Спосіб одержання ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної з протимікробною та репаративною активністю і лікарський засіб, що містить даний ліпофільний екстракт

Винахід відноситься до фармації та медицини, а саме до лікарських засобів рослинного походження та способів одержання біологічно активних діючих речовин таких засобів, зокрема до способу одержання біологічно активної субстанції - ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної з протимікробною та репаративною активністю, та лікарського засобу на його основі, який може бути використаний для ефективного лікування септичних та асептичних ран в дерматології та хір ургії. Відомий спосіб отримання ліпофільного екстракту з природної сировини - обніжжя бджолиного (патент України №25670 кл. А61К35/64 1998р.), оснований на екстракції подрібненої сировини зрідженим газом дихлордифторметаном при тиску 4,5-5,5кгс/см 2, що перевищує атмосферний, при співвідношенні сировина екстрагент 1:5-1:6 з наступним видаленням екстрагенту. До недоліків зазначеного способу можна віднести високу вартість та складність технологічного процесу, а також необхідність використання спеціального обладнання для проведення екстракції при високому тиску. Найближчий до заявленого за технологічними прийомами є спосіб отримання поліфенолів з гепатопротекторною, жовчогінною, антиоксидантною та аналептичною діями (патент РФ №2018315 кл. А61К35/78 1994р.) шляхом екстракції трави астрагала бунговського при співвідношенні сировина - екстрагент 1:4-5 80% етанолом в реакторі з підігрівом до 60-70°С, упарювання екстракту, видалення баластних речовин хлороформом, та вичерпної екстракції цільового продукту порціями етилацетату, підсушування етилацетатних витягів над безводним сульфатом натрію, упарювання, і висадження сухим хлороформом з наступним висушуванням. Проте цей спосіб не передбачує отримання як цільового продукту ліпофільного екстракту, а лише видалення хлороформом ліпофільних баластних речовин при одержанні комплексу поліфенолів. Задачею винаходу є створення способу одержання ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної, в якому шляхом запропонованої сукупності технологічних прийомів та параметрів досягається максимальне виділення ліпофільного екстракту, що має виражену протимікробну та репаративну дії. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі одержання ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної шляхом екстракції подрібненої надземної частини грінделії розчепіреної у фазі середини квітіння розчином етанолу, упарювання у вакуумі та обробки хлорорганічним розчинником додатково передбачено, що вичерпну екстракцію проводять 50% етанолом при співвідношенні сировина - екстрагент 1:9-1:11 з наступним упарюванням, обробкою хлорорганічним розчинником та сушінням. Вибір у якості екстрагенту 50% етанолу було здійснено експериментальним шляхом. Дані експерименту наведені в таблиці 1 Таблиця 1 Кількісний вихід екстрактивних речовин Екстрагент вода 30% етанол Кількісний вихід екстрактивних речовин, % 24,61 28,34 50% етанол 31,43 70% етанол 96% етанол 26,84 18,43 Аналіз даних свідчить, що максимально ефективна екстракція досягається при використанні в якості екстрагенту 50% етанолу. Експериментальнo встановлене співвідношення сировина - екстрагент 1:9-1:11 забезпечує вичерпну екстракцію ліпофільних речовин з грінделії розчепіреної. Вибір хлороформу у якості хлорорганічного розчинника обумовлений його здатністю максимально екстрагувати ліпофільні сполуки грінделії розчепіреної. Експериментально був здійснений вибір сировини в залежності від фази вегетації грінделії розчепіреної. Найбільша кількість ліпофільних сполук накопичується в фазі бутонізації та особливо у фазі квітіння грінделії розчепіреної. Дані кількісного виходу ліпофільного комплексу наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Кількісний вихід комплексів біологічно активних речовин в залежності від фази вегетації грінделії розчепіреної Середина Середина Фаза вегетації бутонізації квітіння Кількісний вихід ліпофільного 6,98 12,95 екстракту, % Кількісний вихід 11,46 14,46 поліфенолів, % З таблиці видно, що фаза середини квітіння грінделії розчепіреної є самою оптимальною для отримання ліпофільного екстракту. Для упарювання екстракту є оптимальним інтервал температур 85-90°С, який обумовлений концентрацією етанолу в екстрагенті. При зменшенні температури збільшується час упарювання, тобто негативного впливу підвищеної температури на біологічно активні речовини екстракту. Збільшення температури може призвести до руйнування термолабільних речовин. Спосіб здійснюється таким чином, що повітрянo-суху надземну частину грінделії розчепіреної вичерпно екстрагують 50% етанолом в співвідношенні сировина - екстрагент 1:9-1:11. Отриманий екстракт упарюють до водного залишку у вакуумі при температурі 85-90°С, який обробляють 6-8 разів порціями хлорорганічного розчинника для виділення ліпофільного екстракту. Екстракт упарюють до видалення хлорорганічного розчинника. Вихід ліпофільного екстракту складає 11-13% в перерахунку на суху сировину. Водний залишок може бути використаний для одержання суми біологічно активних поліфенольних сполук шляхом упарювання та сушіння з виходом 14-15%. Винахід ілюструється прикладом. Приклад 1. 1,7кг подрібненої повітрянo-сухої надземної частини грінделії розчепіреної, зібраної в фазі середини квітіння, вичерпно екстрагували 50% етанолом в співвідношенні сировина-екстрагент 1:10. Отриманий екстракт (25,74л) упарювали до водного залишку (1,5л) у вакуумі при температурі 85-90°С, який обробляли 7 разів порціями хлороформу 3 рази по 500мл, потім по 200мл для виділення ліпофільного екстракту. Отримані 2л хлороформного екстракту упарювали до видалення хлороформу. Вихід ліпофільного комплексу склав 12,95%. Вихід додаткового продукту - суми поліфенольних сполук склав 14,68%. Відомо, що сучасна фармацевтична промисловість не забезпечує потреб хірургів в асортименті лікарських засобів для місцевого лікування ран (Логачев В.К. Стратегия применения мягких лекарственных форм для местного лечения гнойных ран // Вісник фармації.-2002.-2(30).-С.50-51), тому дуже актуальною є проблема створення нового ефективного лікарського засобу на основі нової субстанції - ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної з протимікробною та репаративною активністю, який може бути використано для ефективного лікування септичних та асептичних ран в дерматології та хір ургії. Відома протизапальна та ранозагоювальна мазь "Вундехіл" (Патент України №26600 кл. А61К9/06,35/78, 1999р.), яка містить наступні компоненти: ланолін безводний, нутряний жир, бджолиний віск, карофілен, водноспиртові витяжки кореневищ лапчатки прямостоячої, софори японської, трави деревію, спиртову витяжку прополісу та олію. До недоліків відомого засобу можна віднести багатокомпонентність складу, що веде до технологічних складностей виготовлення багатокомпонентної мазі, при цьому важко передбачити взаємний вплив компонентів, до того ж можливі алергічні реакції на продукти бджільництва. Найближчою до заявленого засобу за фармакологічною дією та вмістом ліпофільного екстракту природного походження є мазь "Ліповіт" (патент України №25669 кл. А61К35/64,9/06 1998р.), яка містить (мас. %) ліпофільний екстракт обніжжя бджолиного 2,9-3,1 масло вазелінове 9,8-10,2 емульгатор №1 8,8-9,2 поліетиленоксид 400 9,8-10,2 бутилоксіанізол 0,145-0,155 бронітрол 0,095-0,105 спирт етиловий ректифікат 4,9-5,1 вода очищена до 100,0 та виявляє репаративну активність. До недоліків відомого засобу можна віднести вірогідну алергійність продуктів бджільництва, що входять до складу цієї мазі та складність технології одержання багатокомпонентної мазі, що потребує спеціального обладнання та спеціальних те хнологічних прийомів. Задачею винаходу є створення нового ефективного лікарського засобу на основі ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної та фармацевтично прийнятних речовин, який має виражену протимікробну та репаративну дії, практично не має побічних дій та протипоказань і може бути використаний при лікуванні септичних та асептичних ран в дерматології та хір ургії. Поставлена задача вирішується таким чином, що у лікарському засобі на основі ліпофільного екстракту природного походження та фармацевтично прийнятних речовин, передбачено використання ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної, як основного діючого компонента при співвідношенні компонентів (мас. %): Ліпофільний екстракт грінделії розчепіреної 0,5-3,5 Фармацевтично прийнятні речовини решта Фармакологічна активність заявленого лікарського засобу визначається ліпофільним екстрактом грінделії розчепіреної як активного діючого компонента. Також вперше запропоновано лікарський засіб у формі мазі на основі ліпофільного екстракту природного походження та поліетиленоксиду 400 в якості компоненту основи, який відрізняється від прототипу тим, що містить ліпофільний екстракт грінделії розчепіреної і додатково - поліетиленоксид 1500 при співвідношенні компонентів (мас. %): Ліпофільний екстракт грінделії розчепіреної 0,5-3,5 Поліетиленоксид 400 54,7-82,0 Поліетиленоксид 1500 решта Експериментальне визначена сукупність ПЕО 400 і ПЕО 1500, яка потенціює дію лікарського засобу, підвищуючи біодоступність його активного діючого компоненту, внаслідок того, що ПЕО виявляють осмотичні властивості і відіграють у даному засобі роль носія біологічно активних речовин. Саме підібране співвідношення ПЕО 400 та ПЕО 1500 забезпечує відмінні технологічні параметри мазі та потенціювання біологічної активності ліофільного екстракту. Збільшення концентрації ліофільного екстракту грінделії розчепіреної вище заявленої не призводить до збільшення фармакологічної дії, а напроти призводить до її зменшення а також погіршує фармацевтичні та споживчі властивості мазі. Нераціонально також зменшення кількості ліпофільного екстракту нижче заявленої, тому що це призводить до зменшення фармакологічної дії. Заявлений лікарський засіб на основі нового вперше одержаного ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної невідомий з інформаційних джерел. Винахід здійснюється таким чином. Заявлений засіб одержують шляхом додавання до ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної фармацевтично прийнятних речовин, зокрема розплавленої суміші полиетиленоксиду 400 та полиетиленоксиду 1500 при додержанні загальних технологічних вимог. Винахід ілюструється прикладами: Приклад 1. Виявлення протимікробної активності проводили використовуючи метод дифузії в агар та набір еталонних штамів: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 28853, Candida albicans ATCC 885-653. Дані експерименту наведені в таблиці 3. Таблиця 3 Результати визначення протимікробної активності ліпофільного екстракту по відношенню до контролю Staphylococcus Escherichia aureus coli Діаметр зон затримки росту, мм 19/12 15/14 Штами мікроорганізмів Bacillus subtilis 30/0 Pseudomonas Candida albicans aeruginosa 15/14 13/12 Встановлена виражена протимікробна активність ліпофільного екстракту грінделії розчепіреної по відношенню до Staphylococcus aureus та Bacillus subtilis, діаметр зон затримки росту Staphylococcus aureus - 19 мм, Bacillus subtilis - 30 мм. Протимікробна активність до мікроорганізмів Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa та Candida albicans перевищує фонову. Приклад 2. Вивчення репаративної активності мазей з ліпофільним екстрактом грінделії розчепіреної проводили на білих нелінійних щурах масою 150-230 г, вирощених в умовах віварію згідно санітарно-гігієнічних норм на стандартному раціоні та стандартизованих за фізіологічними та біохімічними показниками. Як препарат порівняння використовували мазь "Вундехіл", яка має виражену репаративну активність. Ранозагоювальну активність досліджували по відношенню до контрольної групи тварин, які не отримували лікування, на моделі трафаретних ран. Перевагою цього методу є створення стандартних умов формування ран. Під час моделювання ран тварини всіх гр уп були неспокійні та агресивні. З другого дня експерименту починали лікування ран та продовжували до повного рубцювання. Досліджувані мазі наносили на поверхні ран кожен день. Швидкість загоювання ран та стан ран оцінювали кожну добу. Отримані результати статистично обробляли. Дані експерименту наведені в таблиці 4. Таблиця 4 Результати визначення репаративної активності Швидкість Репаративна Лікувальний засіб загоювання ран, активність, дні к контролю % Контроль 25±2,8 1% мазь грінделії 16±2,3x 36 3% мазь грінделії 17±2,4х 32 Мазь "Вундехіл" 18±2,6х 28 Примітка: х - достовірність відмінності по відношенню до даних контрольної групи (p