Спосіб оцінки функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові

Спосіб оцінки функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові, який включає мікроскопічне, морфологічне дослідження мазка із клітин пацієнта, який відрізняється тим, що для приготування мазка використовують клітини крові і при морфометричному дослідженні нейтрофільних гранулоцитів вимірюють середні значення периметра та площі клітин і при збільшенні периметра і площі клітин більш ніж у 1,3 рази, в порівнянні з нормою, констатують зниження функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові Винахід відноситься до медицини і може бути використаний для оцінки функціональної активності системи нейтрофільних гранулоцитів крові ВІДОМІ способи оцінки функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові, які ґрунтуються на імунологічному аналізі, який вимагає постановки ряда методів визначення стану фагоцитарного процесу відсоток фагоцитуючих клітин (фагоцитарний індекс) і середню КІЛЬКІСТЬ поглинутих мікробних часток Candida albicans одним фагоцитом (фагоцитарне число) [1, 2] Недоліком цих способів є трудомісткість виконання дослідження, суб'єктивність оцінки та необхідність спеціальних реактивів Найближчим аналогом є спосіб оцінки функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові, який включає мікроскопічне дослідження мазку клітин крові пацієнта, складається із приготування мазку крові та проведення реакції за відновленням нітросинього тетразолія (НСТ-тест) нейтрофільними гранулоцитами, визначення показника спонтанного (Сп НСТ) і стимульованого Candida albicans (Ст НСТ) НСТ-тесту та показника резерву (ПР) нейтрофільних гранулоцитів крові [3] Недоліком аналогу є низька точність оцінки, яка обумовлена суб'єктивністю оцінки, низькою вірогідністю наявності в мазку тієї КІЛЬКОСТІ фагоцитарно позитивних клітин, яка відображає функціональну активність системи нейтрофільних гранулоцитів крові в цілому Задачею винаходу є розробка такого способу оцінки функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові, який за рахунок вимірювань середніх значень периметру і площі клітин забезпечував би більшу точність оцінки Поставлена задача вирішується тим, що в способі оцінки функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові, який включає мікроскопічне, морфологічне дослідження мазку із клітин пацієнта, згідно з винаходом для приготування мазку використовують клітини крові і у випадку коли при морфометричному дослідженні нейтрофільних гранулоцитів крові отримують слідуючі зміни середніх значень параметрів клітини збільшення периметру і площі клітин більш ніж у 1,3 рази, в порівнянні з нормою, діагностують зниження функціональної активності нейтрофільних гранулоцитів крові Приготування мазку із крові та проведення морфометричного аналізу нейтрофільних гранулоцитів крові збільшення середніх значень периметру і площі клітин більш ніж у 1,3 рази дозволяє підвищити точність оцінки, так як використовують об'єктивні критерії оцінки параметрів клітин та математичну обробку результатів дослідження Вказані в формулі винаходу межі зміни параметрів клітин отримані в результаті морфометричного дослідження 10 донорів та 10 хірургічних хворих представлені в таблиці 1, 2 Спосіб виконують таким чином Беруть кров із пальця і наносять на предметне скло, готують мазки, фіксують 10 хвилин у 96% етиловому спирті, фарбують 15 хвилин за методом РомановськогоГімза та проводять морфометричний аналіз при якому вимірюють середні значення периметру і площі клітин у 11 випадково обраних клітин в різних полях зору при збільшені мікроскопу 400 Подальшу стандартизацію зображення проводять за допомогою аналізатору О ^00 ю 54840 Таблиця 1 Середні значення параметрів нейтрофільних гранулоцитів донорів (п = 10) № п п клітин донорів 1 донор 1 кл 2 кл 3 кл 4 кл 5 кл 6 кл 7 кл 8 кл 9 кл 10 кл 11 кл 2 д 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 3 д 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 4 д кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 5д 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Площа клітин (мкм2) 163,1 192,4 174,2 175,9 200,7 194,1 208,6 137,2 154,1 163,7 194,1 208,6 137,2 154,1 163,7 132,9 214,3 132,9 214,3 145 6 203,1 200,3 155 6 201,1 206,3 211,7 216,4 209,5 163,8 225,7 218,0 183,8 204,7 210,8 182,3 182,9 173,3 185,1 192,9 198,4 171,9 145,8 194,0 215,4 184,8 171,7 159,6 204,0 144,4 208,0 222,7 178,9 228,2 173,5 200,4 Периметр клітин (мкм) 48,8 60,1 48,5 48,1 43,8 52,5 52,1 43,2 45,8 46,5 52,5 52,1 43,2 45,8 46,5 41,9 54,0 41,9 54,0 44,8 56,0 52,1 45,2 58,1 58,0 58,0 54,2 64,0 54,3 54,6 54,9 49,4 54,2 52,2 49,9 49,5 47,7 55,0 52,2 51,7 47,1 47,0 52,2 53,2 50,0 49,4 45,6 52,4 37,5 51,4 534 50,8 58,4 48,4 52,2 № п п клітин донорів 6 донор 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 7 донор 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 8 донор 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 9 донор 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 10 донор 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Площа клітин (мкм2) 168,4 187,9 156,6 184,0 1623 166,3 124,7 200,0 231,6 187,9 178,4 210,3 170,4 203,8 200,0 202,1 139,7 177,6 166,6 190,0 160,8 144,1 189,6 200,2 193,8 222,1 168,0 194,5 205,1 170,2143,9 164,5 207,1 174,2 200,7 171,9 213,2 126,0 180,0 190,8 155,5 190,2 152,6 176,8 196,2 158,5 179,3 208,6 227,4 195,5 174,6 162,3 154,9 190,0 154,8 Периметр клітин (мкм) 48,8 50,3 45,6 51,2 45,2 48,8 40,8 51,4 55,6 53,0 49,8 53,3 46,5 53,4 53,7 48 3 51,2 53,4 42,7 49,0 49,8 45,0 49,7 51,6 49,8 55,9 47,7 49,8 56,1 47,0 43,3 48,4 54,1 48,0 50,5 50,6 52,4 40,1 49,0 49,9 46,1 50,9 43,8 48,9 52,1 46,6 50,7 52,7 55,3 51,6 48,7 46,7 45,2 49,0 43,2 54840 Таблиця 2 Середні значення параметрів неитрофільних гранулоцитів хворих № п п клітин хворих 1 Хв А 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 2Хв С 2 3 4 5 6 7 8 9 10 3 Хв Д 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 4 Х в 1 кл 2 3 4 5 Площа клітин (мкм2) Периметр клітин (мкм) 252,60 217,75 248,60 255,17 281,56 238,53 256,64 290,44 259,05 262,85 265,61 219,04 213,87 232,00 220,30 231,60 231,20 271,13 245,26 198,52 255,95 184,20 237,00 211,11 256,90 239,50 229,90 203,95 216,28 234,10 186,79 170,06 185,10 181,87 198,70 176,18 183,08 196,80 66,10 64,00 55,09 69,30 67,00 69,00 60,00 64,00 68,00 64,04 66,41 65,80 58,55 53,63 46,25 58,12 61,06 59,87 65,18 58,73 56,66 65,10 50,00 53,35 68,56 62,10 60,05 56,93 52,96 59,58 49,82 46,81 54,98 52,44 55,70 48,42 49,90 53,40 № п п клітин донорів 6Хв 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 7Хв 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 8Хв 1 кл 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 9Хв 1 кл 2 3 4 5 Площа клітин (мкм2) 202,48 220,30 226,00 183,86 167,04 177,82 174,63 213,70 163,68 207,31 198,52 196,10 174,97 181,61 231,50 200,60 177,82 182,56 186,87 179,37 204,21 195,24 214,64 194,90 208,86 184,46 207,23 237,24 184,80 210,07 225,70 273,10 253,71 211,45 199,81 186,18 221,50 189,80 Периметр клітин (мкм) 51,51 43,13 44,74 49,01 48,66 50,65 48,13 45,76 47,63 53,50 52,39 52,29 48,96 48,89 50,82 48,18 48,25 48,99 49,57 50,56 53,80 51,92 53,59 45,29 52,99 51,04 54,28 58,19 54,38 55,91 67,54 63,42 63,36 54,60 53,40 52,32 47,55 50,78 54840 1,3 рази, в порівнянні з нормою, констатують зниження функціональної активності неитрофільних гранулоцитів крові Норму визначали при морфометричному дослідженні, як середні значення периметру і площі клітин та оптичної ЩІЛЬНОСТІ цитоплазми неитрофільних гранулоцитів крові у 10 здорових осіб При цьому середні значення складали у донорів - периметр клітин 50,2 ± 2,4мкм, площа клітин 185,4 ± 5,2мкм2 У 10 хірургічних хворих середні значення складали периметр 61,3 ± 1,4мкм, площа клітин 230,8 ± 12,3мкм2 у 11 випадково обраних клітин в різних полях зору при збільшені мікроскопу 400 Приклад 1 У хворого брали кров із пальця, наносили клітинний матеріал на предметне скло, робили мазок, фіксували 10 хвилин у 96% етиловому спирті, фарбували 15 хвилин за методом Романовського-Пмза та проводили вимір неитрофільних гранулоцитів при цьому середні значення складали периметр клітин 55,1 ± 2,9мкм, площа клітин 193,2 ± 7,8мкм2 у 11 випадково обраних клітин в різних полях зору при збільшенні мікроскопу 400, що дозволило за результатами проведенного морфометричного аналізу неитрофільних гранулоцитів крові встановити відсутність у пацієнта зниження функціональної активності неитрофільних гранулоцитів крові Приклад 2 У хворого В брали кров із пальця, наносили клітинний матеріал на предметне скло, робили мазок фіксували 10 хвилин у 96% етиловому спирті, фарбували 15 хвилин за методом Романовського-Пмза та проводили вимір неитрофільних гранулоцитів, при цьому середні значення складали периметр клітин 62,1 ± 1,3мкм, площа клітин 229,8 ± 11,9мкм2 у 11 випадково обраних 8 клітин в різних полях зору при збільшенні мікроскопу 400, що дозволило за результатами проведенного морфометричного аналізу неитрофільних гранулоцитів крові встановити наявність у пацієнта зниження функціональної активності неитрофільних гранулоцитів крові Запропонований спосіб оцінки застосовано у 10 хворих Результатами досліджень встановлено зниження функціональної активності неитрофільних гранулоцитів крові у 8 хворих, у 2 хворих - нормальну функціональну активность неитрофільних гранулоцитів крові Подальші дослідження підтвердили отримані результати В той час коли аналогом встановлено зниження функціональної активності неитрофільних гранулоцитів крові у 6 хворих, у 4 хворих - нормальну функціональну активность неитрофільних гранулоцитів Проведені подальші дослідження встановили нормальну функціональну активність клітин тільки у 2 хворих Таким чином, порівняння з аналогом показує, що застосування запропонованого способу дозволяє підвищити точність оцінки функціональної активності неитрофільних гранулоцитів крові Джерела інформації 1 Асадов И Д , Нумеров Л С , Мирзоева М Э Связь между фагоцитарной функцией и цитохимическими показателями нейтрофилов крови // Лабдело —1990 — № 1 1 — С 19-21 2 Дранник Г Н Клиническая иммунология и аллергология — Одесса Арт График, 1999 — С17-18 3 Дранник Г Н , Коваль О В Способ оценки функциональной активности системы первичной антимикробной защиты // Лаб дело 1985 — № 10 — С 617-620 — Найближчий аналог Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24