Спосіб визначення активності дезінфектантів стосовно яєць гостриків

Спосіб визначення ефективності дезінфектантів стосовно яєць гостриків, що включає дію на збудник ентеробіозу хімічною речовиною, який відрізняється тим, що проводиться забір яєць гостриків, матеріал вміщують у склянку з консервантом, отриману рідину з яйцями гостриків розливають у центрифужні пробірки, центрифугують при 1000 об./хв. протягом 5 хв., надосадову рідину видаляють, в отриманій зависі визначають число живих яєць гостриків за морфологічними ознаками і за допомогою 0,2 % розчинів вітальних барвників - метиленового синього або еозину, визначають кількість життєздатних яєць гостриків у 1 краплі зависі за формулою: X=А×48/n або X=А×70/n, де X - кількість живих (мертвих) яєць у 1 краплі зависі; А - кількість живих (мертвих) яєць у 3 лініях мазка; U 2 66313 1 3 Спосіб діагностики життєздатності яєць нематод. Опуб. 27.07.2009. Бюл. №14). Недоліком даного способу є те, що він не може бути застосований для визначення ефективності дезінфектантів на яйця гостриків. Найбільш близьким до способу, що пропонується, є спосіб обробки зовнішнього середовища при стронгілоїдозі 2-3 % розчином полікарбоцину або 3 % розчином прометрину, із розрахунку 1000 2 мол/м при експозиції 5-10 діб (у дослідах використовувалися филярієвидні личинки) (див. Патент України на корисну модель №67079. Спосіб обробки зовнішнього середовища при стронгілоїдозі. Опуб. 15.06.2004. Бюл. №6). Недоліком є те, що даний спосіб застосовується для дезінвазії ґрунту і фекалій, повна загибель филярієвидних личинок досягається на 5-10 добу. Саме тому виникає необхідність у визначенні ефективного дезінфектанту стосовно яєць гострика, що дозволить своєчасно проводити профілактичні заходи, спрямовані на попередження розвитку ентеробіозу завдяки знезараженню об'єктів довкілля від яєць збудника. Технічною задачею є розробка способу визначення ефективності дезінфектантів стосовно яєць гостриків, що надає змогу визначити зміни біологічних властивостей яєць гельмінтів під впливом хімічних речовин, що забезпечить застосування дезінфектантів для оздоровлення осередків ентеробіозу. Спосіб визначення ефективності дезінфектантів стосовно яєць гостриків включає дію на збудник ентеробіозу хімічною речовиною. Новим є те, що проводиться забір яєць гостриків, матеріал вміщують у склянку з консервантом, отриману рідину з яйцями гостриків розливають у центрифужні пробірки, центрифугують при 1000 об./хв. протягом 5 хв., надосадову рідину видаляють, в отриманій зависі визначають число живих яєць гостриків за морфологічними ознаками і за допомогою 0,2 % розчинів вітальних барвників - метиленового синього або еозину, визначають кількість життєздатних яєць гостриків у 1 краплі зависі за формулою: X=А×48/n або X=А×70/n, де X - кількість живих (мертвих) яєць у 1 краплі зависі; А - кількість живих (мертвих) яєць у 3 лініях мазка; на 48 множать при розмірі покривного скла 18×18 мм, на 70 множать при розмірі покривного скла 24×24 мм; n - кількість ліній, в яких підраховано число яєць гостриків; проглядають не менше 300 яєць, при наявності понад 95 % живих яєць гостриків отриманий завис використовують для визначення овоцидної активності дезінфектантів, далі дезінфектант вміщують у центрифужну пробірку, вносять 1-3 краплі зависі яєць гостриків та центрифугують при 1000 об./хв. 5 хв., надосадову рідину видаляють, у пробірку до осаду доливають дистильовану воду і знову промивають, відмиті яйця переносять на предметне скло, додають краплю 0,2 % розчину 66313 4 еозину, продивляються під світловим мікроскопом і підраховують кількість живих і мертвих яєць гостриків, проглядають не менше 300 яєць, визначають співвідношення живих до мертвих яєць гостриків за формулою: Х=n1/n2×100 %, де X - кількість живих (мертвих) яєць, n1 - кількість живих яєць у контрольному зависі; n2 - кількість загиблих яєць у дослідному зависі; при 90-100 % кількості загиблих яєць гостриків роблять висновок, що дезінфектант є ефективним. Перелік фігур: Фіг.1 - Розчинення яйця гострика після дії 2,5 % розчину "Мікробак форте" експозиція 60 хв.; Фіг.2 - Розчинення яйця гострика після дії 2,5 % розчину "Мікробак форте" експозиція 65 хв.; Фіг.3 - Розчинення яйця гострика після дії 2,5 % розчину "Мікробак форте" експозиція 70 хв. Фіг.4 - Контроль яєць гострика у фізіологічному розчині. Для визначення ефективності хімічних речовин брали концентрації і експозиції, рекомендовані у затверджених МОЗ України регламентах дезінфектантів. Дезінфектант необхідної концентрації (2 мл розчину) вміщували у центрифужну пробірку, вносили 1-3 краплі зависі яєць гострика (не менше 1000 живих яєць). Після закінчення дії препарату піпеткою видаляли дезінфектант, у пробірку до верху доливали дистильовану воду, піпеткою відмивали яйця, центрифугували при 3000 об./хв. 5 хв.; надосадову рідину видаляли, у пробірку до осаду доливали дистильовану воду і знову промивали (2-3 рази). Відмиті яйця з пробірки піпеткою переносили на предметне скло, додавали краплю 0,2 % розчину еозину, продивлялися під світловим мікроскопом і підраховували кількість живих і мертвих яєць гострика, проглядали не менше 300 яєць. Решту осаду з пробірки наносили на годинникове скло, яке вміщували у чашку Петрі з вологим фільтрувальним папером на дні. Закриту чашку Петрі вміщували у термостат з температурою 3637 °C. Щоденно проводили спостереження за розвитком яєць: краплю завісу наносили на предметне скло, забарвлювали 0,2 % розчином еозину, накривали покривним склом, проглядали під світловим мікроскопом і підраховували кількість яєць на різних стадіях розвитку і кількість нежиттєздатних (забарвлених) яєць. Спостереження проводили до повної загибелі усіх яєць. Досліджені дезінфектанти мали такі активнодіючі речовини: "Бациллоцид расант" - дидецилдиметиламонію хлорид, "Мікробак форте" - додецилбіспропілентриамін. Дані щодо динаміки загибелі та розвитку яєць гостриків після дії дезінфектантів наведені у таблиці 1. Дані таблиці, під дією "Мікробак форте" в концентраціях 0,1, 0,5 і 1,0 % при експозиції 30 та 60 хв. відбувалась деформація оболонки яєць, зародок втрачав нормальну форму, зневоднювався, витончувався, іноді спостерігався вихід деформованої личинки зі шкарлупи. 5 66313 "Мікробак форте" у концентрації 0,1 % через 30 хв. спричиняв загибель 75,1 % яєць гострика. При дії "Мікробак форте" у концентраціях 0,5 і 1,0 % через 90 та 180 хв. виникала 100 % загибель яєць гострика. У концентрації 2,5 % вже через 30 хв. спостерігалась 100 % загибель яєць гострика (утворювалась велика кількість зернистості, що не давала можливості визначити структуру яєць). При експозиції 90 та 180 хв. спостерігався вихід деформованої личинки із яйця. При дії на яйця гостриків 2,5 і 3,0 % засобу "Мікробак форте" оболонка і зародок набухали і "розчинялися" в препараті (Фіг.1), кількість яєць протягом 60 хв. різко зменшувалася, а ще через 510 хв. вони взагалі зникали. Мінімальна овоцидна активність розчину "Бациллоцид расант" має місце при концентрації 0,1 % і експозиції 30 хв. - 8,2 %, максимальна 33,3 % відповідно. Під дією дезінфектанту "Бациллоцид расант" відбувалися зміни форми і структури яєць гострика, деформація і руйнування шкарлупи і зародка. "Бациллоцид расант" в рекомендованих регламентом концентраціях 1,0 і 2,5 % через 180 хв. викликав 100 % загибель яєць гострика. Під дією "Бациллоцид расант" у концентраціях 0,1, 0,5 і 1,0 % через 60 та 90 хв. відбувалась де 6 формація оболонки яєць і спостерігався вихід деформованої личинки із шкарлупи. На Фіг.4 відображені незмінені яйця гострика у фізіологічному розчині (контроль). Результати проведених досліджень дають змогу підбирати дезінфікуючі речовини відповідної концентрації, з оптимальним часом експозиції для ефективного оздоровлення об'єктів навколишнього середовища, що в свою чергу впливає на рівні захворюваності ентеробіозом та попередження розвитку даного захворювання в організованих колективах, в тому числі дитячих. Даний спосіб відносно простий у використанні, оскільки не потребує великих фінансових затрат чи спеціального обладнання, що забезпечить широке його застосування в практичній паразитології та дезінфекційній справі. Джерела інформації: 1. Абдулпатахова С.Б. Формирование очагов энтеробиоза в детских образовательных учреждениях города Махачкалы: автореф. дис. на соискание науч. степени канд. мед. наук: спец. 03.00.19 "Паразитология" / С.Б. Абдулпатахова - Москва, 2007. - 24 с. 2. Сергиев В.П. Паразитарные болезни человека. - С.-П: Фолиант, 2006. - С. 380-385. Таблиця Динаміка розвитку яєць гостриків після дії дезінфектантів № п/п Препарат 1 "Мікробак форте" 2 "Бацилоцид расант" Концентрація розчину (у %) 0,1 0,5 1,0 2,5 0,1 0,5 1,0 2,5 Виявлено життєздатних яєць гострика (у %) Експозиція (хв.) 30 60 90 180 24,9±1,6 11,0±1,1 7,6±0,8 100 16,7±1,1 7,6±0,9 100 100 4,9±0,7 3,8±0,7 100 100 100 100 100 100 91,8±0,8 86,4±0,4 74,1±1,4 60,4±1,4 83,5±1,1 82,0±1,4 64,9±1,5 50,0±1,4 71,5±1,4 66,7±1,7 55,5±1,6 100 66,7±1,4 60,4±1,8 100 100 7 Комп’ютерна верстка А. Рябко 66313 8 Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601