Спосіб індукції поліовуляції у корів-донорів

Спосіб індукції поліовуляції у корів-донорів, що включає використання фолікулостимулюючого гормону (ФСГ), тривітаміну, лецитину, твіну, який 3 46282 ров-доноров при трансплантации эмбрионов: А.с. № 1729352 СССР, МКИ А 01К67/02 /И.И. Розгони, Б.В. Смолянинов, Т.Я. Чорненький, A.M. Бучко, Д.Э. Кобулей, Ю.И. Сливчук (СССР). - № 4351449/15; Заявл. 25.11.87; Опубл. 30.04.02, Бюл.№ 16.-8с). Недоліком даного способу є те, що він потребує використання дорогих препаратів імпортного виробництва. Найбільш близьким аналогом є спосіб викликання поліовуляції у корів-донорів при трансплантації ембріонів (Ковалів Л.М., Розгоні 1.1. Спосіб викликання полі овуляції у корів-донорів при трансплантації ембріонів. Патент на винахід №52613. Опублікований 15.01.2003. - Бюл. № 1. Недоліком його є те, що він передбачає застосування у складі препарату цілого комплексу дорогих біологічно активних компонентів, які вводяться з ФСГ. Крім того, при позитивному поєднанні вітамінів з ФСГ недоцільно застосовувати екзогенний естрадіол дипропіонат, оскільки ФСГ стимулює виділення ендогенного естрадіолу. Заявлений нами спосіб індукції поліовуляції у корів-донорів застосуванням комплексу ліпосома ФСГ є простим, ефективним та доступним для виконання у виробничих умовах, що усуває недоліки перелічених способів. В основу корисної моделі було поставлено завдання розробити спосіб викликання множинної овуляції у корів-донорів при багаторазовому їх використанні для одержання позитивних і стабільних результатів ембріопродукції тварин-донорів. Поставлене завдання вирішується шляхом використання ФСГ, тривітаміну, лецитину, твіну, до якого додатково вводять диметилсульфоксид при наступних співвідношеннях компонентів на 1 голову: ФСГ - 32-50мг, тривітамін - 3-5мл, лецитин 0,8-1,2мл, твін - 0,1-0,2мл, диметилсульфоксид до 10% концентрації. Ефективність запропонованого способу індукції поліовуляції у корів-донорів полягає у наступ 4 ному: проводиться дворазова ін'єкція препарату ФСГ у складі ліпосомальної емульсії, яка включає тривітамін, лецитин, твін, диметилсульфоксид. Застосування комплексу ліпосома-ФСГ для індукції множинної овуляції у корів забезпечує одержання стабільніших результатів ембріопродукції (4 доброякісні ембріони) протягом усього періоду використання постійних донорів. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак повністю співпадали з ознаками заявленого способу індукції поліовуляції у корів-донорів шляхом застосування фолікотропіну у складі ліпосомальної емульсії для забезпечення одержання максимальної кількості морфологічно якісних ембріонів протягом усього періоду використання постійних донорів не знайдено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію винаходу (корисної моделі) «новизна». Корисна модель може бути застосований у тваринницьких господарствах різної форми власності, генетико-селекційних центрах, племінних господарствах пов'язаних з відтворенням поголів'я великої рогатої худоби. Ефективність заявленого способу індукції поліовуляції у корів-донорів наведена в прикладах конкретного виконання корисної моделі в дослідах з вивчення впливу фолікулостимулюючого гормону (ФСГ) з ліпосомальною емульсією на рівень множинної овуляції та якість ембріопродукції у корів-донорів. Для дослідження в СП «Україна-Лайвсток» було відібрано 63 корови чорно-рябої голштинізованої худоби віком 4-7 років і сформовано 4 групи: дві контрольні і дві дослідні. Гормональну індукцію множинної овуляції проводили, використовуючи препарат «ФСГ-п» (США) за традиційною 4денною схемою, яка передбачає дворазові щоденні ін'єкції. Коровам-донорам дослідних груп індукцію суперовуляції проводили дворазовим введенням препарату «ФСГ-п» з використанням ліпосомальної емульсії, (табл. 1). Таблиця 1 Схема проведення досліджень Дози ФСГ та групи тварин Дні циклу 0-й 8-й 9-й 10-й 11-й 12-й 13-й 19-й 50мг 32мг дослідна контрольна дослідна контрольна Дворазове введення естрофану в сумарній дозі 1000мкг клопростенолу з інтервалом 11 днів. статева охота (спостереження за проявами) «ФСГ-п» 8мг і 8мг «ФСГ-п» 25мг «ФСГ-п» 5мг і 5мг «ФСГ-п» 16мг «ФСГ-п» 7мг і 7мг «ФСГ-п» 4мг і 4мг «ФСГ-п» «ФСГ-п» «ФСГ-п» «ФСГ-п» 6мг і 6мг+2мл естрофа4мг і 4мг+2мл естрофа25мг + 2мл естрофану 16мг+2мл естрофану ну ну «ФСГ-п» 4мг і 4мг «ФСГ-п» 3мг і 3мг Штучне осіменіння Штучне осіменіння Вимивання ембріонів і їх морфологічна оцінка 5 46282 Спосіб виготовлення препарату. Для виготовлення ліпосомальної емульсії у хімічну склянку з поділками вносять 3-5мл тривітаміну, 0,8-1,2мл 10% ефірного розчину лецитину, 0,1-0,2мл твіну 80. Дистильованою водою об'єм доводять до 10 мл і добавляють диметилсульфоксид до 10% концентрації. Вмістиме хімічної склянки перемішують скляною паличкою і диспергують на ультразвуковому диспергаторі за частоти 35кГц впродовж 3хв. до утворення тонкої ліпосомальної емульсії білого кольору. В іншій хімічній склянці 32-50мг ФСГ розчиняють у 5мл фізіологічного розчину. Введення в препарат диметилсульфоксиду забезпечує кращу проникливість складових компонентів препарату та проявляє антибактеріальні властивості. Комплексний гормонально-вітамінний препарат готують розчиненням ФСГ готовою емульсією гормонально-вітамінного препарату перед введенням або при диспергуванні на диспергаторі УЗДН-1 при частоті 35кГц впродовж 5с Штучне осіменіння корів-донорів проводили триразово, цервікальним методом з ректальною фіксацією шийки матки, використовуючи подвійну дозу сперми бугаїв голштинської породи згідно із закріпленням. Нехірургічне вимивання ембріонів проводили, згідно методики (Буркат В.П. Довідник з репродуктивної біотехнології великої рогатої худоби [Текст] /Буркат В.П., Кравців Р.И., Влізло В.В. і співав. За редакцією Шаловила С.Г. - Львів.-2004.-150 с). Дворазова ін'єкція препарату «ФСГ-п» в обох досліджуваних дозах у складі ліпосомальної емульсії викликає множинну овуляцію у корів-донорів 6 на рівні стандартної схеми введення (табл. 2). Рівень поліовуляції у корів усіх піддослідних груп був приблизно однаковий, за винятком дослідної групи з дозою ФСГ 50мг, де кількість жовтих тіл на 12,4% менша, ніж у контрольних тварин. За кількістю одержаних ембріонів на донора суттєвих розбіжностей між групами тварин, аналогічно як і за відсотком позитивних донорів не спостерігалося. Якісна характеристика ембріонів значно відрізнялася у різних групах тварин при вивченні високих доз ФСГ. Кількість морфологічно якісних ембріонів у корів дослідної групи була на 11,7% меншою, ніж у контрольних тварин. Кількість дегенерованих ембріонів і незапліднених яйцеклітин у донорів дослідної групи відповідно на 21,8% та 22,6% була меншою порівняно з контрольними коровами. При застосуванні низьких доз препарату «ФСГ-п» у складі ліпосомальної емульсії суттєвих відмінностей між групами корів-донорів за кількістю морфологічно якісних, дегенерованих ембріонів та яйцеклітин не встановлено, що вказує на можливість використання комплексу ліпосома-ФСГ для індукції поліовуляції. Кількість доброякісних ембріонів при дозі «ФСГ-п» 32мг була меншою на 16,3% - 21,2%, ніж при високих дозах ФСГ на фоні збільшення кількості дегенерованих ембріонів на 45,7% - 72,2% та яйцеклітин на 18,5% - 52,0%. Отже, використання комплексу ліпосома - ФСГ забезпечує дозовану дію гормону на функцію яєчників, що проявляється одержанням достатньої кількості морфологічно повноцінних ембріонів і проявляє поліовулюючу дію, як при максимальній (50мг), так і мінімальній (32мг) дозах ФСГ. Таблиця 2 Рівень множинної овуляції та якість ембріопродукції корів-донорів Дози ФСГ та групи тварин Показники Кількість корів-донорів, n Прореагувало суперовуляцією, n-% Рівень суперовуляції Одержано ембріонів, всього в т.ч. доброякісних, n-% дегенерованих, n-% яйцеклітин, n-% Розподіл ВІДМІННИХ ембріонів, % Одержано ембріонів на донора, всього М±m доброякісних, М±m дегенерованих, М±m яйцеклітин, М±m 50мг 32мг контрольна 14 дослідна 16 контрольна 18 дослідна 15 12-85,7 13-81,2 14-77,8 11-73,3 10,58±1,32 88 63-71,6 16-18,2 9-10,2 9,38±0,92 94 61-64,9 21-22,3 12-12,8 8,07±0,73 106 58-54,7 32-30,2 16-15,1 8,36±0,95 81 43-53,1 26-32,1 12-14,8 48,9 40,4 34,9 37,0 7,33±0,62 7,23±0,86 7,57±0,78 7,36±0,67 5,25±0,43 1,33±0,12 0,75±0,09 4,69±0,38 1,62±0,14 0,92±0,08 4,14±0,35 2,29±0,19** 1,14±0,10* 3,91±0,33 2,36±0,21* 1,09±0,09 Примітка: статистична вірогідність контрольних і дослідних груп залежно від дози ФСГ *-р