Спосіб одержання екстракту з коренів гадючника шестипелюсткового з гепатопротекторною дією

Спосіб одержання екстракту з коренів гадючника шестипелюсткового з гепатопротекторною активністю, що включає використання коренів рослин і органічного екстрагенту, який відрізняється тим, що подрібнену сировину гадючника шестипелюсткового екстрагують 70% етиловим спиртом та водою, очищеною у співвідношенні 1:15 тричі, одержані витяжки об'єднують, фільтрують, еталон відганяють під вакуумом у роторному випарнику і висушують в апараті до залишкової вологості не більше 5 %. (19) (21) u200810973 (22) 08.09.2008 (24) 25.06.2009 (46) 25.06.2009, Бюл.№ 12, 2009 р. (72) СТРУК ОКСАНА АНАТОЛІЇВНА, ГРИЦИК АНДРІЙ РОМАНОВИЧ, КЛИМЕНКО АНАТОЛІЙ ОЛЕКСІЙОВИЧ (73) СТРУК ОКСАНА АНАТОЛІЇВНА, ГРИЦИК АНДРІЙ РОМАНОВИЧ, КЛИМЕНКО АНАТОЛІЙ ОЛЕКСІЙОВИЧ 3 41976 4 вини (розмір частинок 1-2 мм) екстрагували 1500 Одержаний екстракт умовно позначаємо ГШКмл 70% етанолу в колбі із зворотнім холодильни1. ком на водяному огрівнику при температурі кипінЗа допомогою якісних реакцій і хроматографії ня екстрагента протягом 30 хв. Екстрагент проців розчинах екстрактів виявлені дубильні речовини, джували, а залишок сировини екстрагували в гідроксикоричні кислоти та фенольні сполуки. аналогічних умовах ще 2 рази. Витяжки проціджуРезультати проведених досліджень з встановвали, фільтрати об'єднували, етанол відганяли під лення оптимальних умов одержання екстракту з вакуумом у роторному випарнику і висушували. коренів гадючника шестипелюсткового наведені в Одержаний екстракт являє собою коричневотаблиці 1. чевонувату пухку аморфну масу, гіркого смаку без запаху. Таблиця 1 Оптимальні умови екстракції біологічно активних речовин з коренів гадючника шестипелюсткового Показник >2,5 мм 2-2,5 мм 1,5-2 мм 1,02-1,5мм Розмір частинок 0,05-1,02мм 0,25-0,5мм 0,12-0,25мм 0,08-0,12мм 30% етанол 50% етанол 70% етанол Вид екстрагенту 90% етанол 96% етанол вода очищена 15 хв. 30 хв Час екстракції (екстрагент 70 % етанол) 45 хв 60 хв. 90 хв. 1:50 1:10 Співвідношення сировина - екстрагент (екстра1:15 гент 70% етанол) 1:20 1:50 І II Кратність екстракцій (екстрагент 70 % етанол) III IV Концентрація спирту етилового 70 % вибрана тому, що дозволяє максимально екстрагувати діючі речовини; співвідношення сировинаекстрагент 1:15 тому, що нижче співвідношення не дозволяє максимально екстрагувати діючі речовини, а вище - є технологічно недоцільним. Спосіб одержання екстракту з коренів гадючника шестипелюсткового ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. 200,0 г попередньо висушених і подрібнених до розміру частинок 1-2 коренів гадючника шестипелюсткового екстрагуємо 3000 мл 70 % етилового спирту в круглодонній колбі зі зворотнім холодильником при температурі кипіння екстрагенту протягом 30 хв. Сировину відтискаємо. Екстракцію проводимо ще 2 рази. Екстракти об'єднуємо, фільтруємо, етанол відганяємо під вакуумом у роторному випарнику. Екстракт висушуємо. Вихід сухого екстракту становить Вміст суми екстрактивних речовин, %, х±Dx, n=9 28,2±0,01 22,1±0,01 20,5±0,01 19,8±0,03 15,4±0,03 13,3±0,02 13,4±0,03 10,6±0,03 7,9±0,03 8,9±0,04 10,7±0,01 6,3±0,01 5,1±0,02 13,9±0,05 9,3±0,04 11,5±0,01 10,2±0,06 9,2±0,02 7,4±0,01 5,8±0,025 8,8±0,02 11,6±0,03 9,9±0,03 8,4±0,01 11,6±0,06 1,8±0,04 1,7±0,03 0,8±0,01 24,7%, втрата в масі при висушуванні становить 1,6 %. Приклад 2. 200,0 г попередньо висушених і подрібнених до розміру частинок 1-2 коренів гадючника шестипелюсткового екстрагуємо 3000 мл води очищеної в круглодонній колбі зі зворотнім холодильником при температурі кипіння екстрагенту протягом 30 хв. Сировину відтискаємо. Екстракцію проводимо ще 2 рази. Екстракти об'єднуємо, фільтруємо, етанол відганяємо під вакуумом у роторному випарнику. Екстракт висушуємо. Вихід сухого екстракту становить 23,96%, втрата в масі при висушуванні становить 1,8%. Дослідження гепатозахисних властивостей. Дослідження проводили на 31 білому щурі-самцю масою 0,18-0,25 кг, розділених на 4 групи. Для відтворення гострого токсичного ураження печінки у тварин першої - третьої груп тетрахлорметан вводили у вигляді 50% олійного розчину підшкір 5 41976 6 но з розрахунку 0,8мл/100 г маси тіла тварин прому альдегіду (ΜΑ), активності трансаміназ - алатягом двох діб з проміжком 24 годин. Досліджунінтрансамінази (АлАТ), аспартаттрансамінази ваний екстракт і препарат порівняння вводили (АсАТ) та аргінази сироватки крові. тваринам за 1 год до і через 2 год після гепатотПоряд з цим визначали активність холінестеропної отрути [4, 5]. рази, що відображає білок синтезуючу функцію і Тваринам першої групи вводили водно лужної фосфатази, що засвідчує про застійні явиспиртовий екстракт з коренів гадючника шестища в печінці. пелюсткового в дозі 2,5 мг/0,1 кг маси тіла; тваРівень кінцевого продукту ПОЛ - малонового ринам другої групи - препарат «Силібор в дозі 2,5 альдегіду оцінювали за методикою E.H. Коробеймг/0,1 кг маси тіла. Четверта група - інтактні тванікової [6]. рини. Визначення активності трансаміназ АлАТ і Смертність у контрольній групі становила АсАТ проводили уніфікованим динітрофенілгід16,7 %, в інших групах всі тварини залишилися разиновим методом Райтмана - Френкеля за доживими до кінця експерименту. Щурів декапітупомогою стандартного набору реактивів фірми вали на третю добу з першого моменту введення «SIMKO Ltd». [7]. тетрахлорметану. Про фармакотерапевтичну Активність аргінази в сироватці крові визнаефективність досліджуваних екстрактів робили чали за методом Сніпачо у модифікації В.А. Хрависновок на основі біохімічних та функціональних мова і Г.Г. Листопад [8]. показників стану печінки, які визначали через 24 Гемоглобін (Нb), еритроцити та лейкоцити години після останнього введення тетрахлормевизначали за загально прийнятими методами [9]. тану. Активність лужної фосфатази визначали стаІнтенсивність ураження клітинних мембран ндартними наборами реактивів фірми «Філіпс печінки оцінювали по рівню кінцевого продукту Діагностика. Результати бохімічних і гематологічперекисного окислення ліпідів (ПОЛ) - малоновоних показників наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Вплив екстракту коренів гадючника шестипелюсткового на біохімічні та функціональні показники стану печінки Біохімічні і гематологічні показники Кількість тварин Доза мг/0,1 к г АлАТ, мкмоль/ год.мл АсАТ, мкмоль/ год.мл МА, сироватка крові Нмоль/мл МА, гомогената печінки, мкмоль/г Аргіназа, мкмоль/0,1мл Лужна фосфатаза, мк/кат/л Холінестераза, мк/кат/л Η в, г/л Еритроцити, Т/л Лейкоцити, Г/л ГШК-1 9 2,5 0,213±0,002 0,165±0,002 3,62±0,037 32,0±0,62 0,301±0,006 1,70±0,021 78,90±0,80 122±1,90 6,22±0,13 15,1±0,44 Результати досліджень (табл. 2) показали, що введення тваринам тетрахлорметану приводить до ураження печінки, про що свідчить порушення функції мембран та органел гепатоцитів на основі значного збільшення показників ПОЛ МА, активності АлАТ, АсАТ та аргінази, що являються високо специфічними індикаторами функції мембран гепатоцита та його органел. Рівень цих показників відповідно зростає в декілька разів в порівнянні з інтактними тканинами. Поряд з цим активність холінестерази сироватки крові, яка відображає білок синтезуючу функцію гепатоцита достовірно знижувалась і становила 67 % від норми. Активність лужної фосфатази сироватки крові, синтез якої пов'язаний з плазматичною мембраною гепатоцитів та мікроворсинками жовчних каналів значно зростає, що свідчить про пору Об'єкти дослідження «Силібор» 50% олійний р-н ССІ4 8 6 2,5 0,8 0,22±0,003 1,36±0,021 0,179±0,004 1,08±0,021 3,86±0,048 5,81±,090 33,8±1,17 62,4±1,12 0,312±0,003 0,578±0,008 1,84±0,042 2,12±0,009 72,4±1,03 57,0±1,40 118±0,91 101±1,74 6,30±0,11 6,18±,08 14,8±0,35 16,8±0,37 Інтактні тварини 8 ----0,19±0,011 0,16±0,01 3,52+0,097 26,4±1,5 0,292±0,01 1,58+0,015 84,4±1,98 134±0,96 6,40±0,09 12,9±0,27 шення секреції гепатоцита в жовч і розвиток застійних явищ в печінці. Значення цих показників при застосуванні водно-спиртового екстракту коренів гадючника шестипелюсткового обумовлювано вірогідне наближення до нормалізації або нормалізацію досліджених показників. Наведені результати свідчать, що застосування водно-спиртового екстракту з гадючника шестипелюсткового при гострому токсичному ураженні печінки, значно знижує інтенсивність процесу перекисного окислення ліпідів та зменшує токсичність дії тетрахлорметану, забезпечуючи гепатозахисну дію. Поряд з цим обумовлює покращення білоксинтезуючої функцію гепатоцитів та зменшує застійні явища в печінці. Література: 1. Патент на корисну модель №12351. Спосіб одержання екстракту з коренів тирличу ваточни 7 41976 8 ковидного, який проявляє гепатозахисну активКиїв: Видавничий Дім «Авіцена». - 2001. - С.334ність // Цвеюк Н.П., Грицик А.Р., Клименко А.О. 339. №200500556; Заяв. 21.01.2005; Опубл. 6. Коробейникова E.H.. Модифікація визна15.02.2006; Бюл.2. чення продуктів перекисного окислювання ліпідів 2. Визначник рослин України. Видання друге. у реакції з тіобарбітуровою кислотою // Лаб. дело АН УРСР. - Київ, 1965. – С.368-371. № 7. - 1989. - С.8 - 10. 3. Гаммерман А.Ф., Кадаєв Г.Н., Яценко7. Лабораторні методи дослідження в клініці / Хмелевский A.A. Лекарственные растения (расПод. ред. B.B. Меньшикова. - Μ.: Медицина. тения-целители): Справочное пособия Μ.: 1987. - С.189 - 190. Высш.шк.,- 1983. - С.106-109. 8. Храмов В.А, Листопад Г.Г. Модификация 4. Позняков B.C., Иванов Н.Г. Изменение фуметода определения орнитина по Снипаччо и ее нкционального состояния у крыс при воздействии использование для количественного определечетыреххлористого углерода // Токсикология нония сывороточной аргиназы // Лаборатория дело. вых промышленных хим. веществ. - М.: Медици- 1973. - №10, С.591 - 592. на, 1979. - вип.15. - С.87-89. 9. Руководство по клинической лабораторной 5. Доклінічні дослідження лікарських засобів. диагностике/ Под ред. М.А. Базарнова. За ред. член. кор. АНУ України О.В. Стефанова. К.:«Вища шкода».-1982.-Т.2.-С.35-48. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601