Цитокіноподібний поліпептид-10 ссавців

1. Експресійний вектор, що включає: (а) промотор транскрипції, (б) полінуклеотид, що кодує Zсуtо10 поліпептиди з послідовністю амінокислот, наведені в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 або SEQ ID NO: 26, або варіанти згаданих поліпептидів, які принаймні на 90 % ідентичні до цих поліпептидів, і (в) термінатор транскрипції, причому промотор, полінуклеотид та термінатор з'єднані операбельно. 2. Експресійний вектор за п.1, що додатково включає послідовність ДНК, що кодує афінне закінчення. 3. Експресійний вектор за п.2, в якому афінне закінчення є поліпептидом імуноглобуліну FС. 4. Культивована евкаріотна чи прокаріотна клітина, в яку введено експресійний вектор за п.1, при цьому ця клітина експресує поліпептид, кодований полінуклеотидом за п.1. 5. Застосування поліпептиду, що принаймні на 80% ідентичний поліпептиду, вибраному з SEQ ID 2 (19) 1 3 Проліферацію та диференціацію клітин багатоклітинних організмів регулюють гормони та поліпептидні фактори росту. Ці здатні до дифузії молекули дозволяють молекулам спілкуватися одна з одною і діяти спільно для утворення клітин та органів і для відновлення та регенерації пошкоджених тканин. Приклади гормонів та факторів росту охоплюють стероїдні гормони (наприклад, естроген, тестостерон), паратиреоїдні гормони, стимулюючі фолікули гормони, інтерлейкіни, похідний від тромбоцитів фактор росту (PDGF), епідермальний фактор росту (EGF), стимулюючий колонії гранулоцитів-макрофагів фактор (GM-CSF), еритропоетин (ЕРО) та кальцитонін. Гормони та фактори росту впливають на метаболізм клітин приєднанням до білків, .які можуть бути інтегральними мембранними білками, що сполучені з сигнальними шляхами в клітинах, як-то вторинною передавальною системою. Інші класи білків представляють розчинні молекули. Особливий інтерес представляють цитокіни, молекули яких викликають проліферацію та/або диференціацію клітин. Приклади цитокінів охоплюють еритропоетин (ЕРО), що стимулює розвиток червоних кров'яних клітин, охоплюють тромбопоетин (ТРО), що стимулює розвиток клітин лінії мегакаріоцитів, та стимулюючий колонії гранулоцитів фактор (G-CSF), що стимулює розвиток нейтрофілів. Ці цитокіни корисні при відновленні нормального рівня кров'яних клітин у страждаючих від анемії чи отримуючих хіміотерапевтичне лікування від раку пацієнтів. Продемонстрована in vivo активність цих цитокінів ілюструє величезний клінічний потенціал інших цитокінів, їх агоністів та антагоністів та необхідність у них. Винахід спрямовано на цю необхідність через створення нового поліпептиду і споріднених сполук, а також способів. Згідно з одним аспектом винаходу запропоновано виділений полінуклеотид, що кодує чотири-альфа-спіральний цитокін ссавців, позначений як Zcyto 10. Zcyto 10 людини охоплює послідовність зі 176 амінокислот з початковим Met, як показано в Послідовн. №№1 та 2. Можна думати, що амінокислотні залишки 1-24 є сигнальною послідовністю, а сформований поліпептид Zcyto 10 представлено амінокислотною послідовністю, що охоплює залишки з 25, лейцину, до 176, глутамінового амінокислотного залишку, що визначено також у Послідовн. №12 Згідно з іншим втіленням винаходу запропоновано послідовності Послідовн. №№3 та 4 Поліпептид Послідовн. №4 охоплює 151 амінокислотний залишок, причому амінокислотні залишки 1-24 складають сигнальну послідовність, а сформована послідовність охоплює залишки з 25, лейцину, до 151, глутамінового амінокислотного залишку, що визначено також Послідовн. №13. Інший активний варіант охоплює залишки з 33, цистеїну, до 176 з Послідовн. №2. Цей варіант визначено також Послідовн. №26. Мишачий Zcyto 10 також є поліпептидом, що охоплює 176 амінокислотних залишків, що визначено також Послідовн. №№18 та 19. Мишачий Zcyto 10 має сигнальну послідовність, що простя 86350 4 гається від амінокислотного залишку 1, метіоніну, включаючи амінокислотний залишок 24, гліцину, з Послідовн. №19. Тому сформований мишачий Zcyto 10 простягається від амінокислотного залишку 25, лейцину, до 176, лейцину, з Послідовн. №2. Інший активний варіант, можна думати, охоплює залишки з 33, цистеїну; до 176 з Послідовн. №19. Цей варіант визначено також Послідовн. №25. Згідно з додатковим втіленням винаходу поліпептид також включає афінне закінчення. Варіант мишачого Zcyto 10 визначено Послідовн. №№33 та. Цей варіант має у довжину 154 амінокислотних залишків і сигнальну послідовність, що простягається від амінокислотного залишку 1, метіоніну, включаючи амінокислотний залишок 24, гліцину, з Послідовн. №34. Тому 54, амінокислотний залишок лейцину, з Послідовн. №34. Інший активний варіант, можна думати, охоплює залишки з 33, цистеїну, до 176 з Послідовн. №19. Сформовану послідовність визначено також Послідовн. №35. Згідно з другим аспектом винаходу запропоновано експресійний вектор, що включає (а) промотор транскрипції, (б) сегмент ДНК, що кодує Zcyto 10, та (в) термінатор транскрипції, де промотор, сегмент ДНК та термінатор з'єднані операбельно. Згідно з третім аспектом винаходу запропоновано культивовану клітину евкаріота чи прокаріоту, в яку введено вищевказаний експресійний вектор, при цьому вказана клітина експресує кодований сегментом ДНК поліпептид. Згідно з подальшим аспектом винаходу запропоновано химерний поліпептид, що по суті складається з поєднаних пептидним зв'язком першої частини та другої частини. Перша частина химерного поліпептиду по суті складається з (а) показаного в Послідовн. №2 поліпептиду Zcyto 10, (б) алельних варіантів Послідовн. №№2, 4, 12, 13, 19, 20, 25, 26, 34 чи 35, та (в) поліпептидів білку, що принаймні на 90% ідентичні (а) чи (б). Друга частина химерного поліпептиду по суті складається з такого іншого поліпептиду, як афінне закінчення. Згідно з першим втіленням винаходу афінне закінчення є поліпептидом імуноглобуліну Fc. Згідно з винаходом запропоновано також експресійні вектори, що кодують химерні поліпептиди, та клітини-хазяї, трансфектовані для виробництва химерних поліпептидів. Згідно з додатковим аспектом винаходу запропоновано антитіло, яке специфічно зв'язує розглянутий вище поліпептид Zcyto 10, а також антіідіотипічне антитіло, яке нейтралізує антитіло до поліпептиду Zcyto 10. Згідно з іншим аспектом винаходу запропоновано фармацевтичну композицію, що містить очищений поліпептид Zcyto 10 у комбінації з фармацевтично прийнятним середовищем. Такі композиції можуть бути корисними для модуляції проліферації, диференціації клітин, або виробки цитокінів при попередженні чи лікуванні станів, що характеризуються некоректною проліферацією, диференціацією клітин, або виробкою цитокінів, що далі буде обговорено. Точніше, поліпептид 5 86350 6 Zcyto 10 може бути корисним при попередженні чи лянку, протеїн A, [Nillsson et al., EMBO J. 4: 1075 лікуванні автоімунних захворювань інгібуванням (1985), Nillsson et al., Methods Enzymol. 198: 3 клітинної імунної реакції. Автоімунні захворюван(1991), глутатіон-3-трансфераза, Smith and ня, що можуть піддаватися лікуванню Zcyto 10, Johnson, Gene, 67: 31 (1988), Glu-Glu афінне закінвключають IPDM, розсіяний склероз, ревматоїдний чення, Grussenmeyer et al., Proc.Natl.Acad.Sci. USA артрит тощо. Також поліпептиди згідно з винахо82: 7952-4 (1985)], субстанція Ρ, пептид Flag™, дом можуть бути корисними для інгібування росту [Hopp et al., Biotechnology 6: 1204-1210 (1988)], чи проліферації ракових клітин. стрептавідин-зв'язувапьний пептид чи інший антиПоліпептиди згідно з винаходом можуть також генний епітоп або зв'язувальний домен. Див. взастимулювати імунну систему для кращої боротьби галі [Ford et al., Protein Expression and Purification з мікробними чи вірусними інфекціями. Зокрема, 2: 95-107 (1991)]. ДНК, що кодують афінне закінZcyto 10 можна систематично застосовувати для чення доступні від комерційних поставників (напосилення виробки тромбоцитів особою. Більш приклад, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). того, поліпептиди Zcyto 10 згідно з винаходом мо"Алельний варіант" означає будь-яку з двох чи жуть бути корисними, для специфічного трахеальбільше альтернативних форм гена, що займають ного чи трахеобронхіального застосування, як-то однаковий хромосомний локус. Алельні варіації підтримка чи відновлення поранень трахеобронхівиникають в природі внаслідок мутацій і можуть ального епітелію чи клітин, що лежать в його оспризводити до фенотипічного поліморфізму в понові, регулювання вироблення слизу чи війчастої пуляціях. Мутації генів можуть бути мовчазними очистки від забруднень, або при лікуванні астми, (без змін в кодованому поліпептиді), або можуть бронхітів чи інших захворювань трахеобронхіалькодувати поліпептиди зі зміненою амінокислотною ного тракту. Вони можуть також посилювати загопослідовністю. "Алельний варіант" також викорисювання ран та допомагати регенерації уражених тано для позначення кодованого алельним варіантканин, що може бути особливо корисно при лікутом гена поліпептиду. ванні хвороб зубів. Крім того, поліпептиди Zcyto 10 "Аміно-термінальний" та "карбоксиможуть бути корисними при лікуванні таких уратермінальний" означає положення в поліпептиді. жень шкіри, як псоріаз, екзема та взагалі суха шкіКоли дозволяє контекст ці терміни використано з ра. посиланням на конкретну послідовність чи частину Згідно з додатковим аспектом винаходу заполіпептиду для визначення близькості чи відповіпропоновано пептид чи поліпептид, що має амінодності позицій. Наприклад, деяка послідовність, кислотну послідовність утворюючої епітопи частищо розташована в поліпептиді відносно посилальни поліпептиду Zcyto 10, що має описану вище ної послідовності карбокси-термінально, локалізоамінокислотну послідовність. Пептиди чи поліпепвана ближче до карбоксильного закінчення поситиди, що мають амінокислотну послідовність утволальної послідовності, але необов'язково на рюючої епітопи частини поліпептиду Zcyto 10 згідкарбоксильному закінченні повного поліпептиду. но з винаходом, включають частини таких "Пара комплемент/антикомплемент" означає поліпептидів з принаймні 9, краще принаймні 15, неідентичні угрупування, що в прийнятних умовах ще краще принаймні 30-50 амінокислот, хоча створюють нековалентно сполучену стабільну паутворюючі епітопи поліпептиди будь-якої довжини, ру. Наприклад, біотин та авідин (чи стрептпвідин) є аж до та включаючи повну амінокислоту послідовпрототипічними членами пари компленість описаного вище поліпептиду згідно з винахомент/антикомплемент. Інші приклади пар компледом, також включено до рамок винаходу. Заявлемент/антикомплемент включають пари рецепно також будь-який з цих поліпептидів, що тор/ліганд, антитіло/антиген (або гаптен чи епітоп), конденсований з молекулою іншого поліпептиду чи сенсовий/антисенсовий полінуклеотиди, тощо. носія. Такі варіанти епітопів включають без обмеКоли бажана наступна дисоціація пари комплеження Послідовн. №№25-32. Вироблені цими помент/антикомплемент, ця пара переважно має роджуючими епітопи частинами Zcyto 10 можуть спорідненість до зв'язування