Спосіб диференційної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби

Спосіб диференційної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби, що полягає у визначенні рівня специфічних антитіл у сироватці крові великої рогатої худоби в реакції пасивного гемолізу, модифікованій з обліком результатів фотометричним методом, який відрізняється тим, що для диференціації використовують антигени з мікобактерій туберкульозу бичачого, людського і пташиного видів. (19) (21) u200909643 (22) 21.09.2009 (24) 10.03.2010 (46) 10.03.2010, Бюл.№ 5, 2010 р. (72) ДЯЧЕНКО ГАННА МИХАЙЛІВНА, КРАВЧЕНКО НАТАЛІЯ ОЛЕКСАНДРІВНА, ГОЛОВАЧ ОЛЕКСАНДР ВОЛОДИМИРОВИЧ, ДМИТРУК ОЛЕНА МИКОЛАЇВНА (73) ІНСТИТУТ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКОЇ МІКРОБІОЛОГІЇ УКРАЇНСЬКОЇ АКАДЕМІЇ АГРАРНИХ НАУК 3 48227 Облік результатів реакції проводять на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 400нм, фільтрі №3, в кюветах з товщиною робочого шару 5мм. Спектр і титр протитуберкульозних антитіл у досліджуваній сироватці крові тварин визначають в умовних одиницях за різницею між показниками екстинції надосадкової рідини у кожній дослідній та контрольній пробірках. Запропонований спосіб диференційної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби високоспецифічний і високочутливий, простий у виконанні та доступний для широкої ланки діагностичних ветеринарних лабораторій. Отримання 4 результатів реакції фотометричним методом виключає суб'єктивність. Спосіб випробували з сироватками крові великої рогатої худоби з господарств зони Чернігівського Полісся з різною щодо туберкульозу епізоотичною ситуацією. Експериментально визначено, що діагностичний титр протитуберкульозних антитіл у досліджуваній сироватці крові великої рогатої худоби становить 0,05 умовних одиниць і вище. Приклад 1. Вивчення чутливості та специфічності запропонованого способу диференційної діагностики при дослідженні сироваток крові ВРХ з неблагополучного щодо туберкульозу господарства. Таблиця 1 Титр і спектр антитіл у сироватках крові великої рогатої худоби з неблагополучного щодо туберкульозу господарства Номера проб досліджуваних сироваток 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 М±m Титр специфічних антитіл (в ум. од.) до Mycobacterium bovis Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium avium 0,075 0,010 0,007 0,095 0,003 0,009 0,140 0,030 0,018 0,085 0,015 0,006 0,127 0,005 0,037 0,112 0,009 0,028 0,120 0,007 0,018 0,120 0,035 0,024 0,125 0,021 0,036 0,092 0,013 0,016 0,170 0,025 0,011 0,140 0,011 0,012 0,115 0,019 0,031 0,143 0,022 0,007 0,140 0,007 0,006 0,147 0,003 0,017 0,137 0,021 0,012 0,132 0,025 0,017 0,155 0,014 0,016 0,132 0,016 0,015 0,112 0,009 0,027 0,118 0,007 0,024 0,118 0,025 0,033 0,136 0,029 0,036 0,122 0,031 0,007 0,124±0,004 0,015±0,008 0,018±0,003 Дані табл. 1 свідчать про 100% чутливість запропонованого способу диференційної діагностики, оскільки в усіх 25 досліджуваних пробах сироваток крові корів з неблагополучного щодо туберкульозу господарства були виявлені титри антитіл, що значно перевищували діагностичний (0,05 умовних одиниць екстинції) титр до Mycobacterium bovis за відсутності або наявності нижчих за діагностичний титр специфічних антитіл до збудників туберкульозу людини і птахів. Приклад 2. Визначення специфічності запропонованого способу диференційної діагностики туберкульозу за результатами дослідження сироваток крові тварин з благополучного щодо туберкульозу великої рогатої худоби господарства. 5 48227 6 Таблиця 2 Титри специфічних антитіл у сироватках крові великої рогатої худоби з благополучного щодо туберкульозу господарства Номера проб досліджуваних сироваток 1 2 3 4 5 6 M±m Титр специфічних антитіл (в ум. од.) до Mycobacterium bovis Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium avium 0 0,087 0,025 0,01 0,040 0,035 0,01 0,035 0,050 0 0,035 0,005 0 0 0,005 0,025 0,025 0,035 0,007±0,004 0,022±0,012 0,025±0,008 Аналіз представлених в табл. 2 результатів свідчить про 100% специфічність запропонованого способу диференційної діагностики. Так, у сироватках крові великої рогатої худоби з благополучного щодо туберкульозу господарства специфічні антитіла до збудника туберкульозу бичачого виду були відсутні або їх титр був значно нижчий за діагностичний. Приклад 3. Вивчення чутливості і специфічності запропонованого способу диференційної діагностики туберкульозу великої рогатої худоби при дослідженні сироваток крові тварин з іншого благополучного щодо туберкульозу господарства у порівнянні з симультанною пробою. Таблиця 3 Титри специфічних антитіл у сироватках крові великої рогатої худоби з благополучного щодо туберкульозу господарства у порівнянні з симультанної пробою Номера проб сироваток 1 2 3 4 5 6 7 8 9 М±m Інтенсивність шкіряних реакцій (мм) на Титр специфічних антитіл (в ум. од.) до ППД ААМ Mycobacterium bovis 4 8 6 5 5 5 5 5 10 5,88±0,63 6 10 8 8 5 7 9 8 15 7,77±1,65 0,026 0,020 0,008 0,022 0,023 0,020 0,020 0,005 0 0,016±0,004 За результатами симультанної проби, як видно з табл. 3, у великої рогатої худобиз обстежуваного благополучного щодо туберкульозу господарства більш виражені шкіряні реакції (за винятком тварини №5) спостерігаються на ААМ, що свідчить про сенсибілізацію тварин атиповими мікобактеріями. Щодо серологічного обстеження, то титр протитуберкульозних антитіл у РПГМ до збудників туберкульозу всіх трьох видів є у 5-10 разів нижчим за діагностичний. У сироватці крові тварини №5 виявлено антитіла до Mycobacterium tuberculosis, що може бути поясненням однакової інтенсивності реакцій у симультанній пробі на ППД-туберкулін та ААМ. Представлені дані у табл. 3 свідчать про 89-100% чутливість і специфічність запропонованого способу диференційної діагностики туберкульозу великої рогатої худоби. Mycobacterium tuberculosis 0,018 0,018 0,008 0,028 0,053 0,030 0,034 0,035 0,020 0,027±0,006 Mycobacterium avium 0,016 0 0 0 0,033 0 0,027 0,030 0,003 0,012±0,005 Таким чином, наведені приклади підтверджують високу специфічність і високу чутливість запропонованого способу диференційної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби. Джерела інформації: 1. Інструкція про заходи профілактики та оздоровлення тваринництва від туберкульозу. - Київ. 1994. - 16с. 2. Настанова по діагностиці туберкульозу тварин та птиці. - Київ. - 1994. - 39с. 3. Пат. №18970 Україна МПК (2006) А61К 39/04 Спосіб прискореної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби / Г.М. Дяченко, Н.О. Кравченко, О.В. Головач, О.М. Дмитрук.; заявник і патентовласник Інститут сільськогосподарської мікробіології Української академії аграрних. №u200607249; заявл. 30.06.2006; опубл. 15.11.2006, Бюл. №11. - 4с. 7 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 48227 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601