Спосіб оцінки ступені важкості сіндрому склерокістозних яєчників у дівчат-підлітків

Номер патенту: 17121

Опубліковано: 18.03.1997

Автори: Матиціна Любов Олександрівна, Чайка Володимир Кирилович

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Способ оценки степени тяжести синдрома склерокистозных яичников у девочек-подростков, включающий определение уровня половые гормоны связывающего глобулина в реакции иммунофлюоресценции, отличающийся тем, что дополнительно определяют степень гормонального дисбаланса по уровню половые гормоны связывающего глобулина и рассчитывают показатель андрогенной активности (ПАА) по формуле

 - уровень тестостерона;

 - концентрация половые гормоны связывающего глобулина;

 - число исследований,

и при значимости  диагностируют тяжелую степень ССКЯ, при  - среднюю, при  - легкую степень,  - риск развития синдрома склерокистозных яичников, при  - отсутствие патологии.

Текст

Способ оценки степени тяжести синдрома склерокистозных яичников (ССКЯ) у девочекподростков относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии и может быть использован в условиях клиники. Известен способ оценки степени тяжести ССКЯ [1] в зависимости от выраженной триады клинических симптомов: нарушения менструальной функции, увеличения яичников, ановуляции (бесплодия). Однако клинические симптомы не всегда отражают глубину гормональных нарушений в организме девочек подростков с ССКЯ. Часто встречается атипичное, моносимптомное течение синдрома. Нередко наличие сопутствующи х фоновых заболеваний не позволяет своевременно и достоверно дифференцировать степень тяжести ССКЯ, основываясь только на клинических симптомах. В связи с этим дать оценку степени тяжести ССКЯ у девочек-подростков невозможно. Известен также способ оценки тяжести ССКЯ [2] по отношению уровня лютеинизирующего гормона к уровню фоликулостимулирующего гормона. Недостатком известного способа является его неинформативность по той причине: что особенности течения заболевания у девочекподростков на ранних стадиях в пубертатном периоде характеризуется сложными и многочисленными нейрон/моральными взаимоотношениями: регулирующими процесс полового созревания, их стремительная перестройка в период пубертата предрасполагает к тому, что ввиду ряда причин гипоталамогипофизарная система, управляющая циклической секрецией гонадотропинов, не приобретает способности к ритмической секреции гонадотропних гормонов. Организм девочекподростков отличается незрелостью механизмов гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы. Наиболее близким по технической сущности заявляемого изобретения является способ диагностики синдрома склерокистозных яичников [3] основанный на определении уровня половые гормоны связывающего глобулина в реакции иммунофлюоресценции. Осуществляют способ следующим образом. У обследуемой пациентки производят натощак забор 2мл крови путем венопункции, затем дают крови свернуться и отделяют плазму путем центрифугирования и определяют содержание тестостерона иммунофлюоресцентным методом. Определение уровня тестостерона базируется на реакциях конкурентного связывания между меченым европием, тестостероном и тестостероном исследуемого образца сыворотки крови с поликлональными антитестостероновыми антителами, полученными от кроликов. Стандарт, контроль и образец сыворотки пациентки, содержащие тестостерон, препятствуют связыванию меченого европием тестостерона с антителами молекул. Блокирование агента в тестостерон-испытательном буфере содействует освобождению тестостерона от связывания протеинами в исследуемом образце. Вторые антитела, направленные против кроличьего иммуноглобулина наслаивают к основной фазе и связывают - тестостероновый комплекс, дающий удобное разделение антител связанных и свободных антигенов. Испытательный раствор способствует диссоциаций ионов европия от меченого тестостерона в раствор, где они формируют высокофлюоресцентные комплексы с компонентами испытательного раствора. Флюоресценция каждого образца - обратно пропорциональна концентрации тестостерона в образце. Определение уровня тестостерона не может быть строго специфичным тестом, так как повышение уровня тестостерона в крови может быть не только при ССКЯ, но и при ряде другой патологии (врожденной гиперплазии коры надпочечников, идиопатическом гирсутизме и т.д.), сопровождающейся гиперандрогенией. Кроме того, выявление повышение уровня тестостерона является важным, но не единственным признаком, отражающим глубину и степень выраженности патологического процесса при синдроме склерокистозных яичников. Таким образом, известный способ не дает возможности для количественной оценки ССКЯ, вследствие недостаточной объективности при оценке степени тяжести синдрома, а в связи с этим невозможно сравнительно точно определить степень тяжести синдрома, так как он не обеспечивает количественную оценку степени тяжести ССКЯ в зависимости от уровня тестостерона. В основу предлагаемого способа поставлена задача оценки степени тяжести ССКЯ у девочекподростков путем определения уровня половые гормоны связывающего глобулина в реакции иммунофлюоресценции и показатель андрогенной активности, что приводит к повышению точности оценки степени тяжести ССКЯ. Сущность предлагаемого способа заключается в том, что в плазме крови определяют уровень половые гормоны связывающего глобулина в реакции иммунофлюоресценции, степень гормонального дисбаланса по уровню половые гормоны связывающего глобулина и рассчитывают показатель андрогенной активности формуле: по где - уровень тестостерона; - концентрация половые гормоны связывающего глобулина; - число исследований, и при значимости диагностируют тяжелую степень ССКЯ, при среднюю, при - легкую степень, - риск развития синдрома склерокистозных яичников, при отсутствие патологии. Новым в способе является то, что дополнительно определяют степень гормонального дисбаланса по уровню половые гормоны связывающего глобулина и рассчитывают показатель андрогенной активности по формуле где - уровень тестостерона; - концентрация половые гормоны связывающего глобулина; - число исследований, и при значимости диагностируют ССКЯ, при тяжелую степень - среднюю, при легкую степень, - риск развития синдрома склерокистозных яичников, при отсутствие патологии. Концентрация половые гормоны связывающего глобулина, в плазме крови, определяемая в заявленном способе, является важным фактором для определения пропорций биологически активных циркулирующих в крови половых стероидных гормонов. В крови половые гормоны связывающим глобулином обратимо связано от 97 до 99% циркулирующи х тестостерона и эстрадиола, и только небольшая часть свободных стероидов является физиологически активной. Изменение концентрации половые гормоны связывающего глобулина (ПГСГ) перераспределяет тестостерон и эстрадиол между стероидсвязывающими протеинами и свободными фракциями в крови. Определение уровня половые гормоны связывающего глобулина и подсчет показателя андрогенной активности, предложенные в заявленном способе, предусматривает поэтому важную информацию для клинической оценки дисфункции репродуктивной системы и указывает на повышение активности андрогенов, повышение продукции тестостерона приводит к возрастанию концентрации его, в плазме, в результате чего снижается уровень половые гормоны связывающего глобулина и возрастает концентрация свободного тестостерона, который стимулирует волосяные фолликулы и способствует развитию гирсутизма, характерного для ССКЯ; компенсаторное возрастание метаболического клиренса тестостерона может приводить к нормализации плазменного уровня тестостерона, но концентрация свободного тестотерона продолжает оставаться повышенной из-за снижения уровня половые гормоны связывающего глобулина и взаимовлияния сниженных концентраций половые гормоны связывающего глобулина и повышенных свободного тестостерона. Существенное отличие заявленного способа заключается в использовании новых информативных параметров, а именно: отношение уровня тестостерона в плазме крови к уровню половые гормоны связывающего глобулина, что отражает глубину гормональных сдвигов в организме, и расчет показателя андрогенной активности. Это позволяет оценивать точно степень тяжести ССКЯ у девочек подростков за счет количественной оценки. Следовательно, совокупность существенных признаков формулы дает возможность по глубине гормональных сдвигов количественно оценить степень тяжести заболевания с достаточной точностью, чтобы подобрать адекватную терапию. Преимущество заявленного способа заключается в том, что определение показателя комплексного гормонального дисбаланса у девочек-подростков с ССКЯ с помощью определения в плазме крови уровня тестостерона, половые гормоны связывающего глобулина, подсчет показателя андрогенной активности позволяют достоверно и точно оценить степень тяжести ССКЯ, а также может быть использовано для оценки эффективности проводимой терапии и прогноза течения заболевания. Заявляемый способ позволяет оценить глубин у поражения яичников, что может служить для назначения адекватной терапии в пубертатном и постпубертатном периодах; прогнозировать риск развития нарушений менструальной функции и бесплодия при дальнейшем прогрессировании заболевания. Заявленный способ осуществляют следующим образом. Путем венепункции производится забор крови натощак из локтевой вены в количестве 4мл. После центрифугирования методом иммунофлюоресценции определяют в плазме крови содержание тестостерона и половые гормоны связывающего глобулина. Сущность проведения реакций определения уровня половые гормоны связывающего глобулина заключается в повышении иммунофлюоресценции данного глобулина путем его диссоциации, причем два момента флюороиммунометрического испытания базируются на прямом техническомприеме с использованием анти-ПГСГ антител (продуцируемых кроликами) и моноклональных антител (полученных от мышей). При проведении процедуры разведения и определения содержания половые гормоны связывающего глобулина в стандарте, контроле и образце сыворотки крови пациентки молекулы ПГСГ реагировали одновременно с поликлональными анти-ПГСГ антителами, иммобилизированными на внутренней поверхности стенки микротитрационных пипеток и мечеными европием моноклональными антителами в растворе. После отмывания подготовленные растворы были прибавлены к диссоциированным от меченых антител в раствор катионам европия где они образуют флюоресцирующие комплексы с компонентами перечня растворов. Флюоресценция и в микротитрационных пипетках флюоросчетчиком, так как световое излучение от каждого образца прямо пропорционально концентрации половые гормоны связывающего глобулина в образце. Концентрация половые гормоны связывающего глобулина в образцах сыворотки пациентов сравнивают и рассчитывают по стандартной кривой интенсивности флюоресценции половые гормоны связывающего глобулина. Перечень растворов, готовых к употреблению, для проведения реакций определения ПГСГ в образцах сыворотки. 1. ПГСГ-стандарт. Добавить 0,5мл дистиллированной воды в каждый ПГСГ стандарт и растворить содержимое мягким встряхиванием. Дать отстояться перед употреблением не менее 10 минут. Стабильность стандарта сохраняется 3 недели при 2. Этот раствор должен быть разбавлен в желаемую концентрацию не менее, чем за час до использования. 3. Проба буферных концентратов. Налить 50мл пробы буферного концентрата и разбавить до 3 - х кратного увеличения, добавив 100мл высококачественной дистиллированной воды, чтобы получить буферную пробу (pH = 7,75). Хранить этот буфер от 2 до 8°C. 4. Очистительный концентрат. Налить 20мл очистительного концентрата в чистый сосуд и разбавить в 25-кратном увеличении, добавив 480мл высококачественной дистиллированной воды, чтобы получить буферный очистительный раствор (pH - 7,75). Этот очистительный концентрат может храниться в течении двух недель при температуре от +2 до +30°C. Количественная испытательная процедура (процедура количественного определения уровня ПГСГ). 1. Дать реагентам достичь комнатной температуры 20 - 25°C. 2. Расставить и разметить колбы для смешения стандартов и образцов (1 : 100). Это производится аккуратным смешиванием 10мл сыворотки с 1мл испытательного буфера. Взболтнуть растворы. 3. Переведите и закрепите требуемое количество микротитроционных пипеток, обеспеченных набором реактивов, в пипеточной рамке. Пипетки могут быть закрыты вместе, чтобы убедиться в безопасности закрепления. Пронумеровать пипетки. Оставшиеся пипетки запечатать в пластиковую сумку. 4. Приготовить раствор, меченый европием в течение одного часа (за час до использования). Важно, что бы этот испытательный буфер не входил в контакте базовым раствором, не готовым к немедленному использованию. Рекомендуется, чтобы объем базовой смеси, требуемый для растворения, удалялся из чистой дезинфицируемой пипеткой (не выливать из этой чистой пипетки базовую смесь), освободить в свободный пластмассовый тюбик или стеклянный пузырек, включающий объем испытательного буфера, смещать до конца. Рекомендуем использовать пустую бутылочку из-под испытательного буфера (50мл) для приготовления меченого раствора, как это было с пипеткой, рекомендуемой для приготовления метки. 5. Тща тельно наполнить двойные пипетки 25мл разведенного стандарта ПГСГ и разведенного образца сыворотки пациента. 6. Прибавить 200мл разбавленного меченого раствора к каждому источнику. 7. В течение двух минут встряхивать рамку при помощи автоматического приспособления, затем - инкубация рамки 2 часа при комнатной температуре. 8. После инкубации - аспирация и мытье каждой полосы источника. 9. Прибавить 200мл из перечня растворов прямо из бутылки реагентов к каждому источнику использования пипеткой. Этот объем должен пипетироваться точно, потому что ионы европия, являющиеся меткой, диссоциируют в это т раствор и от концентрации его зависит результат флюоресценции. 10. Встряхивать рамку автоматическим приспособлением в течение 5 минут. После встряхивания ждать 50 - 15 минут для измерения флюоресценции. 11. Измерение флюоресценции проводится на флуориметре "Аси" 1230. С использованием избирательной программы для автоматического измерения и подсчета результатов. В таблице приведены результаты сопоставления заявленного способа и способапрототипа, а также данные клинических проявлений и гормональных сдвигов в организме девочек-подростков с синдромом склерокистозных яичников. Полученные результаты указывают на отсутствие достоверных различий в оценке степени тяжести гормонального дисбаланса при применении комплексной оценки с использованием ряда клинико-лабораторных, функциональных и ультразвуковых методов диагностики степени тяжести ССКЯ и применении заявленного способа. На ранних стадиях у девочек-подростков заболевания отношение уровня лютеинизирующего гормона к уровню фолликулостимулирующего гормона не информативно. Имеет место монотонно низкий уровень лютеинизирующего гормона в крови на фоне нормального или несколько повышенного уровня фолликулостимулирующего гормона. В пубертатном периоде подсчет яичникового маточного индекса (ЯМИ) также не является достаточно информативным критерием диагностики ССКЯ, особенно на ранних стадиях развития заболевания, так как отсутствует выраженное увеличение яичников в связи с относительно малой длительностью течения заболевания. Наиболее информативным критерием диагностики степени тяжести синдрома является определение концентрации ПГСГ и подсчет ПАА, так как концентрация половые гормоны связывающего глобулина связана с уровнями эстрадиола и тестостерона в плазме крови, а последние взаимодействуют по механизмам прямой и обратной связи с уровнями лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов. Таким образом, ПАА позволяет с большой информативностью и точностью судить о состоянии гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы и о гормональном дисбалансе в организме у девочек-подростков с ССКЯ. Пример 1. К подростковому гинекологу обратилась больная С., 14 лет, мед. карта №25 с жалобами на нерегулярные редкие менструации. Объективно: склонность к ожирению. Гирсутного синдрома нет. Данные гормонального обследования: ЛГ - 1,84Ед/л; ФСГ 2,58Ед/л; ЛГ/ФСГ = 0,72; Е = 0,2нмоль/л; П = 0,1нмоль/л; Т = 5,0нмоль/л; К = 342нмоль/л; ТЭСГ = 16,66нмоль/л. УЗИ: матка размерами 41 ´ 24 ´ 33мм, правый яичник 37 ´ 30 ´ 24мм, левый яичник 34 ´ 23 ´ 29мм, оба яичника мелкокистозно изменены. Комплексная оценка степени тяжести ССКЯ совпадает с оценкой по показателю андрогенной активности (ПАА = 0,3) и соответствует легкой степени течения заболеваний. Пример 2. К подростковому гинекологу обратилась больная Т., 15 лет, мед. карта №3 с жалобами на редкие менструации, гирсутный синдром. Объективно тенденция к избытку массы тела, умеренно выраженный гирсутный синдром. Данные обследования: ЛП = 9,447ЕД/л; ФСГ = 2,8ЕД/л; ЛД/ФСГ = 3,37; Е = 0,3нмоль/л; П = 6,6нмоль/л; К = 669,1нмоль/л. УЗИ; матка 44 ´ 14 ´ 24мм, гипопластична, правый яичник 38 ´ 24мм, левый яичник 37 ´ 23мм. При подсчете показателя андрогенной активности его значение составило 0,56, что соответствует средней степени течения заболевания и согласуется комплексной оценкой состояния гормонального дисбаланса, в том числе и при изучении цирфорального ритма секреции гонадотропинов у данной больной. Пример 3. В стационар поступила больная Г., 16,5 лет, мед. карта №61 с жалобами на нарушение ритма менструаций в сторону полименореи, повышенное оволосение тела. Объективно: несколько повышенного питания, выраженный гирсутный синдром. Данные обследования: ЛГ = 0,166ЕД/л; ФСГ = 3,152ЕД/л; ЛГ/ФСГ = 0,053 (не информативно), Е2 = 0,8нмоль/л; П = 0,1нмоль/л; К = 214нмоль/л; Т = 11,2нмоль/л; ТЭСГ = 16,1нмоль/л; ПАА = 0,695. УЗИ: матка гипопластична 40 ´ 32, ОД = 41 ´ 21мм, ОС = 42 ´ 22мм, мелкокистозно изменены. Оценка степени тяжести соответствует средней тяжести течения ССКЯ (Б), что согласуется с данными патологического исследования №732 - 33 после оперативного лечения; клиновидной резекции обоих яичников. Пример 4. В стационар поступила больная У., 15 лет с жалобами на отсутствие менструации в течение 1 года 3 месяцев, мед. карта №133. Объективно: тенденция к избыточной массе тела, умеренно выраженный гирсутный синдром. Данные гормонального обследования: ЛГ = 8,78ЕД/л; ФСГ = 4,76ЕЛ/л; ЛГ/ФСГ = 1,845; Е2 = 0,4нмоль/л; П = 9,8нмоль/л; Т = 12,9нмоль/л; ТЭСГ = 14,5нмоль/л; ПАА = 0,95. Данные клинических, лабораторных и патогистологических (№949 - 950) методов исследования соответствуют тяжелой степени течения ССКЯ, что согласуется с подсчетом степени тяжести по ПАА.

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for evaluation of degree of severity of syndrome of sclero-cystous ovaries at young girl

Автори англійською

Chaika Volodymyr Kyrylovych, Matytsina Liubov Oleksandrivna

Назва патенту російською

Способ оценки степени тяжести синдрома склерокистозных яичников у девочек-подростков

Автори російською

Чайка Владимир Кириллович, Матицина Любовь Александровна

МПК / Мітки

МПК: G01N 33/53

Мітки: важкості, ступені, яєчників, склерокістозних, синдрому, дівчат-підлітків, оцінки, спосіб

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/4-17121-sposib-ocinki-stupeni-vazhkosti-sindromu-sklerokistoznikh-yaehchnikiv-u-divchat-pidlitkiv.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб оцінки ступені важкості сіндрому склерокістозних яєчників у дівчат-підлітків</a>

Подібні патенти