пептиди - до 2,50, - суміш з Інших ІЗ реперних органічних речовин з вмістом кожної з них в КІЛЬКОСТІ від 1,0 до 1,5 -решта Задача вирішується і тим, що в способі приготування біологічно активного засобу мумійо з органо-мінеральної сировини, що містить мумійо, який включає подрібнення сировини до розміру часток не більше 1-го мм, екстрагування з неї водорозчинних компонентів, відділення водного екстракту та його двостадійне упарювання на водяній бані при температурі 70 80°С з вилученням осаду після кожної стадії, та досягненням 10 12%-ноі концентрації осаду в екстракті на першій стадії, та ЗО 40%-ноі - на другій, наступне висушування осаду та його таблетування, новими, відрізняючими від прототипу суттєвими ознаками є те, що упарювання упарювання ведуть шляхом нагрівання переважно тільки верхнього шару екстракту мумійо, температуру якого контролюють датчиком температури, а висушений осад біологічно активний засіб мумійо, перед таблетуванням піддають додатково теплофізичній обробці Новими відрізняючими від прототипу суттєвими ознаками цього способу є додатково слідуючі контроль температури ведуть безперервно, а нагрівання верхнього шару екстракту ведуть дискретно в релейному режимі по результатах показників датчика температури, нагрівання верхнього шару екстракту здійснюють шляхом нагрівання верхнього краю ємності для упарювання, співпадаючого по рівню з верхнім шаром екстракту, по мірі упарювання екстракту його рівень в ємності для упарювання підтримують постійним, вилучені при упарюванні екстракту летючі фракції збирають шляхом конденсації в охолодженій ємності з можливістю їхнього наступного використання в якості цільового продукту, додаткову теплофізичну обробку висушеного засобу перед таблетуванням ведуть шляхом нагрівання при надлишковому тиску з наступною екструзією підігрітої висушеної маси через отвір стандартної форми та розміру, подачею й на вальцювання і формування стрічки з наступним таблетуванням, нагрівання при додатковій теплофізичній обробці ведуть при температурі 55 60°С, при надлишковому тиску батм , нагрівання при додатковій теплофізичній обробці ведуть при температурі 20 25°С при надлишковому тиску ЗОатм, екструзію нагрітої маси засобу мумійо здійснюють через отвір круглої форми діаметром 5мм, при пропусканні нагрітої маси засобу мумійо через вальці формують стрічку товщиною 2мм і шириною не менше 11мм, а наступне таблетування ведуть з дозуванням 0,2г Задача вирішується і тим, що в способі застосування біологічно активного засобу мумійо, новими, відрізняючими від прототипу суттєвими ознаками є те, що його вводять в організм за 10 15 хвилин до вживання їжі у дозі 0,2 0,4 г 1 2 рази на добу на протязі 3 4-х тижнів для профілактики та лікування виразкових хвороб шлунку та 12-ти палої кишки, гастриту, бульбіту, холецистохоланпргепатиту, коліту, захворювань органів дихання запалювального характеру, пригнічених - імунітету та кровотворної функції, після зовнішнього або внутрішнього опромінення, пошкоджень кісток, кістково-гнійної інфекції, радикуліту, невралгії, невриту периферійних нервів, хронічної недостатності мозкового кровообігу, відновлення життєвого тонусу, відновлення загальної резинстентності організму, поліпшення процесів адаптації та підвищення опору організму до негативних факторів зовнішнього середовища, психічних та фізичних перевантажень, променевої хвороби, атеросклерозу, різного роду запалень та їх комбінацій Новими, відрізняючими від прототипу суттєвими ознаками є ще й те, що засіб мумійо вводять в організм перорально, орально, електрофоретично, фонфоретично та сублінгвально Запропонований винахід - біологічно активний засіб мумійо, спосіб його приготування та застосування, на противагу відомим прототипам, має меншу енергоємність - витрати теплової енергії на одиницю продукції в 2 3 рази менші за рахунок зменшення тривалості процесу і підвищення його ефективності БІОЛОГІЧНО активний засіб мумійо, приготовлений запропонованим способом, має СТІЙКІ - склад, та властивості біологічної активності, незалежно від регіону, звідки здобута мумійовміщуюча сировина Винахід пояснюється графіками на яких зображені Фіг 1 - хроматографічний спектр поглинання водного розчину сухого екстракту біологічно активного засобу мумійо з концентрацією 0,1мг/мл у діапазоні довжини хвиль ультрафіолетового випромінювання від 190нм до 800нм, Фіг 2, 3 - хроматографічні спектри, які визначають хроматографічну рухливість рідкої фази зразку, який досліджують 100%-ноі води і, ВІДПОВІДНО, 95% води + 5% метанолу, Фіг 4 - хроматографічний спектр біологічно активного засобу мумійо з застосуванням колонки, наповненої слабким катіоном - сорбентом Sphenosorb Phenil фірми Waters для визначення характеру катюнності органічних фрагментів зразка, який досліджується, Фіг 5 - крива, яка показує залежність розміру RT основного піку хроматограми зразка біологічно активного засобу мумійо від іонної сили розчину, Фіг 6 - криві, що показують залежність розділюючої здібності колонки {КІЛЬКІСТЬ ПІКІВ) та, ВІДПОВІДНО, величини RT основного піку від рН розчину, Фіг 7 - хроматограма водного розчину сухого екстракту біологічно активного засобу мумійо 1%ноі концентрації Час гідролізу ТПДр = 0 Фіг 8 - крива, що показує залежність складу основної речовини (за величиною RT основного піку на хроматограмах) від тривалості гідролізу водного розчину сухого екстракту біологічно активного засобу мумійо 1%-ноі концентрації, Фіг 9 та 10 - хроматографічні спектри за 8 53635 методом ВЕРХ 1%-ного водного розчину біологічно активного засобу мумійо на хроматографічній колонці Zorbax NH2, час гідролізу Тпдр і = 0 хвилин, та ТПДр2 = 7 діб, Фіг 11 та 12 - хроматографічні спектри 10%ного водного біологічно активного засобу мумійо при тих же умовах ТПдрі = 0 хвилин, та ТПДр2 = 7 Діб, Фіг 13 15 - хроматографічні спектри зразків біологічно активного засобу мумійо, приготовлених, ВІДПОВІДНО, 1,3 і 5 років тому, Фіг 16 18 - хроматографічні спектри зразку біологічно активного засобу мумійо з доданням суміші стандартних речовин бензойної кислоти та ппурової кислоти одночасно, те ж саме з доданням стандартної речовини бензойної кислоти, те ж саме з доданням стандартної речовини ппурової кислоти, Фіг 19 - діаграми складу електролітів (іони К + і Na+) в еритроцитах, Фіг 20 22 - спектри ультрафіолетового поглинання біологічно активного засобу мумійо при довжині хвиль 254нм та ЗЮнм, ВІДПОВІДНО Приклади виконання заявленого винаходу Отримання (приготування) біологічно активного засобу мумійо Приклад 1 Для отримання заявленого біологічно активного засобу мумійо брали вихідну мумійовміщуючу органо-мінеральну сировину Середньо-азіатського регіону, яка, окрім основного компоненту біологічно активного засобу мумійо, мала різні водонерозчинні домішки ґрунтового, рослинного та тваринного походження, в КІЛЬКОСТІ 10кг, подрібнювали до характерного розміру часток, не перевищуючого 1мм, потім завантажували в ВІДСТІЙНИК З мішалкою і заливали дистильованою водою в КІЛЬКОСТІ 40Л , тим самим виготовляли суміш в масовому співвідношенні твердої і рідкої фаз 1 4 Температура води складала 40 50°С Потім суміш переміщували на протязі 2-х годин при тій самій температурі і відстоювали на протязі 3-х годин При перемішуванні і відстоюванні відбувалося екстрагування водорозчинних компонентів біологічно активного засобу мумійо, а великі водонерозчинні частки домішок випадали в осад, в той час як дрібнодисперсні частки знаходились у розчині в суспендованому стані Між водним розчином і осадом, об'єм якого склав приблизно 60%, спостерігалася чітка межа Для попередження перемішування осаду і надосадного розчину екстракту біологічно активного засобу мумійо, екстракт, у вигляді надосадного розчину, злили за допомогою трубки, а осад вилучили Потім екстракт фільтрували через декілька шарів марлі для вилучення найбільш великих суспендованих часток водонерозчинної фракції і отримували фільтрат муміиовміщуючого екстракту 4 5%-ноі концентрації Цей водний екстракт мумійо піддавали двостадійному упарюванню на водяній бані Для цього фільтрат розташовували у ємності 30л і здійснювали підігрівання верхнього шару екстракту до температури 70 80°С шляхом нагрівання верхньої частини ємності для 53635 10 води, при тому, так, щоб він був нижче рівня води упарювання, співпадаючої по рівню з верхнім Після ПОВНОГО розчинення цього шматочка шаром екстракту Нагрів верхньої частини ємності визначали товщину утвореного на дні осаду здійснювали за допомогою електронагрівача, Приклад 6 розміщеного в верхній частині ємності Нагрівання БІОЛОГІЧНО активний засіб мумійо, який здійснювали дискретно, шляхом почергового приготували за прикладами 1 4 піддавали ЯКІСНІЙ вмикання та вимикання електронагрівача у перевірці на чистоту від нерозчинних домішок релейному режимі по висновках показань датчика шляхом розміщення шматочка висушеного температури верхньої частини упарюваного екстракту мумійо, що тестувалось, в екстракту Рівень упарюваного екстракту в пергаментному мішечку, який занурювали в ємності, при його упарюванні, підтримували дистильовану воду Після розчинення шматочка постійним за рахунок використання відомого перевіряли наявність осаду в мішечку В методу "крапельниці" Першу стадію упарювання результаті тестових перевірок контрольних вели на протязі 21 години до підвищення зразків, як вказано в прикладах 5 і 6, осад концентрації мумійо в екстракті до 10 12% В практично відсутній Збігання результатів результаті отримали близько 10л упареної тестування в прикладах 5 та 6 свідчило про екстрагованої суміші, в якій було 1,5л осаду, що надійність якісної оцінки чистоти засобу мумійо, та склало 15об% та 8,5л рідкого екстракту Після гарантувало його якість вилучення осаду екстракт піддали повторному В результаті тестових перевірок контрольних упарюванню при тих же умовах В результаті, зразків, як вказано в прикладах 5 і 6, осад після другої стадії упарювання, яку вели на протязі практично відсутній 120 годин, отримали 1,8л екстрагованої суміші, яка Отримані, згідно прикладів 1 4,та перевірені, мала 0,05л осаду, що складало приблизно Зоб %, і згідно прикладів 5 і 6, зразки висушеного екстракту самого екстракту, близько, 1,7л Другу стадію піддавали подальшій перевірці з метою упарювання контролювали по показнику визначення їх властивостей концентрації мумійо в екстракті і після п Аналіз складу та фізико-хімічних закінчення, упарений екстракт сметаноподібної властивостей консистенції зливали у деко, потім висушували при Приклад 7 кімнатній температурі до досягнення вологості 4% Дослідження зразків біологічно активного Приклад 2 засобу мумійо показало, що це тверда Здійснювали спосіб згідно до умов прикладу 1 смолоподібна маса у вигляді таблеток, що має Летючі фракції, вилучені при упарюванні специфічний запах, колір - від чорного до темноекстракту, збирали шляхом їх конденсації в коричневого, блискучу поверхню, добру охолодженій ємності і повторно упарювали, як розчинність у воді, практично нерозчинний в вказано в прикладі 11 Додатково отримали етиловому та інших спиртах, хлороформі, мас приблизно 0,2л мумійо, який потім висушили при температуру плавлення 32,1 °С і питому вагу кімнатній температурі до вологості 4% 1,1г/см3 Таблетки тривалий час зберігають свою Приклад З форму Висушений екстракт мумійо, отриманий згідно Приклад 8 прикладам 1,2, розміщували в автоклаві, де До Змл розчину А (з прикладу 11), піддавали додатковій теплофізичній обробці приготовленого для КІЛЬКІСНОГО визначення засобу шляхом нагрівання до температури 55 60°С за мумійо (приклади 1 4), додавали зразки засобу надмірного тиску батм Після цього нагріту масу мумійо, приготовлені за прикладами 5, 6, а потім мумійо піддавали екструзії крізь тарований отвір піддавали перевірці з метою визначення їх стандартної округлої форми діаметром 5мм, а властивостей З'являлось темно-зелене потім в безперервним потоком подавали на вальці зафарбування розчину, яке поступово переходило та формували стрічку товщиною 2мм та шириною в сине (фенольні сполуки) 11мм Потім стрічку піддавали таблетуванню за Розчин, який приготовлений для КІЛЬКІСНОГО допомогою пристрою для формування з визначення, розміщали у пробірці і розглядали в дозуванням 0,2 0,15г в таблеті Потім таблети ультрафіолетових променях при довжині хвилі пакували в конвалюти типу "сервак" по 10шт в 365нм Спостерігали яскраву блакитну упаковці та складували флуоресценцію ПОХІДНІ 7-оксикумаринів), що Приклад 4 підтверджувало достовірність та справжність При тих самих умовах, що й у прикладі З, біологічно активного засобу мумійо висушений продукт мумійо піддавали додатковій Приклад 9 теплофізичній обробці шляхом нагрівання до 2,5г (точна вага) попередньо розтертого температури 20 25°С при надмірному тиску зразку біологічно активного засобу мумійо, ЗОатм приготовленого за прикладами 1 4, висушували Отримали результат, аналогічний результатові при температурі 100 105°С на протязі 3-х годин у прикладі З Втрата в масі не перевищувала 15% Потім зразок Приклад 5 розмішували на зберігання над 16,5%-ним БІОЛОГІЧНО активний засіб мумійо, який розчином H2SO4 При терміні зберігання 23 доби приготували згідно прикладам 1 4, піддавали зразок набрав 30% вологи Це свідчить про те, що ЯКІСНІЙ перевірці на чистоту від нерозчинних біологічно активний засіб мумійо гігроскопічний домішок При цьому шматочок висушеного Приклад 10 екстракту мумійо приклеювали до внутрішньої Зразки з попереднього прикладу піддавали стінки мензурки в яку набрали дистильованої 11 53635 12 перевірці на сульфатну золу та наявність важких спектр показаний на фіг 1 металів Аналіз спектру на фіг 1 показує, що вказаний Вміст загальної золи складав до 30мас% у розчин біологічно активного засобу мумійо не має зразку з 1г (точна вага), а вміст сульфатної золи характерного максимуму поглинання не перевищував 0,01 мас % Найбільше поглинання знайдено в області 200нм Але, оскільки при 200нм практично всі Приклад 11 речовини володіють значним поглинанням, було 0,4г точна вага зразку біологічно активного прийнято рішення про те, щоб усі подальші засобу мумійо, приготовленого за одним з хроматографічні дослідження виконувати при прикладів 1 4, розміщували в конічну колбу більшій довжині хвиль області спектру Для цих ємністю ЮОмл та розчиняли в 5мл води цілей, шляхом компромісу, була вибрана довжина Поступово, порціями по 5мл, додавали до хвиль 220нм, при якій чутливість методу приготовленого розчину 80мл спирту 95%, суміш зменшилася тільки на 20% Всі наступні аналізи збовтували, відстоювали на протязі ЗО хвилин, заявленого біологічно активного засобу мумійо фільтрували крізь паперовий фільтр в мірну колбу виконані саме на цій довжині хвиль ємністю ЮОмл Конічну колбу з залишком ополоскували КІЛЬКІСТЮ В 15МЛ 25%-НОГО спирту, Приклад 13 фільтрували в ту ж мірну колбу крізь той же Брали зразок з попереднього прикладу і фільтр, доводили об'єм фільтрату тим же перевіряли хроматографічну рухливість, а також розчинником до ВІДМІТКИ та перемішували Таким ступінь розділення компонентів засобу мумійо на чином отримали розчин А хроматографічній колонці, модифікованої високопдрофобною сполукою Юмл розчину А переносили в мірну колбу ємністю 50мл, доводили об'єм розчину спиртом октадецилсилоном Використовували колонку Zor95% до ВІДМІТКИ, перемішували і вимірювали bax ODC octudecylsilone фірми Du Dont фірмова оптичну ЩІЛЬНІСТЬ отриманого розчину на серія колонок С18 Розміри колонки 0,46 х 25см спектрофотометрі при довжині хвиль 323нм в При використанні 100%-ноі води в якості кюветі з товщиною шару Юмм Для порівняльного рухливої фази отримали хроматограму, показану розчину використовували спирт 95% на фіг 2 її аналіз показує, що з колонки змивалася дуже незначна КІЛЬКІСТЬ речовини Це означає, що Паралельно вимірювали фактичну ЩІЛЬНІСТЬ основна КІЛЬКІСТЬ компонентів водного розчину розчину робочого стандартного зразка (РСЗ) 7засобу мумійо представляє собою недисоційовані окси-4-метилкумарину, як вказано в ТУ -6-09-07сполуки, що містять в собі гідрофобні фрагменти в 472-85 Для цього РСЗ розміщали в мірну колбу складі їх молекул, які не можуть бути зняті з ємністю ЮОмл, розняли у спирті 95%, доводили сильно гідрофобного сорбенту таким гідрофільним об'єм розчину тим же спиртом до ВІДМІТКИ і розчинником, як вода перемішували 1мл отриманого розчину переносили у мірну Приклад 14 колбу ємністю 50мл, доводили об'єм розчину тим Умови такі ж самі, як в попередньому прикладі, же спиртом до ВІДМІТКИ і перемішували однак, до рухливої фази додавали 5% метанолу Отриманий розчин використовували Отримали хроматограму, подану на фіг 3 Аналіз стриманої хроматограми показує, що додавання свіжоприготовленим Склад (х) суми оксикумаринів 5% метанолу призвело до повного зняття в мас %%-тах в дослідному зразку, в переліку на компонентів засобу мумійо з колонки Однак, 7-окси-4-мєтилкумарин та суху речовину, відрізняюча властивість цього типу колонки визначали по формулі виявилася дуже малою - виявлено всього 4 Діхт0х1х50х100x100x100 Д-іХГПоХІ компоненти Подальше збільшення складу ~ Дохт.,х10x50x100х(100- W) ~ Д о х т ^ Ю О - W ) метанолу з рухливій фазі, як і очікувалося, не Де, призвело до поліпшення відрізняючого ступеню Ді - оптична ЩІЛЬНІСТЬ розчину, що На підставі хроматограм, представлених на використовувався, фіг 1 3, можна зробити наступні важливі До - оптична ЩІЛЬНІСТЬ розчину робочого висновки стандартного зразка (РСЗ), 1) основна частина речовин, що входять до іти - маса препарату в грамах, біологічно активного засобу мумійо, є то - маса розчину стандартного зразка 7-оксислабодисоційованими, або повністю 4-мєтилкумарину в грамах, неіонізованими сполуками до складу яких входять W - втрата маси при висушуванні в %%-тах ліпофільні групи або фрагменти, Склад суми оксикумаринів в препаратів 2) колонки з гідрофобними сорбентами з переліку на 7-окси-4-метилкумарин та суху використанням водно-органічних рухливих фаз речовину, складало величину не менш, ніж непридатні для аналізу біологічно активного 0,6мас % засобу мумійо Приклад 12 Приклад 15 Брали зразок, отриманий так само, як в При тих же умовах, що і в прикладі 14, зразок прикладі 11, і виготовляли водний розчин сухого засобу мумійо хроматографували з використанням екстракту біологічно активного засобу мумійо з колонки, заповненої сорбентом, який є слабким концентрацією 0,1мг/мл Методом "ВЕРХ" знімали катюнітом - Sphenosorb Phenyl - фірми Waters В спектр його поглинання в діапазоні довжини хвиль якості рухливої фази використовували систему видимої частки спектру ультрафіолетового сантимолярний 0,01 М фосфатний буфер, рН 5,30, випромінювання від 190нм до 800нм Отриманий швидкість потоку 1 мл/хв , детекція на довжині 13 53635 14 хвилі 220нм Результати хроматографічного мумійо перевіряли з 0,01М-ним розчином КН2РО4 дослідження зображені на фіг 4 при різноманітних значеннях рН Результати Аналіз хроматограми на фіг 4 та хроматограм хроматографії подані в таблиці 2 та на фіг 6 (крива на фіг 1 3 показує що 1 та, ВІДПОВІДНО, крива 2) а) в складі засобу мумійо немає речовин катіонного характеру, які містять органічні Таблиця 2 фрагменти, здатні поглинати ультрафіолетове випромінювання на довжині хвилі 220нм, Величина RT основного Селективність б) зважаючи на сказане вище, катюніти не піку, хвилин (КІЛЬКІСТЬ виявлених РН мають застосування для вирішення задачі ПІКІВ) хроматографічного дослідження біологічно 4,55 7 11,00 активного засобу мумійо 4,81 17,00 8 Приклад 16 5,15 13 19,00 При тих же умовах, що й в попередньому 5,27 21,66 16 прикладі, хроматографічне досліджували засіб 5,97 10,00 10 мумійо з використанням колонки Zor Bax фірми Du Pont, заповненої слаболужним аніонітом сери ЫНг, Аналіз даних, поданих в табл 2 та на фіг 6, який містить на поверхні 3показує, що із збільшенням рН від 4,55 до 5,30 амінопропілтриетоксігрупи, які отримують шляхом відбувається значне збільшення селективності з взаємодії вільних силанольних груп на поверхні одночасним збільшенням значення RT основного селікагеля з 3-амінопропілтристоксісиланом за піку Подальше збільшення рН призводить до спеціальною технологією фірми Наявність вільних різкого зменшення селективності та значення RT аміногруп дозволяє модифікованому, таким чином, основного піку Крім того, аналіз хроматограми, силікагелю функціювати в якості слабого отриманної з використанням в якості рухливої анюнообмінника Аміногрупи протонюються в фази 0,01М-ного буферного розчину КН2РО4 з рН кислому середовищі і ступінь протонювання 5,30, показує, що за цих умов досягається пропорційна розміру рН рухливої фази Оскільки практично повне розрішення ПІКІВ на базовій лінії, ступінь утримання речовини на анюнообмінниках що є додатковим підтвердженням оптимального залежить від іонної сили розчину, а селективність вибору умов хроматографії (відрізняюча здатність) хроматографічної системи в) Додаткове дослідження на предмет - від величини рН, перевіряли вплив цих факторів визначення впливу таких органічних розчинників, на селективну здатність колонок Zor Bax NH2 з як метанол, ацетонітрил, тетрапдрофуран, на метою оптимізацм умов хроматографічного аналізу селективність однозначно показало, що введення біологічно активного засобу мумійо, який будь-якого з них навіть в мінімальній концентрації досліджується (до 5%) призводить до різкого погіршення а) Вплив іонної сили розчину на величину RT відрізнений ПІКІВ (Retention Time - час утримання піку) перевіряли Таким чином, оптимальними умовами для шляхом застосування буферних розчинів КН2РО4, високоефективної рідинної хроматографії Ph 5 ЗО різної іонної сили, а саме децимолярного заявленого біологічно активного засобу мумійо є (0,1 ОМ) полудецимолярного (0.05М) і слідуючі умови сантимолярного (0,01 М) при кімнатній - хроматографічна колонка Zorbax NH2 фірми температурі Du Pont, Результати досліджень подані в таблиці 1 та - рухлива фаза - сантимолярний (0,01 М) на фіг 5 фосфатний буфер КН2РО4, рН 5,30, - детекція - ультрафіолетовий детектор на Таблиця 1 довжині хвилі 220нм, - об'єм проби - Юмкл, RT, хв Молярнють розчину концентрація проби -10 мг/мл 11,0 0.10М Приклад 17 —— 13,0 0,05М Брали зразок, отриманий як в прикладі 1, й 21,66 0.01М готували водний розчин сухого екстракту біологічно активного засобу мумійо 1%-ноі Аналіз даних таблиці 1 та фіг 5 показує, що із концентрації Досліджували його зменшенням іонної сили розчину величина РТ хроматографічним методом ВЕРХ при збільшується Оскільки величина РТ основного оптимальних умовах, вказаних в прикладі 16, на піку порції, котра виходить з колонки останньою, хроматографі Hewlett Packard моделі 8452А з цілком прийнятна з точки зору тривалості періоду хроматографічною колонкою Zorbax NH2 фірми Du аналізу і, оскільки відрізняюча особливість ПІКІВ Pont, США, з діаметром колонки 0,46см і була цілком задоволеною, послідуючий етап довжиною колонки 25см, заповненої хроматографічного дослідження, зв'язаний з модифікованим силікагелем, який містить полярну визначенням впливу розміру рН на селективність амінопропільну групу, з розміром часток 7 мікрон, колонки, проводили сантимолярним (0,01 М) рухома фаза - сантимолярний (0,01 М) буферний розчином КН2РО4 в якості рухливої фази розчин КН2РО4, рН 5,30 ±, швидкість потоку б) Вплив рН на селективну здатність колонки 1 мл/хв , дєтекція в ультрафіолетовій зоні області (КІЛЬКІСТЬ ПІКІВ), а також на величину RT основного спектра на довжині хвилі 220нм, об'єм введеної піку на хроматограмі дослідного зразка засобу проби - Юмкл, концентрація введеної проби 15 53635 16 10мкг/мл SP4100 фірми Sptctra Physics, США Пробу готували до аналізу слідуючим чином Приклад 18 Точну вагу дослідного зразка розчиняли в Дослід, описаний в попередньому прикладі, тридистиляті за допомогою ультразвуку до було повторено 36 разів і його відтворюваність отримання концентрації 10мг/мл Розчин перевірено шляхом статистичної обробки фільтрували крізь мембранний фільтр з розміром отриманих даних Стримані слідуючі результати пор 0,4мкм Об'єм введеної в Інжектор проби статистичної обробки складав Юмкл Час гідролізу - ТГІДр = 0 хвилин середнє значення основного піку Отримали хроматограму, подану на фіг 7, бензопамінооцтова кислота RTi cp = 21,66хв , аналіз якої показав, що засіб мумійо має складний - варіанса (сігма у квадраті) - 4,57хв , хроматографічний спектр Однак, основна КІЛЬКІСТЬ - стандартне відхилення від середнього (сігма) речовини в складі дослідного зразка визначається -2,14хв. піком RTi початок при 24,52хв) який відповідає - стандартна помилка (SD) - 0,34, наявності в складі біологічно активного засобу - мінімальне значення RT основного піку мумійо бензоламінооцтової (гіпюрової) кислоти із складало RT-imm = 17,59хв, а його максимальне структурною формулою ЗНачеННЯ - RTimax = 26 73ХВ Розмах в значенні RT основного, піку обумовлено впливом рН, впливом іонної сили рухливої фази, а також впливом неминучої модифікації поверхні сорбенту при тривалому використанні колонок, особливо при розділенні такої складної суміші речовин як біологічно і дає м масовий вміст в КІЛЬКОСТІ - до 73,82мас %, активний засіб мумійо Чутливість методу Слідуючі по значності речовини в складі складала 0,5 0,7мкг в пробі, яка вміщувала біологічно активного засобу мумійо подані піками ЮОмкг засобу мумійо RT2 (початок піка при 19,87хв), який відповідає Приклад 19 наявності в складі При статистичній обробці хроматограм зразків - похідних флавану та флавону зі структурною заявленого засобу мумійо, приготовленого формулою заявленим способом, незмінне спостерігався один і той же їх характер, показаний на фіг 7 Характер цих хроматограм не залежав від умов вимірювання і регіону, звідки була доставлена мумійовміщуюча сировина Приклад 20 Перевіряли СТІЙКІСТЬ біологічно активного засобу мумійо в розбавленому водному розчині, що дозволило оптимізувати спосіб отримування QH 0 Ой засобу мумійо Для цієї мети готували спочатку де R =// Н, кверцетин, 1%-ний водний розчин висушеного екстракту R = рамноглюкоза, рутин і дає масовий вміст в мумійо, як описано в прикладі 17 Розчин КІЛЬКОСТІ - до 9,53мас %, втримували при кімнатній температурі на протязі RT3 (початок піку при 17,12хв ), який відповідає терміну часу, визначеного процесом гідролізу, і наявності в складі низькомолекулярних (М < рівного, ВІДПОВІДНО, 0 діб вихідний Ю.ОкДа) амінокислот та пептидів і дає їх масовий свіжовиготовлений розчину, 3 доби, 4 доби, 5, 6, вміст в КІЛЬКОСТІ - до 2,50мас %, та 7 діб Визначали хроматографічні спектри всіх - вміст рештиіЗ реперних органічних речовин розчинів по яких визначали вміст основної в складі біологічно активного засобу мумійо речовини в біологічно активному засобі мумійо за сумарно складає 14,15мас% Аналіз основним піком RTi на хроматограмі Результати хроматографічного розділення з підрахунком подані в таблиці 3 та на фіг 8, а хроматограми для площі кожного піку, сумарної площі всіх ПІКІВ та крайніх випадків (ТПдрі = 0д,б та ТПДр7 = 7Д,6) подані підрахунком процентного вмісту кожного піку вели на фігурах 9 та, ВІДПОВІДНО, 10 з застосуванням комп'ютерного інтегратора моделі Таблиця З №№ досліду п/п 1 2 3 4 5 6 Час гідролізу, Тпдр, діб 0 вихідний розчин 3 4 5 6 7 Вміст основної речовини (по основному піку RTi на Хроматограма хроматограмі), мас% 72 73 Фіг 9 68 67 66 48 6,2 Фіг 10 Аналізом даних таблиці З та Фіг 8, 9, 10 встановлено, що 1%-нІ водні розчини засобу мумійо гідролізуються практично повністю на протязі 7 діб Проте константа швидкості гідролізу 17 53635 18 нелінійна і на протязі перших 5 діб її величина зразка біологічно активного засобу мумійо, до достатньо мала, але в період від 5 до 7 діб різко нього додавали послідовно наступні стандартні зростає Це дає можливість проводити первинну речовини обробку мумійовміщуючої сировини та 1)бензойна + ппурова кислоти, здійснювати заявлений спосіб приготування 2) бензойну кислоту, біологічно активного засобу мумійо на протязі 3) ппурову кислоту, перших 3-х діб без помітного змінення в його для кожної такої суміші, а також для дослідного складі І, отже, без помітного змінення його зразка мумійо знімали хроматограми за однакових імуномодулюючкх властивостей умов Такі хроматограми для вказаних сумішей представлені на фіг 16, 17 та, ВІДПОВІДНО, 18 їхній Приклад 21 аналіз разом з базовою хроматограмою При тих же самих умовах, що й у прикладі 20, дослідного біологічно активного засобу мумійо готували водний розчин засобу мумійо 10%-ноі (без додатків) показує розщеплення основного піку концентрації та знімали хроматограми для тих же для двох перших сумішей і збільшення самих часових періодів Отримали дані, подані на інтенсивності основного піку для останньої суміші фіг 11 та 12, які показують, що 10%-ний водний Це вказує на те, що основний пік хроматограми розчин біологічно активного засобу мумійо стійкий дослідного зразка засобу мумійо забезпечений навіть по закінченні 7 діб а змінення в ЗМІСТІ наявністю в його складі бензоламіноцтової основної речовини за основним піком RTi на (ппурової) кислоти із структурною формулою, хроматограмах несуттєве і знаходяться в межах показаною в прикладі 17 помилки виміру Виявлення біологічної активності Приклад 22 Досліджували ПОСТІЙНІСТЬ складу біологічно Приклад 25 активного засобу мумійо та його СТІЙКІСТЬ В Виявляли підвищення (в порівнянні з залежності від терміну зберігання на складі прототипом) функціональної активності шляхом порівняльного аналізу хроматографічних макрофагів по їх можливості продуцюювати спектрів серій засобу мумійо, виготовлених 1, 3, та фактор некрозу пухлин (далі - ФНП) при стимуляції 5 років тому, для яких були отримані спектри, ліпополісахаридів (далі ЛПС) і мурамілдіпептидів подані на фіг 13 15 їх порівняльний аналіз по (далі - МДП) чотирьох основних складових (піки І - IV) дозволяє Макрофаги це клітини природньої однозначно стверджувати, що якісний склад цих резистентності організму, які здійснюють серій залишається незмінним антимікробну, цитокінсекретуючу та Виявлені різниці спектрів, які аналізували, антигенпрезентуючу функції, а також виявляють торкаються незначної зміни КІЛЬКІСНОГО цитостатичний і цитотоксичний вплив на пухлини співвідношення чотирьох основних складових (піки див працю Б Д Брондз "Т - лімфоцити та їх І-IV) рецептори в імунологічному розпізнаванні", М, Наука, 1987,460 с Приклад 23 ФНП здатен лізіювати деякі лінії Досліджували структуру компонентів, які трансформованих клітин, а також імунної ВІДПОВІДІ входять до складу БІОЛОГІЧНО активного засобу І модулювати дії інших ЦИТОКІНІВ-ДИВ працю С А мумійо Недоспасов, Р Л Турецька, А Н Шахов "Фактори З метою попереднього вивчення структури некрозу пухлин", підсумки науки та техніки, ВІНІТІ, компонентів, які входять в склад засобу мумійо, сер імунологія, 1988, 22 с 91 - 125 Двом групам досліджували хроматографічні спектри засобу мишей лінії BAL В/С на протязі 7 днів перорально мумійо за спеціально розробленим методом при вводили, ВІДПОВІДНО, відомий препарат мумійо і різноманітних довжинах хвиль ультрафіолетового приготовлений за прикладом 7 - заявлений поглинання, а саме 254нм, 280нм, та ЗЮнм біологічно активний засіб мумійо,в дозі 30мг/кг Вказані спектри подані, ВІДПОВІДНО, на фігурах кожного дня Контролем слугувала третя група 20 22 інтактних тварин Для кожного препарату (відомого їх аналіз показує, що до складу біологічно і заявленого) визначали його вплив на активного засобу мумійо входить по меншій мірі 4 відпрацювання макрофагами селезінки мишей речовини, що мають значне поглинання при лінії BAL В/С фактору некрозу пухлин по величині досліджених довжинах хвиль Це однозначно його (ФНП) активності для кожного з стимуляторів, свідчить про те, що вони містять ароматичні тобто для ЛПС і МДП, у порівнянні з контролем елементи в складі своїх молекул Дані по результатах п'яти експериментів Приклад 24 представлені у таблиці 4 Для уточнення складу і структури речовини, що дає основний пік на хроматограмі дослідного Таблиця 4 Група Контроль Прототип Заявлений біологічно активний засіб мумійо Індекс цитостатичного і цитотоксичного впливу на пухлини, М ± м ЛИС МДП 10,3 ±2,0 12,24 ±2,4 31,2 ±2,8 41,6 ±2,3 15,6 ±3,2 50,6 ± 4,4 53635 19 20 Різниця З контролем достовірна при Р < 0,05 Аналіз даних таблиці 4 показує, що заявлений біологічно активний засіб мумійо в обох випадках забезпечує (в порівнянні з прототипом) підвищення стимуляції функціональної активності макрофагів не менш, ніж на 25% Приклад 26 Визначали підвищення (у порівнянні з прототипом) фагоцитарної активності нейтрофілів периферичної крові морських свинок in vitro за методом А Штольцнера, див А Штольцнер Фагоцитоз В кн "Імунологічні методи" Під ред Г Фримеля - Медицина, 1987, с 378, З цією метою двом групам морських свинок на протязі ЗО діб перорально вводили, ВІДПОВІДНО, ВІДОМИЙ препарат мумійо (прототип) і приготовлений, згідно прикладу 17 - заявлений біологічно активний засіб мумійо в дозі 30мг/кг кожного дня Контролем слугувала третя група інтактних тварин Потім до пробірок з кров'ю тварин і антикоагулянтом додавали суспензію золотистого стафілококу (штам 209) з концентрацією 2 10 тіл/мм і термостували ЗОхв при 37°С, після чого визначали показники фагоцитозу а) фагоцитарний індекс ФІ - відсоток клітин, що вступили до фагоцитозу, від загальної КІЛЬКОСТІ, б) фагоцитарне число ФЧі - середня КІЛЬКІСТЬ бактерій, що знаходяться внутрішньоклітинне частка від ділення загальної КІЛЬКОСТІ поглинених бактерій на загальну КІЛЬКІСТЬ нейтрофілів, в) фагоцитарне число ФЧ 2 - загальна КІЛЬКІСТЬ бактерій, що знаходяться внутріклітинно, віднесене до КІЛЬКОСТІ нейтрофілів, що вступили до фагоцитозу Усі три показники підраховували на мазках, зроблених при ЗО та 90-хвилинній інкубації Заявлений біологічно активний засіб мумійо у порівнянні з прототипом забезпечує підвищення фагоцитарної активності нейтрофілів крові морських свинок на 5% Дані по результатах п'яти експериментів представлені в таблиці 5 Таблиця 5 Група Контроль Прототип Заявлений біологічно активний мумійо ФІі(ЗО) 100 ФЧі(ЗО) 14,2 ±0,3 14,9 ±0,4 100 15,6 ±0,2 100 засіб Показники фагоцитозу, % ФЧ2(30) ФІ2(90) 14,2 ±0,3 100 14,9 ±0,4 100 15,6 ±0,2 100 ФЧі(90) 12,5 ±0,3 13,0 ±0,2 ФЧ2(90) 12,5 ±0,3 13,0 ±0,2 13,7 ±0,4 13,7 ±0,4 Різниця З контролем достовірна при Р < 0,05 Приклад 27 Визначали підвищення впливу (у порівнянні з прототипом) заявленого препарату заявленого засобу мумійо на Т-клітинну ланку імунітету шляхом використання в якості тестсистеми реакції бласттрансформацм лімфоцитів на конканавалин А (Кон А) Суть методу полягає в тому, що під впливом Кон А здійснюється поліклональна проліферація Т-лімфоцитів, що дозволяє судити про рівень їх імунореактивності, згідно праці А М Чередєєв, Л В Ковальчук "КЛІТИННІ І молекулярні аспекти імунних процесів", підсумки науки та техніки, ВІНІТІ, Сер Імунологія, 1989, 19, с 1 240 Реакцію бласттрансформацп лімфоцитів на Кон А проводили за методом, описаним в праці Р Strombery, D N McMurrky, C A Browr, I Clur Lab lmmunol-1988 - 25, V2, p 89 - 95, Для цього мишам на протязі 7 днів перорально вводили препарати так само, як описано в прикладі 26 Дані по результатах п'яти експериментів представлені в таблиці 6 Таблиця 6 Група Індекс поліферацп, М +м Контроль Прототип Заявлений біологічно активний засіб мумійо 37,6 ±12,1 46,2 ±12,8 53,1 ± 12,9 Різниця З контролем достовірна при Р < 0,05 Аналіз даних таблиці 6 показує, що заявлений засіб мумійо забезпечує підвищення проліферації Т-лімфоцитів на 15% Приклад 28 Визначали підвищення впливу (в порівнянні з прототипом) заявленого препарату на В-клітинну ланку імунітету шляхом використання в якості тест-системи реакції бласттрансформацп лімфоцитів на ліпополісахарид (ЛПС Difco) ЛПС являється В-клітинним мітогеном, що викликає поліклональну проліферацію В-лімфоцитів селезінки мишей, яка, в свою чергу, визначається рівнем секреції і рецепції цитокинів ИЛ-1, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, див працю БД Бронз,"Т-лімфоцити та їх рецептори в імунологічному розпізнанні", М, Наука, 1987, 460 с Даний метод дозволяє посередньо судити і про рівень секреції, і про рецепцію лімфоцитів, що визначають проліферацію В-лімфоцитів Реакцію проліферації В-лімфоципв селезінки 21 53635 22 мишей на ЛПС проводили по методу D Metcaef, J Immuol, 1976, 116, р 635-638 Для цього мишам ПК-активність індекс Група на протязі 7 днів перорально вводили препарати ЦИТОТОКСИЧНОСТІ М-М так само, як описано в прикладі 26 Дані по Контроль 12,0 ± 3 4 результатах п'яти експериментів представлені в Прототип 15,3 ±0,8 таблиці 7 Заявлений біологічно 19,3 ±0,9 активний засіб мумійо Таблиця 7 Група Контроль Прототип Заявлений біологічно активний засіб мумійо Індекс проліферації, М± м 2,0 ±0,6 3,1 ±0,9 4,0 ±1,3 Різниця З контролем достовірна при Р < 0,05 Аналіз даних таблиці 7 показує, що заявлений біологічно активний засіб мумійо забезпечує підвищення проліферації Т-лімфоцитів на 29% Приклад 29 Визначили підвищення впливу (в порівнянні з прототипом) заявленого біологічно активного засобу мумійо на цитотоксичну активність природних кілерів (далі - ПК) мишей лінії BAL В/С Наряду з макрофагами, ПК є клітинами природної резинстентності організму, ілюмінуючими, інфіковані вірусами клітини, крім того, клітини з високим рівнем проліферації, а також пухлинні клітини Про це - в праці R В Негberman J Invest Dermatology, 1984, 83, № 1, р 137 140 Дію препарату на цитотоксичну активність ПК селезінки мишей визначали по методу S С Wright, BBoiravida, J Immunol , 1983, 130, p 2965 2974 Для цього трьом групам мишей на протязі 7 днів перорально вводили препарати, як описано в прикладі 26 Дані по результатах п'яти експериментів представлені в таблиці 8 Таблиця 8 Різниця З контролем достовірна при Р< 0,05 Аналіз даних таблиці 8 показує, що заявлене біологічно активний засіб мумійо, забезпечує підвищення активності ПК по індексу цитотоксичності більш ніж у 2 рази Приклад ЗО Перевіряли підвищення активності (в порівнянні з прототипом) мембраностабілізуючої дії заявленого засобу мумійо, приготовленого за прикладом 17, після введення тетрахлоретану Захисна дія препарату на КЛІТИННІ мембрани гепатоцитів щурів при модельній інтоксикації тетрахлорметаном визначали по методу, див "Державна фармакопея", М , 1990, т 2 , с 163 Важливішими біологічними показниками змін в гепатоцитах печінки, при враженні тетрахлорметаном являються порушення структури і функції плазматичних мембран гепатоцитів (синдром цитолізу) біохімічним маркером яких є підвищення активності аланінамінотрансферази (АлАТ) в сироватці крові, а також, порушення екскреції жовчі (біліарний синдром), який супроводжується підвищенням концентрації білірубіну в крові Введення біологічно активного засобу мумійо попереджує зростання активності АлАТ і знімає рівень білірубіну в крові при інтоксикації тетрахлорметаном, що характеризує мембраностабілізуючі ди заявленого засобу мумійо Дані по результатах п'яти експериментів представлені в таблиці 9 Таблиця 9 Показники, що вивчаються Концентрація біліруб в крові Приріст по Приріст по відношенню відношенню до мкмоль/л до інтактних % інтактних % 99,0 Активність А Л А Т Групи щурів мкмоль/л 1 Інтактна 2 Контрольна вводили тетрахлорметан 3 Дослідна вводили тетрахлорметан + відомий препарат мумійо-прототип 4 Дослідна вводили тетрахлорметан + заявлений біологічно активний засіб мумійо 2,10 ±0,05 4,69 ±0,11 136,4 219,0 ±32,0 121,2 2,61 ± 0,08 22,4 123,0 ±17,0 24,2 2,15 ±0,06 2,4 104,0 ±11,2 5,6 Різниця З контролем достовірна при Р < 0,05 Аналіз даних таблиці 9 показує, що заявлений біологічно активний засіб мумійо забезпечує підвищення мембраностабілізуючої ди гепатоцитів щурів по відновленню активності після введення 23 53635 24 тетрахлорметану по зниженню приросту АлАТ в АТФаз, деструкції ЛІПІДНОГО компоненту) Для 9,33 рази і по зниженню приросту концентрації оцінки мембраностабілізуючої ди заявленого білірубіну в крові - в 4,32 рази біологічно активного засобу мумійо і відомого препарату додержувалися умов прикладу ЗО, але Приклад 31 вводили препарат в дозі 500мг/кг маси тварини на Перевіряли підвищення (в порівнянні з протязі трьох тижнів в умовах модельної прототипом) мембраностабілізуючої дії заявленого свинцевої інтоксикації ацетатом свинцю У тварин засобу мумійо, приготовленого згідно прикладу 17, чотирьох вказаних вище груп, поряд з по його впливу на внутрішньоклітинне визначенням продуктів перекісного окислення розподілення електролітів в тканинах в умовах ЛІПІДІВ (далі по тексту - ПОЛ) , визначали, також, свинцевої інтоксикації ацетатом свинцю При вміст (концентрацію) електролітів в печінці, цьому виходили з того, що калій є основним еритроцитах і плазмі крові, а потім розраховували внутрішньоклітинним іоном, а натрій - основним K/Na - коефіцієнти ЗОВНІШНЬОКЛІТИННИМ Тому зниження співвідношення K/Na в КЛІТИНІ СВІДЧИТЬ про Дані по результатах п'яти експериментів порушення трансмембранного транспорту представлені в таблиці 10 Дані по вмісту електролітів внаслідок дестабілізації клітинної електролітів (ІОНІВ К+ І № + )в еритроцитах мембрани (зниження активності транспортних представлені, також, на фіг 19 25 53635 26 Таблиця 10 Групи щурів 1 Інтактна 2 Контрольна (вводили ацетат свинцю) 3 Дослідна (вводили ацетат свинцю + відомий препарат мумійо-прототип) 4 Дослідна (вводили ацетат свинцю + заявлений біологічно акт засіб мумійо) 5 Дослідна (вводили відомий препарат мумійо прототип) 6 Дослідна (вводили заявлений біологічно активний засіб мумійо) Вміст електролітів в еритроцитах моль/л Іони К+ Іони Na+ 38,0 ± 76,6 ± 69,3 ± 63,8 ± K/Na - коефіцієнти Еритроцити 2,02 1,09 Печінка 2,07 1,76 81,7 ± 34,3 ± 2,38 2,02 84,3 ± 37,0 ± 2,28 2,04 2,5 2,10 2,51 2,10 Різниця з контролем достовірна при Р < 0,05 Аналіз даних таблиці 10 показує, що в умовах експериментального підвищення активності ПОЛ і пошкодження клітинних мембран, заявлений біологічно активний засіб мумійо має мембраностабілізуючу дію Узагальнені результати аналізу даних, представлених в таблицях 4 10, зведені в таблицю 11 Таблиця 11 Імуномоделгоючі та регенераторні ефекти біологічно активних з