Спосіб стерилізації експлантатів троянди ефіроолійної

Реферат: Спосіб стерилізації експлантатів троянди ефіроолійної включає відмивання пагонів від поверхневих забруднень, власне стерилізацію з використанням 70 % етилового спирту, відмивання від стерилізуючих розчинів. Пагони поточного року другого і третього порядків з 1-2 вузловими бруньками з рослини-донора у квітні-травні або серпні-вересні відмивають від поверхневих забруднень у мильному розчині, промивають під проточною водою 30 хв, потім стерилізують в етиловому спирті 60 с і переносять експлантати у сулему 0,1 % за експозиції 10 хв, після чого триразово відмивають стерильною dH2O по 10 хв та разово відмивають розчином стерильної dH2O з 2 мг/л лимонної кислоти протягом 10 хв. UA 107143 U (12) UA 107143 U UA 107143 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до галузі сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, а саме для отримання оздоровленого посадкового матеріалу. Відомий аналог (Haleh Mahmoudi Noodezh, Ahmad Moieni, Amin Baghizadeh In vitro propagation of the Damask rose (Rosa damascena Mill.) /In Vitro Cellular & Developmental BiologyPlant. -Vol. 48, 530-538 pp, 2012), який полягає у нарізанні пагонів по 10 см з чотирма бруньками. Їх відмиванні у розчині детергенту з водою і промиванні під проточною водою. Потім бруньки поміщали в 5,25 % розчин гіпохлориду натрію на 10 хв з подальшим відмиванням у стерильній дистильованій воді. Після чого їх перенесли в 70 % етиловий спирт на 30 с, а потім в 5,25 % гіпохлорид натрію з п'ятьма краплями детергенту на 30 хв. Після цього експлантати відмивали тричі в стерильній дистильованій воді. Для запобігання окислення поліфенолів, що виділяються із розрізу поверхні експлантатів, до середовища, на яке висаджували бруньки, додавали по 50 мг/л лимонної та аскорбінової кислоти. Недоліками аналога є те, що не передбачено відбір рослинного матеріалу, залежно від сезону та віку рослини-донора, що впливає на регенераційну здатність. Використання 5,25 % гіпохлориду натрію не дає можливість отримати високий коефіцієнт стерильних життєздатних експлантатів. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб стерилізації експлантатів троянди ефіроолійної для отримання високого коефіцієнта стерильних життєздатних експлантатів. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб стерилізації експлантатів троянди ефіроолійної, що включає відмивання пагонів від поверхневих забруднень, власне стерилізацію з використанням 70 % етилового спирту, відмивання від стерилізуючих розчинів, згідно з пропонованим рішенням пагони поточного року другого і третього порядків з 1-2 вузловими бруньками з рослини-донора у квітні-травні або серпні-вересні відмивають від поверхневих забруднень у мильному розчині, промивають під проточною водою 30 хв, потім стерилізують в етиловому спирті 60 с і переносять експлантати у сулему 0,1 % за експозиції 10 хв, після чого триразово відмивають стерильною dH2O по 10 хв та разово відмивають розчином стерильної dH2O з 2 мг/л лимонної кислоти протягом 10 хв. Пропонований спосіб стерилізації рослинного матеріалу передбачає використання пагонів поточного року другого і третього порядків з 1-2 вузловими бруньками зрізані з рослини-донора у квітні-травні або серпні-вересні. Для ефективного знешкодження екзогенної та ендогенної мікрофлори експлантати стерилізували в лабораторних умовах у два етапи: І - в нестерильних умовах та II - в умовах ламінарного боксу. На І - етапі пагони витримують у мильному розчині 15 хв, інтенсивно помішуючи. Після відмивають у проточній воді протягом 10 хв та переносять у посудину із стерильною dH2O. Ha II - етапі усі маніпуляції проводять у стерильному ламінарному боксі із стерильними розчинами та інструментами. У запропонованому способі стерилізації використовують стерилянти у такій послідовності: 70 %-вий розчин етанолу (С2Н5ОН) - 60 с, 0,1 %-вий розчину дихлориду ртуті (HgCl2) - 10 хв, триразове відмивання стерильною dH2O - по 10 хв та разове відмивання у розчині стерильної dH2O з 2 мг/л лимонної кислоти для запобігання окислення поліфенолів, що виділяються із розрізу поверхні експлантатів - 10 хв. Стерильні пагони розрізають на фрагменти стебла 1,5-2 см з однією брунькою. Технічним результатом є те, що вона дозволяє отримати 82 % стерильних та 75 % життєздатних експлантатів з мінімальною шкодою для рослинних тканин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 50 55 Спосіб стерилізації експлантатів троянди ефіроолійної, що включає відмивання пагонів від поверхневих забруднень, власне стерилізацію з використанням 70 % етилового спирту, відмивання від стерилізуючих розчинів, який відрізняється тим, що пагони поточного року другого і третього порядків з 1-2 вузловими бруньками з рослини-донора у квітні-травні або серпні-вересні відмивають від поверхневих забруднень у мильному розчині, промивають під проточною водою 30 хв, потім стерилізують в етиловому спирті 60 с і переносять експлантати у сулему 0,1 % за експозиції 10 хв, після чого триразово відмивають стерильною dH2O по 10 хв та разово відмивають розчином стерильної dH2O з 2 мг/л лимонної кислоти протягом 10 хв. 1 UA 107143 U Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2