Спосіб оцінки метаболічних порушень в оці при розвитку вікової катаракти

Винахід, який заявляється, стосується галузі медицини, а саме офтальмології. Він призначений для оцінки метаболічних порушень в оці при розвитку вікової катаракти (ВК). У структурі захворювань ока постійно зростає питома вага патології кришталика. Найбільш поширеною нозологічною формою у цій гр упі захворювань є ВК. Провідним фактором, що обумовлює виникнення ВК, є формування глибоких метаболічних змін не тільки у кришталику, а і в оці в цілому. Одним із показників порушення метаболічного стану ока хворих на ВК є порушення обміну ліпідів [8]. Є переконливі докази, які підтверджують роль ліпідів у забезпеченні функцій біологічних мембран (БМ) [7]. Руйнування БМ клітин і порушення їх функцій при ВК відомо. Найбільш важливим процесом, що порушує БМ, є процес перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) [3]. Саме цей процес розглядається в якості молекулярного механізму, який руйнує БМ при ВК. Основним субстратом процесу ПОЛ є поліненасичені жирні кислоти (ПНЖК) [2]. Від нормального вмісту цих кислот залежить виконання БМ їх функцій. Пошкодження жирних кислот (ЖК) у процесі ПОЛ негативним чином відзначається на всіх функціях БМ. Наслідком активації процесу ПОЛ є адаптивна перебудова структури ліпідного шару БМ зі зміною співвідношення ЖК у напрямку зниження концентрації ПНЖК. Таким чином, порушення стану ліпідного обміну при ВК може розглядатися як інтегральний показник, що характеризує метаболічні зміни в оці. Існуючи способи оцінки метаболічних порушень при розвитку ВК засновані на вивченні їх у крові, кришталику та вологи передньої камери ока [1; 5]. Ці способи є інвазивними і не можуть бути рекомендовані у широку практику. Найбільш близьким до запропонованого способу, обраного за прототип є спосіб оцінки метаболічних порушень в оці шляхом визначення вмісту білка та амінокислотного складу електроеліміната з ока [6]. Однак, вказаний спосіб дозволяє охарактеризувати лише ступень запалення в оці і застосовувався при вивченні запальних процесів. Формування ВК є наслідком змін цілого комплексу метаболічних факторів. Завдання, яке вирішується у даному винаході, полягає у створенні способу оцінки метаболічних порушень в оці при ВК шляхом визначення показників, що дають інтегральну оцінку механізмів гомеостазу в елімінаті з ока. Технічний результат, що досягається, полягає у можливості кількісної оцінки метаболічних порушень в оці при віковій катаракти, що сприяє підвищенню ефективності діагностики ВК на ранніх стадіях її виникнення. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі, який включає дослідження жирно-кислотного складу ліпідів в елімінату з ока хворих, згідно винаходу, методом газо-рідинної хроматографії визначають кількість олеїнової жирної кислоти та поліненасичених жирних кислот в елімінаті з ока хворого та розраховують їх співвідношення по відношенню до контрольної групи по формулі: КНН=С18: І/ПНЖ, де КНН - коефіцієнт ненасиченості ліпідів, С 18:1 - олеїнова кислота, ПНЖ - поліненасичені жирні кислоти і при зростанні коефіцієнта ненасиченості ліпідів оцінюють ступень метаболічних порушень в оці. Спосіб оцінки глибини метаболічних порушень в оці при ВК здійснюється наступним чином. Для цього ваночку, об'ємом 20куб.см, заповнюють підігрітою до 28-30° дистильованою водою і підводять до відкритого ока пацієнта так, щоб вода контактувала з очним яблуком. На оці встановлюють анод і за допомогою приладу "Поток-1" напротязі 15 хвилин через око пропускають струм силою у 1-1,5мА. Після цього 15мл елімінату поміщають у пробірку, додають 5мл хлороформ-метанольної суміші (співвідношення 2:1) і витримують у холодильнику напротязі 30 хвилин при температурі +4° по Цельсію. Після цього фільтрують у пробірку об'ємом 10мл з додаванням 1мл дистильованої води для кращого розділення фаз. Для аналізу відбирають хлороформну нижню фазу, яка містить ліпіди. А вер хня метанольна фаза містить білки. Хлороформні екстракти випарюють досуху в потоці азоту при температурі 45° на водяній бані. Сухий осад ліпідів з'єднують з 5 мл розчину 1% сірчаної кислоти (Н2SO4) у метанолі і вміщують в ампули, які запаювали. Потім проводять гідроліз і метілірування в термостаті при температурі 85° на протязі 20 хвилин. Екстракцію метіліруваних ЖК проводять двічі гексан-ефірною сумішшю (співвідношення 1:1) в кількості 5 мл. Об'єднані екстракти випарюють в потоці азоту при 40° по Цельсію на водяній бані і сухий осад розчинюють в 40,050,0мкл чистого гексану і вводять у випарювач хроматографа в кількості 5мкл. Для визначення спектру ЖК ліпідів використовують скляну колонку хроматографа, заповнену фазою 5% ПЕГС на хроматоні N-AW-HMDS (зерніння 0,125-0,160мм), температура колонки - 184° по Цельсію, а випарювача - 250° по Цельсію, швидкість діаграмної стрічки 240мм/г, тривалість аналізу 20 хвилин. Кількісну оцінку спектру ЖК ліпідів проводять за методом нормирування площ, з визначенням частки ЖК у відсотках [4]. Протягом 1997-2000 років у міській клінічній лікарні "Центр мікрохірургії ока" м.Києва було здійснено обстеження і лікування 200 хворих на ВК різного ступеня зрілості та 64 пацієнта з прозорими кришталиками. Результати визначення показників метаболізму в елімінаті з ока представлені у таблиці 1. Таблиця 1 Показники метаболізму ока (%) Назва показника Олеїнова ЖК (C18:1) ПНЖК Групи спостереження Пацієнти з прозорими кришталиками Хворі на вікову катаракту 20,5±1,5 26,6±1,1* 19,0±1,4 11,3±0,8* - вірогідність відмінностей з показниками пацієнтів з прозорими кришталиками (р