Спосіб моделювання гострого геморагічного інсульту у білих мишей для проведення імунологічних досліджень

1. Спосіб моделювання гострого геморагічного інсульту у білих мишей для проведення імунологічних досліджень шляхом стереотоксичного вживления ін'єкційних голок і введення аутокрові, який відрізняється тим, що попередньо травмують ділянку мозку і вводять аутокров в кількості відповідно 0,05 - 0,08 мл в обидві півкулі протягом 0,5 хв. 2. Спосіб по п.1, який відрізняється тим, що травмування ділянки мозку проводять коловими рухами зігнутого мандрена. Винахід відноситься до експериментальної медицини і може бути використаний для вивчення патофізіології' геморагічного інсульту, а також для експериментальної фармакотерапії і імунологи. Спосіб дозволяє підвищити відтворюваність моделі. Для цього в головний мозок по стереотаксичним координатам білатерально вживляють тупі ін'єкційні голки, в які вводять зігнуті мандрени. 4 - 6 круговими рухами мандрену травмують тканину мозку білих мишей і судини, що проходять в ній, після чого в утворені ділянки деструкції і мікрокрововиливів додатково вводять 0,05 - 0,08 мл аутокрові тварини. Відомі способи моделювання геморагічного інсульту шляхом впливу звуку, введення крові в різні структури головного мозку. Найбільш близьким до даного є спосіб моделювання геморагічного інсульту шляхом введення 1,2 - 1,5 мл аутокрові, змішаної з 0,2 мл гепарину під тиском (120 - 150 мм рт.ст.) у внутрішню капсулу одної з півкуль мозку кішок через голку, яка вживлена по стереотаксичним координатам. Але відомий спосіб має наступні недоліки: висока летальність тварин (80%) в ранні періоди розвитку інсульту в результаті прориву крові в шлуночки або наростаючої' компресії мозку при ушкодженні найближчих зоні ураження великих судин введеною кров'ю, що не відповідає вимогам хронічного досліду Невизначеність ушкодження структур мозку в результаті приєднання загальномозкових симптомів, що виникають при ретроградному проникненні залишку крові впродовж голки під мозкові оболонки, є неприйнятним в експе риментальній нейрофармакології і невропатології. Виникнення Геморагій є небажаним, але вони є наслідком гепаринізації крові. Невисока і надійність методу при похибках в техніці моделювання монолатеральних крововиливів. Крім того, в усіх відомих моделях інсульту використовуються великі лабораторні тварини (коти, кролі, мінісвині), або щури, що не тільки удорожчує дослідження при невеликих вибірках тваоин і є причиною статистичної недостовірності отриманих результатів Ці тварини не можуть бути використані в експериментальній імунології і нейроімунології в разі необхідності дослідження показників клітинного та гуморального імунітету. Метою нашого винаходу є підвищення відтворюваності моделі гострого геморагічного інсульту у дрібних лабораторних тварин - білих мишей. Поставлена мета досягається тим, що у тварини попередньо травмують ділянку мозку з наступним (через 2-3 хв) введенням аутокрові в кількості 0,05 - 0,08 мл на протязі 0,5 хв. Досліди були виконані на 118 нелінійних білих мишах обох статей масою 18 - 22 г, у яких експериментально моделювали геморагічний інсульт різного ступеню важкості. Дослідним тваринам проводили загальну анестезію діетиловим ефіром (aether pro narcosi), після чого вони були поділені на 3 групи. У анестезованих тварин (ст. ІН.1 - ст. Ш.2) проводили сагітальний розріз покривних тканин в лобній, тім'яній і потиличній областях, видалення надкістниці з відповідних кісток черепу, висвердлювали 2 отвори (проекція capsula interna - СІ.) правої' та лівої т ю со 1^ да со < 39735 півкуль мозку При цьому раньову поверхню осушували від крові та цереброспинальної рідини У тварин І групи моделювання геморагічного мозкового інсульту здійснювали у ВІДПОВІДНОСТІ З раніше розробленою методикою за допомогою ділянки металічного мандрена, девіантно виступаючого з попередньо підготовленої ін'єкційної ГОЛКИ, удосконаленої гумовим фіксатором для обмеження глибини його проникнення в мозок тварин Травматизація тканин мозку досягалась здійснюваними за годинниковою стрілкою 4 - 6 круговими рухами мандрена і, таким чином, "конусоподібного" підсікання тканини мозку з ураженням судин в ДІЛЯНЦІ С І [1] Тваринам наступної експериментальної сери додатково (у фронтальній площині) прямим мандреном травмували центральну частину підсіченого тканьового "конусу", а також вищерозташованих ділянок обох півкуль Білим мишам що входять в III (головну) дослідну групу (важка форма ГНМК) у вказані ділянки тканинного детриту обох півкуль додатково вводили за допомогою шприца 0 05 - 0 08 мл аутокрові Потім краї рани зашивали і цю ділянку обробляли антисептиком - 1 % спиртовим розчином йоду Співставлений аналіз рішення, що заявляється, з прототипом показує що вперше біпівкульний геморагічний інсульт моделюється шляхом попереднього механічного травмування локальних судин мозку 4 - б- коловими рухами мандренів, введених у білатерально вживлені в С І голки, з наступним через 2-3 хв введенням 0,05 - 0,08 мл аутокрові тварини на протязі 0,5 хв Таким чином, спосіб, що заявляється, відповідає критерію "новизна" ВІДОМІ способи моделювання біпівкульного геморагічного інсульту звуковою травмою Разом з тим, спосіб, що пропонується, відрізняється від відомого тим, що вперше геморагічний інсульт моделюється шляхом попереднього травмування тканини і судин мозку коловими рухами мандрену, проведеного через стереотаксично вживлені першу і другу ІН'ЄКЦІЙНІ ГОЛКИ З наступними через 2 - З хв ІН'ЄКЦІЯМИ аутокрові тварини по 0,05 -0,08 мл на протязі 0,5 хв Це дозволяє зробити висновок про ВІДПОВІДНІСТЬ способу, що заявляється, за критерієм "суттєві ВІДМІННОСТІ" Аналіз результатів, отриманих в ході досліджень, свідчить про те, що найбільш адекватною поставленій меті відтворення моделі геморагічного інсульту є модель відтворена у тварин III дослідHOf групи Конкретні приклади виконання моделювання також свідчать про те, що мета була досягнута Приклад 1. Біла миша масою 20 г, самець, анестезована диетиловим ефіром Голова тварини фіксована в стереотаксичному апараті Скальпелем проведений розріз м'яких покривних тканин черепу в сагітальному напрямку По передній і латеральній координатах АР 0 7, L 2,2 знайдено зони, в яких бормашиною просвердлено отвори Через них в обидві півкулі мозку введені тупі голки на глибину Н 2,2 мм, що відповідає розташуванню внутрішньої капсули Голки фіксовані гумовим фіксатором, закріпленим на черепі Шприцем з 0,05 мл гепарину взято 0,35 мл венозної крові тварини і введено через голки, які вживлені в обидві внутрішні капсули Через 1 год - прогресуюче зниження частоти дихання до 8/хв Загибель миші зафіксовано через 40 хв після відтворення геморагічного інсульту На макропрепаратах мозку - масивний крововилив в обидві гемісфери мозку з проникненням крові в бокові шлуночки Приклад 2. Біла миша масою 20 г, самець, анестезована диетиловим ефіром Голова тварини фіксована в стереотаксичному апараті Скальпелем проведений розтин м'яких покривних тканин черепу в сагітальному напрямку По передній і латеральній координатах АР 0,7, L 2,2 праворуч та ліворуч знайдені точки, в яких бормашиною просвердлені отвори Через них білатерально введені тупі голки на глибину Н 2,2 мм Голки фіксовані фіксатором закріпленим на черепі тварини В голки введені зігнуті мандрени і 4 - 6 круговими рухами травмовані ділянки внутрішніх капсул мозку і судини, що проходять в них Через 0,5 хв після додаткової деструкції в ці зони правої і лівої півкуль введено по 0 08 мл аутокрові тварини В наступну добу - тварина адинамічна, рухається повільно, знижена чутливість по типу тетраанестези Нормалізація стану на протязі 3 діб Тварина виведена з експерименту При вивченні макропрепарату мозку зареєстровані білатеральні ділянки крововиливів в зонах обох внутрішніх капсул Приклад 3. Біла миша масою 18 г, самець, анестезована диетиловим ефіром Голова тварини фіксована в стереотаксичному апараті Скальпелем проведений розтин покривних м'яких тканин черепу в сагітальному напрямку По передньо-задній і латеральній координатах АР 0,7, L 2,2 праворуч та ліворуч знайдені точки, в яких бормашиною були просвердлені отвори Через них білатерально введені тупі голки на глибину Н 2,2 мм Голки фіксовані фіксатором, закріпленим на черепі В голки введені зігнуті мандрени і 4 - 6 круговими рухами травмовані ділянки правої та лівої внутрішніх капсул мозку і судини, що в них проходять Через 0,5 хв після додаткового травмування через голки в утворені ділянки деструкції введено по 0,05 мл аутокрові тварини Нормалізація дихання через 19 хв З перших годин після експериментального моделювання тварина самостійно рухається Дихання та пульс стабілізувались в межах норми На 5 добу - задовільне відновлення рухових функцій Тварина виведена з експерименту На макропрепаратах мозку - білатеральні ділянки крововиливів в обидві внутрішні капсули Моделювання геморагічного інсульту методом, що заявляється, дозволяє одержати характерну для крововиливу у внутрішню капсулу мозку неврологічну симптоматику віддалити загибель тварин для задоволення вимог хронічного досліду по нейроімунолопі і підвищити вщтворюваність методу до 93,3 % Перелік посилань 1 А с № 17675118 А1 от 08 06 92 / Косицин М С , Карпенко С В , Мишина В А , Макаренко А Н Способ моделирования геморрагического инсульта 39735 Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122)3-72-89 (03122)2-57-03