Спосіб оцінки порушень мітохондріальних функцій у дітей

Спосіб оцінки порушень мітохондріальних функцій у дітей, що включає визначення інтенсивності аеробних окисних процесів, який відрізняється тим, що в нейтрофілах периферичної крові реєструють спектр убісеміхінону за допомогою електронного парамагнітного резонансу, оцінюють його форму та вимірюють амплітуду, і, при зміні його форми і/або підвищенні амплітуди більше 1у.о., оцінюють порушення мітохондріальних функцій. Корисна модель, що заявляється, відноситься до медицини, і призначена для діагностики захворювань у дітей. Відомо, що широке коло захворювань включає в себе ті чи інші порушення клітинної енергетики, як ланки патогенезу. Серед них такі захворювання, як синдром хронічної втоми [1], мігрень [2], артеріальна гіпертензія [3]. Мітохондрії присутні, за виключенням еритроцитів, у всіх клітинах, і тому хвороби окислювального фосфорилювання (ОФ) можуть викликати симптоми в будь-якому органі або тканині. Порушення електронного транспорту в дихальному ланцюгу мітохондрій призводить до перебудови енергетичного обміну в клітинах, утворення радикальних форм кисню та формування індуковоної нестабільності генному. Як відомо, дихальний ланцюг, що складається з декількох комплексів, які функціонують на внутрішній мембрані мітохондрій, здійснює окиснення мітохондріального НАД*Н (відновленої форми нікотинаміддинуклеотиду). Два електрони, що відщеплюються від НАД*Н, переносяться окисновідновними компонентами комплексу І на убіхінон. Приєднавши два протони і два електрони, убіхінон стає убіхінолом [4]. Убіхінон - це молекула із ланцюга 10 п'ятивуглецевих ізопренових мономерів з високою гідрофобністю за рахунок 50 атомів вуглецю. Гідрофобна частина убіхінону наближена до поверхні мембрани і контактує з водною фазою, вона відновлюється ступенево, приймаючи послідовно по одному електрону і протону. При цьому виникає напіввідновлена форма - убісеміхінон, що є мобільною короткоживучою проміжною сполукою. В стані активного дихання відновленою формою убіхінону служить убіхінол. Значимість убіхінону в дихальному ланцюгу важко переоцінити. Так, вважається, що комплекс II (сукцинатдегідрогеназа) електронотранспортного ланцюга необхідний для забезпечення відновлення убіхінону [5]. При оксидативному стресі і, відповідно, збільшенні рівня супероксидного радикалу-аніону, кількість убісеміхінону, що є надмірно активним одноелектронним відновлювачем кисню, зростає експоненціальне. Цей ріст відображає ступінь порушення мітохондріального дихання. Так, відомий спосіб діагностики стану мітохондріальних функцій за наявністю «рваних червоних волокон» (RRF) в біоптатах м'язів при світловій мікроскопії [6], однак даний спосіб діагностики є надто інвазивним, оскільки потребує забору для біопсії м'язів. Найближчим аналогом способу, що заявляється, є спосіб оцінки порушень мітохондріальних функцій за допомогою визначення інтенсивності аеробних окисних процесів цитохімічними тестами на активність сукцинатдегідрогенази та інших мітохондріальних ферментів (лактатдегідрогенази, гліцерофосфатдегідрогенази) лімфоцитів периферичної крові [7]. Однак даний спосіб не дає уявлення про стан пошкодження дихального ланцюга і більш корисний при первинній мітохондріальній недостатності, коли є генетичне обумовлене порушення функціонування мітохондріальних фер 00 ю CM CD 11258 ментів Задача, яка вирішує спосіб, що заявляється, полягає у визначенні рівнів убісеміхінону в нейтрофілах периферичної крові хворих методом електронного парамагнітного резонансу (ЕПР), що забезпечує швидке нешвазивне, висоїнформативне дослідження і може використовуватись з самого раннього віку Технічний результат дозволяє отримати високочутливу та специфічну діагностику стану мітохондріальних функцій Поставлена задача вирішується завдяки тому, що у відомому способі оцінки порушень мітохондріальних функцій у дітей, який передбачає визначення інтенсивності аеробних окисних процесів, згідно корисної моделі в нейтрофілах периферичної крові реєструють спектр убісеміхінону за допомогою електронного парамагнітного резонансу, оцінюють його форму та вимірюють амплітуду, і при ЗМІНІ його форми і/або підвищенні амплітуди більше 1уод оцінюють порушення мітохондріальних функцій Основною ВІДМІННІСТЮ способу, що заявляється, є оцінка порушень мітохондріальних функцій за допомогою визначення в нейтрофілах периферичної крові хворих концентрації убісеміхінону за допомогою електронного парамагнітного резонансу Перевагами даного методу оцінки порушень мітохондріальних функцій є його висока чутливість, швидкість, неінвазивність Спосіб здійснюється наступним чином 1мл нативної венозної крові заливають в спеціальну пресформу, заморожують при температурі рідкого азоту 77°К Отримані зразки крові досліджують на спектрометрі ЕПР РЕ-1307 в режимі низькотемпературної стабілізації Реєструють спектри ЕПР нейтрофілів Сигнал ЕПР з фактором спектроскопічного розщеплення д=2,005 характеризує рівень убісеміхінону в нейтрофілах (рис 1 ) Зміна форми сигналів в спектрах ЕПР нейтрофілів і/або підвищення інтенсивності сигналів ЕПР спектру більше 1 ум од свідчить про порушення мітохондріальних функцій Спосіб не потребує значних зусиль з боку медичного персоналу Під спостереженням знаходилось 25 дітей у ВІЦІ 12-17 років з різними КЛІНІЧНИМИ формами вегетативних дисфункції 75% хворих мали підвищені значення вмісту убісеміхінону Відмічено достовірну-кореляційну залежність між амплітудою спектру ЕПР убісеміхінону та величиною середньодобової частоти серцевих скорочень (г=0,67, Р