Спосіб визначення порушень генеративної функції під впливом шкідливих чинників довкілля

Реферат: Спосіб визначення порушень генеративної функції під впливом шкідливих чинників довкілля включає вплив шкідливого чинника на досліджуваний об'єкт, видалення досліджуваного матеріалу, визначення біохімічних показників та обробку отриманих результатів. Як досліджуваний матеріал беруть амніотичну рідину. UA 68686 U (12) UA 68686 U UA 68686 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до досліджень біологічних матеріалів, зокрема до дослідження та аналізу матеріалів шляхом визначення їх біохімічного складу для досліджень функціонального стану розвитку плода і може бути використана для оцінки генотоксичного характеру впливу екзогенних чинників. Відомий спосіб дослідження репродуктивної функції при дії шкідливих чинників довкілля, який полягає у визначенні порушень пренатального розвитку у щурів на 20-й день вагітності за показниками генеративної функції самиць: плодовитості самиць, кількості плодів на одну самку, числа місць імплантації, загальної ембріональної смертності, передімплантаційної та постімплантаційної загибелі, анатомічних характеристик плоду [див.: Л.Г. Андриенко «Эмбриональное развитие белых крыс в условиях эпизодического воздействия МПН=250 мкТл на организм самок». - Гигиена населенных мест. - Вып. 35, 1999. - С. 182-184]. Основним недоліком цього способу є визначення зовнішніх аномалій розвитку ембріонів, яке не дозволяє встановити причини деструктивних змін розвитку плоду, які пов'язані з порушенням активного транспорту метаболічних речовин від матері до плоду. Найбільш близьким до заявленого є спосіб оцінки негативного впливу ксенобіотиків на процеси ембріогенезу шляхом визначення метаболічних змін в двадцятиденних ембріонах, які гомогенізували після диференційного центрифугування та визначали в супернатанті біохімічні показники, за отриманими результатами оцінювали ембріотоксичний ефект впливу негативного фактора [див.: В.О. Охріменко, В.М. Коваленко, Г.М. Шаяхметова, Т.Ф. Бишовець «Стан вільнорадикальних процесів у печінці вагітних щурів та ембріонах за умов токсичної дії ембіхіну та лікувально-профілактичного введення антиоксидантів». Современные проблемы токсикологии, № 4, 200. - С. 19-22]. До недоліків цього способу слід віднести те, що біохімічні показники визначали в суміші зруйнованих клітин різних тканин ембріону, за якими не можна встановити особливості трансплацентарного механізму метаболічних порушень розвитку плоду. В основу способу, який пропонується, поставлено задачу розширення діапазону біологічного матеріалу, який можливо використати для оцінки порушень функціонування генотипа під впливом факторів довкілля. Поставлена задача вирішується тим, що у способі визначення порушень генеративної функції під впливом шкідливих чинників довкілля, що включає вплив шкідливого чинника на досліджуваний об'єкт, видалення досліджуваного матеріалу, визначення біохімічних показників та обробку отриманих результатів, згідно із запропонованим рішенням як біологічний матеріал беруть амніотичну рідину. Приклад здійснення способу. В умовах лабораторного експерименту білих нелінійних статевозрілих щурів-самок масою 180-200 г піддавали дії фізичного фактора довкілля - електромагнітного випромінювання по 8 годин щоденно протягом місяця. Тварини були розподілені на групи, по 7 голів в кожній: I група - контрольна, інтактні тварини, які знаходились в однакових з піддослідними мікрокліматичних умовах та харчовому раціоні; 2 II група - дослідні щури, які піддавались дії ЕМП інтенсивністю 1000 мкВт/см . Через 30 днів дії фактора щурів-самок парували з інтактними самцями. На 20-й день вагітності щурів піддавали евтаназії за методом цервікальної дислокації. Після лапаратомії з навколоплідного міхура виділяли амніотичну рідину. В одержаному матеріалі визначали комплекс біохімічних показників, які характеризують ембріотоксичний ефект впливу чинника. Вміст біохімічних показників, що відображають стан прооксидантно-антиоксидантних процесів, визначали загальноприйнятими методами. Показники перекісного окислення ліпідів - ПОЛ визначали згідно методу І. Д. Стальної. Рівень антиокислювальної системи визначали за вмістом відновленого глутатіону, одного з найважливіших природних антиоксидантів визначали за допомогою реактиву Еллмана, згідно методу Кочетова Т. А. Дослідження проводили на біохімічному аналізаторі «Stat Fax-1904» (США). Результати обробляли методом варіаційної статистики з використанням критерію Стьюдента. Отримані результати виявили в дослідній групі тварин накопичення ТБК-активних продуктів, що свідчило про підвищення перекісного окислення під впливом електромагнітного випромінювання. Поряд з тим спостерігали зменшений вміст глутатіону, показника антиоксидантної системи, порівняно з інтактною групою. Накопичення ТБК-активних продуктів одночасно з падінням антиоксидантного захисту свідчило про підвищення ризику негативного виливу НМВ (табл.). 60 1 UA 68686 U Таблиця Вміст ТБК-активних продуктів ПОЛ та вміст відновленого глутатіону в амніотичній рідині Групи І - контрольна група II - дослідна група Вміст ТБК-активних продуктів ПОЛ, нмоль МДА /мг білка 2,20±0,14 2,99±0,26 Вміст відновленого глутатіону, -1 МкМоль/мг 0,65±0,057 0,48±0,045* Примітка* - р < 0,05. 5 10 Таким чином, особливості зміни біохімічних показників в амніотичній рідині дозволяють виявити молекулярні механізми порушень функціональних процесів внутрішньоутробного розвитку плода та зміни генеративної функції самиць-щурів під впливом шкідливих чинників довкілля. Використання такого способу підвищує точність і інформативність досліджень, сприяє удосконаленню оцінки стану ембріогенезу під впливом різних факторів довкілля. Таким чином, запропонований спосіб характеризується розширенням діапазону видів біологічного матеріалу та скороченням часу на проведення таких досліджень. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Спосіб визначення порушень генеративної функції під впливом шкідливих чинників довкілля, що включає вплив шкідливого чинника на досліджуваний об'єкт, видалення досліджуваного матеріалу, визначення біохімічних показників та обробку отриманих результатів, який відрізняється тим, що як досліджуваний матеріал беруть амніотичну рідину. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2