Спосіб прискореного визначення мікроміцетної контамінації сперми жеребців та самців інших видів тварин

Реферат: Винахід належить до способу прискореного визначення мікроміцетної контамінації сперми жеребців та самців інших видів тварин, який передбачає посів проб на спеціальні поживні середовища для зростання грибкової мікрофлори. Посіви проб сперми жеребців або самців інших видів тварин термостатують при температурі тіла того виду тварин, сперму якого досліджують, ±3°C, підрахунок кількості колоній мікроміцетів виконують через 24-48 годин, а після розрахунку кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів отриманий результат помножують на коефіцієнт поправки 5,5-5,8. Якщо через 48 годин не зросла жодна колонія мікроміцетів, то сперму вважають вільною від мікроміцетів або проводять розрахунок кількості UA 110173 C2 (12) UA 110173 C2 колонієутворюючих одиниць мікроміцетів через 72 години від моменту посіву і помножують отриманий результат на коефіцієнт поправки 1,8-2,2. UA 110173 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Винахід належить до галузі сільського господарства, ветеринарії, зоотехнії та біології, а саме до біотехнології відтворення коней та інших видів тварин, та може використовуватись для скорочення часу визначення кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів у спермі жеребців та самців інших видів тварин. Відомо, що за останні тридцять років відзначається різке зростання мікозів. Мікози тварин приводять до зниження їх продуктивності, що завдає великих економічних збитків сільськогосподарському виробництву, крім того існує пряма загроза для здоров'я людини, тому що захворюваність ними постійно збільшується. Різноманітність грибів довкілля вражає, за даними мікологів їх існує більше 1,5 млн. видів, з яких вивчено не більше 5 %. Відмічається розповсюдженість та агресивність мікроміцетів, які раніше не виявляли патогенних властивостей, чи виявляли їх за відповідних обставин, проте зараз, в умовах екологічних змін, вони стають небезпечними для здоров'я та життєдіяльності тварин та людини [Возрастающая значимость грибов-опортунистов в этиологии микозов животных / [Р.С. Овчинников, М.Г. Маноян, ПП. Ершов, А.Г. Гайнуллина] // Тезисы докладов второго съезда микологов. - Москва: НА микологии, 2008. - С. 356-357]. Враховуючи вищевикладене актуальним з наукової і практичної точки зору стає своєчасна та швидка діагностика мікозів особливо у відтворенні тварин. Єдиним найбільш близьким технічним рішенням до заявленого винаходу є ГОСТ 10444.1288 "Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов", за методикою якого посіви термостатують при температурі 24±1 °C, а кількість колонієутворюючих одиниць мікроміцетів визначається на 5 добу від моменту посіву на чашки Петрі [ГОСТ 10444.12-88 "Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов" / Издательство стандартов. - Москва, 1988. - 9 с]. Недоліками прототипу є те, що він призначений для визначення кількості мікроміцетів у харчових продуктах, а не у спермі жеребців та самців інших видів тварин; посіви термостатують при температурі 24±1 °C, що можливо і не дає можливості для більш швидкого зростання колоній мікроміцетів; кількість колонієутворюючих одиниць мікроміцетів визначається лише на 5 добу від моменту посіву на чашки Петрі, що неприйнятно для відтворення де результат необхідно знати вже через 24-48 годин. В основу винаходу поставлено задачу розробити новий спосіб прискореного визначення мікроміцетної контамінації сперми жеребців та самців інших видів тварин, який буде розроблено спеціально для визначення кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів у спермі жеребців та самців інших видів тварин; буде забезпечувати більш швидке визначення кількості мікроміцетів у спермі самців тварин, а за рахунок скорочення часу забезпечить зменшення собівартості посівів. Поставлена задача вирішується тим, що при розробці способу прискореного визначення мікроміцетної контамінації сперми жеребців та самців інших видів тварин, який включає посів проб на спеціальні поживні середовища для зростання грибкової мікрофлори, і згідно запропонованого винаходу посіви проб сперми жеребців або самців інших видів тварин термостатують при температурі тіла того виду тварин, сперму якого досліджують, ±3 °C, підрахунок кількості колоній мікроміцетів виконують через 24-48 годин, а після розрахунку кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів отриманий результат помножують на коефіцієнт поправки 5,5-5,8, якщо через 48 годин не зросла жодна колонія мікроміцетів, то сперму вважають вільною від мікроміцетів або проводять розрахунок кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів через 72 години від моменту посіву і помножують отриманий результат на коефіцієнт поправки 1,8-2,2. Приклад конкретного виконання. 1. Відбирають пробу сперми від жеребців, бугаїв, баранів, хряків, псів, кролів та інших видів 3 тварин об'ємом 1 см , або інший об'єм. 2. Проводять розбавлення проби 1:10. 3. Проводять посів проб сперми на заздалегідь підготовлені чашки Петрі зі спеціальним живильним середовищем для зросту колоній мікроміцетів (наприклад середовище Сабуро, або Чапека або інші) з дотриманням вимог стерильності. 4. Чашки Петрі з посівами проб сперми термостатують при температурі тіла того виду тварин, сперму якого досліджують, ±3 °C. Наприклад температура тіла коня 37,5-38,5 °C, то посів проби сперми жеребця можна термостатувати при температурі від 34,5 до 41,5 °C. 5. Через 24 години підраховують кількість колоній мікроміцетів і вираховують кількість колонієутворюючих одиниць (КУО) мікроміцетів за загальноприйнятою формулою прототипу, а отриманий результат помножують на коефіцієнт поправки: КУО = ((кк * ср) / (в * кч)) * кп, де 1 UA 110173 C2 5 10 15 20 25 30 кк - кількість підрахованих колоній, ср - ступінь розбавлення сперми, в - об'єм проби сперми, кч - кількість чашок Петрі, кп - коефіцієнт поправки, який дорівнює 5,5-5,8. Наприклад при посіві 1 мл сперми, який розбавили 1:10 (у десять разів) на 1 чашку Петрі через 24 години було підраховано 21 колонію мікроміцетів отримуємо: КУО = ((21*10)/(1*1))*5,6=1176. 6. Якщо через 24 години на чашках Петрі не зросла жодна колонія, то чекають ще 12-24 години і потім вираховують КУО. Якщо і через 48 годин з моменту посіву проби сперми не зросла жодна колонія мікроміцетів, то пробу вважають вільною від мікроміцетів, або проводять підрахунок колоній мікроміцетів через 72 години від моменту посіву і помножують на коефіцієнт поправки 1,8-2,2. Таким чином використання розробленого нового способу прискореного визначення мікроміцетної контамінації сперми жеребців та самців інших видів тварин уперше дозволяє встановити мікроміцетну контамінацію сперми самців у 2,5-5 разів швидше, а саме через 24-48 годин, а не через 5 діб (120 годин); зменшення часу проведення оцінки мікроміцетної контамінації сперми дозволяє скоротити трудові витрати на проведення досліду у 1,5-2,0 рази. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ Спосіб прискореного визначення мікроміцетної контамінації сперми жеребців та самців інших видів тварин, який включає посів проб на спеціальні поживні середовища для зростання грибкової мікрофлори, який відрізняється тим, що посіви проб сперми жеребців або самців інших видів тварин термостатують при температурі тіла того виду тварин, сперму якого досліджують, ±3 °C, підрахунок кількості колоній мікроміцетів виконують через 24-48 годин, а після розрахунку кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів отриманий результат помножують на коефіцієнт поправки 5,5-5,8; якщо через 48 годин не зросла жодна колонія мікроміцетів, то сперму вважають вільною від мікроміцетів або проводять розрахунок кількості колонієутворюючих одиниць мікроміцетів через 72 години від моменту посіву і помножують отриманий результат на коефіцієнт поправки 1,8-2,2. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2