Спосіб відбору корів-донорів і телиць-реципієнтів

1. Спосіб відбору корів-донорів і телицьреципієнтів, що включає внутрішньошкірне введення окремих стероїдних гормонів, який відрізняється тим, що коровам і телицям внутрішньошкірно у верхній третині шиї після відповідної асептичної підготовки (вистригання шерсті, дезінфекційної обробки) одноразово, окремо вводиться 3 живлюваності. Біля 50% реципієнтів не використовують у процесі підготовки телиць до трансплантації через відсутність в яєчниках жовтого тіла, а приживлення ембріонів залежить від якості жовтого тіла реципієнта у день пересадки (Spell A.R., Beal W.E., Corach L.R., Lamb G., Enaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle // Theriogenology. 2001. - 15:56(2). - P.287-297. Недоліком даного способу є те, що між наявністю і ростом жовтого тіла та рівнем прогестерону в крові тварин існує кореляція, тому якість приживлення ембріонів залежить від концентрації цього гормону у крові реципієнта перед трансплантацією. Найбільш близьким по суті до способу, що заявляється є спосіб прогнозування результатів суперовуляцій у корів за рівнем естрадіолу і прогестерону у крові (Смыслова Н.И. Результаты суперовуляции коров-доноров в зависимости от исходного гормонального фона // Трансплантация эмбрионов у крупного рогатого скота. Таллин. 1986. - С.13-15; Royagi J., Swacuti J., Wachi H. Studies levels of plasma steroid and results of embryo recovery // Japan J. anim. reprod. - 1987. - v. 33. - №4. - P.167-172) Недоліком вищеописаного способу є те, що він потребує використання лабораторних методів визначення концентрації гормонів в біологічних рідинах, які вимагають значних витрат часу і досить складні для виконання в умовах виробництва. Заявлений нами спосіб добору корів-донорів і телиць-реципієнтів шляхом визначення функції яєчників шкірною алергічною реакцією простий, ефективний та доступний для виконання у виробничих умовах, що усуває недоліки перелічених способів. В основі корисної моделі поставлено завдання створити ефективний спосіб відбору корів-донорів і телиць-реципієнтів, який базується на шкірній реакції тварини при введенні стероїдних гормонів, що є важливим додатковим діагностичним тестом для виявлення патології яєчників у корів і телиць з метою відбору потенційних корів-донорів та телиць-реципієнтів. Ефективність запропонованого способу відбору корів-донорів і телиць-реципієнтів шляхом визначення функції яєчників шкірною алергічною реакцією полягає у наступному: коровам і телицям внутрішньошкірно у верхній третині шиї після відповідної асептичної підготовки (вистригання шерсті, дезінфекційна обробка) одноразово, окремо вводиться 1% розчин прогестерону, 0,1% олійний розчин естрадіолу-дипропіонату і 0,05% олійний розчин естрону (фолікуліну) у дозі 0,02пг/мл. Через 25хв проводиться клінічне обстеження, що полягає у візуальному та пальпаторному дослідженнях місця введення гормонів. При цьому відмічається наявність або відсутність потовщення 41798 4 складки шкіри, набряк або почервоніння. Поряд з цим проводиться клініко-гінекологічне дослідження визначення функціонального стану яєчників з діагностикою жовтого тіла, фолікулів, а також найбільш поширених патологій таких як фолікулярна та лютеїнова кіста, персистентне жовте тіло і гіпофункція яєчників. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак повністю співпадали з ознаками заявленого способу відбору корів-донорів і телиць-реципієнтів шляхом визначення функції яєчників шкірною алергічною реакцією не знайдено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію корисної моделі "новизна". У джерелах патентної і науково-технічної інформації не має відомостей про адекватні способи діагностики відбору тварин, для проведення трансплантації ембріонів, алергічним методом визначення функції яєчників. Таким чином заявлене технічне рішення відповідає критерію корисної моделі "винахідницький рівень" та відповідає всім умовам патентної спроможності корисної моделі відповідно статті 7 розділу II Закону України «Про охорону прав на винаходи і корисні моделі» (№1771 - III, 2000р.) Корисна модель може бути застосований у тваринницьких господарствах різної форми власності, генетико-селекційних центрах, племінних господарствах, пов'язаних з відтворенням поголів'я великої рогатої худоби, а тому відповідає критерію корисної моделі «промислова придатність». Ефективність заявленого способу відбору тварин для проведення трансплантації ембріонів наведена в прикладах конкретного виконання корисної моделі в дослідах з вивчення алергічної реакції на введення статевих гормонів коровам і телицям.Дослідження проведені на коровах української чорно-рябої молочної породи віком 4-7 років, живою масою 450-500кг і на телицях цієї ж породи віком 15-18 місяців, живою масою 350-380кг. Після внутрішньошкірного введення гормонів, клінічного обстеження місця ін'єкції та клініко-гінекологічного дослідження функціонального стану яєчників паралельно проводили визначення концентрації прогестерону, естрадіолу - 17β та естрону в плазмі крові піддослідних тварин імунологічним методом (Резников А.Г. Методы определения гормонов. - К: Наук. Думка. - 1980. - 400с.). Приклад 1 Аналізуючи результати шкірних реакцій на введення окремих гормонів, слід відзначити, що при персистентному жовтому тілі позитивну реакцію (виражений набряк, потовщена складка шкіри, гіперемія, свербіння, в окремих випадках поверхневі некрози) спостерігали при введенні прогестерону у 80,0% корів та 83,3% телиць, при від'ємній реакції на ін'єкції естрадіолу 88,0 % корів і 91,7 % телиць та фолікуліну відповідно 48,0% та 58,3% тварин, (табл.1; 2). 5 41798 6 Таблиця 1 Функціональний стан яєчників і шкірна реакція у корів Функціональний стан яєчників Кількість корів Персистентне жовте тіло Лютеїнова кіста Фолікулярна кіста Гіпофункція яєчників Жовте тіло Фолікул 25 15 30 30 12 10 Шкірна реакція на гормони Прогестерон Ест радіол Естрон (фолікунг/мл пг/мл лін) нг/мл +(20) -(22) -(12) +(12) -(11) +(9) -(21) +(29) +(20) -(26) -(22) -(21) +(8) -(7) -(5) -(6) +(6) +(5) Таблиця 2 Функціональний стан яєчників і шкірна реакція у телиць Функціональний стан яєчників Кількість телиць Персистентне жовте тіло Лютеїнова кіста Фолікулярна кіста Гіпофункція яєчників Жовте тіло Фолікул 12 10 25 24 18 12 Наявність такої гінекологічної патології як лютеїнова кіста супроводжувалась позитивною реакцією на введення прогестерону в 80,0% корів і 80,0% телиць, фолікуліну в 60,0% корів і 40,0% телиць. Відсутність реакції на естрадіол проявили 73,3% корів та 80,0% телиць. При фолікулярних кістах відмічали позитивні шкірні реакції на ін'єкції естрогенів - естрадіолу 73,3% корів, 92,0% телиць, фолікуліну – 66,7% корів, 64,0% телиць, в той час як вираженої чутливості шкіри на прогестерон не встановлено у відповідно 86,7% корів та 72% телиць. При жовтому тілі у більшості випадків спостерігали позитивну реакцію на прогестерон 66,7% і 72,2% та негативну реакцію на естрадіол 58,3% і 66,7% і фолікулін 41,7% корів та 50,0% телиць. Однак залежність шкірної реакції від функціональ Шкірна реакція на гормони Прогестерон Ест радіол нг/мл пг/мл +(10) -(11) +(8) -(8) -(18) +(23) -(20) -(19) +(13) -(12) -(7) +(8) Естрон нг/мл -(7) +(4) +(16) -(17) -(9) +(6) ного стану виражена слабше, ніж при персистентному жовтому тілі і не є закономірною. Аналогічну картину спостерігали при наявності фолікула в яєчнику. У цьому випадку спостерігали позитивну реакцію шкіри на естрадіол 60,0% корів і 58,3% телиць, естрон (50,0%) і (50,0%) та від'ємну реакцію на прогестерон (60,0%) і (66,7%). Найменш інтенсивну шкірну реакцію спостерігали при гіпофункції яєчників. У цьому випадку реакції на введення прогестерону, естрадіолу та фолікуліну були негативними. Приклад 2 Результати внутрішньошкірних проб значною мірою підтверджено проведеними дослідженнями концентрації стероїдних гормонів у крові піддослідних корів і телиць (табл.3; 4). Таблиця 3 Вміст статевих гормонів у крові корів Функціональний стан яєчників Персистентне жовте тіло Лютеїнові кіста Фолікулярна кіста Гіпофункція яєчників Жовте тіло Фолікул Прогестерон, нг/мл 7,6±1,2 12,2±5,5 1,5±0,5 1,2±0,05 2,6±0,14 1,2±0,22 Досліджувані гормони в крові Естрадіол, Естрон (фолікулін), пг/мл нг/мл 2,3±0,5 0,7±0,03 3,4±1,5 1,5±0,5 26,3±4,0 5,6±0,5 2,2±0,05 0,4±0,01 0,9±0,12 0,5±0,08 8,6±0,95 3,2±0,26 7 41798 8 Таблиця 4 Вміст статевих гормонів у крові телиць Досліджувані гормони в крові Функціональний стан яєчників Персистентне жовте тіло Лютеїнові кіста Фолікулярна кіста Гіпофункція яєчників Жовте тіло Фолікул Прогестерон, нг/мл 5,7±0,92 10,4±4,5 1,6±0,33 1,2±0,05 2,1±0,12 1,0±0,22 При персистентному жовтому тілі спостерігається високий рівень прогестерону (7,6±1,2нг/мл) у корів та (5,7±0,92нг/мл) у телиць на фоні низького рівня естрогенів. Лютеїнові кісти супроводжуються аналогічними співвідношеннями досліджуваних гормонів, однак концентрація прогестерону у крові корів була вищою на 60,5%, естрадіолу - на 47,8% та естрону в 2 рази. У крові телиць відповідно 82.4%, естрадіолу на 52,4% та естрону - в 2,2 рази. Зовсім протилежну картину спостерігали при фолікулярних кістах. Тут концентрація прогестерону у крові корів становила 1,5±0,5нг/мл, що у 5-8 разів менше у порівнянні з кістами лютеїнового походження. У крові телиць відповідно 1,6±0,3нг/мл, що у 3,5-6,5 разів менше до досліджених показників лютеїнових кіст. Найнижчі кон Комп’ютерна верстка О. Рябко Естрадіол, пг/мл 2,1±0,40 3,2±1,05 17,2±3,35 2,2±0,05 0,7±0,10 7,6±0,98 Естрон, (фолікулін) нг/мл 0,6±0,03 1,3±0,60 5,2±0,63 0,4±0,01 0,5±0,08 3,4±0,32 центрації стероїдних гормонів виявлені при гіпофункції яєчників, що підтвердилося відсутністю алергічних реакцій на введення цих гормонів. Слід відмітити, що при інтенсивнішній шкірній реакції співвідношення між естрогенами і прогестероном більш виражене. Таким чином, порушення продукції статевих гормонів і підвищена чутливість до них відіграють важливу роль в патогенезі функціональних порушень яєчників. В той же час внутрішньошкірне введення стероїдних гормонів може бути важливим додатковим діагностичним тестом для виявлення патологій яєчників у корів і реципієнтів з метою раціоналізації відбору потенційних твариндонорів та реципієнтів у практиці трансплантації ембріонів. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601